UNAM

Campus Universitario Siglo XXI

Laboratorio Clínico
Pruebas microbiológicas

MCQ. ARIANA NIETO HERNÁNDEZ

Estudio Microbiológico

 El estudio microbiológico de muestras de tejidos y líquidos corporales permite establecer

el diagnóstico etiológico de diferentes enfermedades infecciosas.
 La confiabilidad de los resultados del estudio microbiológico dependen de la calidad de la
muestra.
Conceptos

 Sustancias infecciosas. Sustancia que contiene un microorganismo viable, como una bacteria, un virus, un parásito,
un hongo o un prión que causa enfermedad en humanos o animales.
 Estéril: objeto o sustancia que está libre de microorganismos y que es incapaz de producir cualquier forma de vida. 
 Especímenes diagnósticos. Cualquier material humano o animal, incluyendo, pero no limitado a, excretas, sangre o
sus componentes, tejidos y fluidos tisulares, recolectados con el propósito de hacer un diagnóstico o estudio
 Asepsia. Ausencia de microorganismos que pueden causar enfermedad infecciosa.
 Antisepsia. Mecanismo o proceso para inhibir o reducir el número de microorganismos de la piel o tejidos vivos. La
técnica aséptica incluye el uso de principios de asepsia, elementos de barrera y equipo estéril.
 Antiséptico. Sustancia química utilizada para realizar antisepsia:
• Clorhexidina 2 – 4%.
• Yodados: jabón al 7%; solución 10%.
• Alcohol al 70%.
Requisitos de una buena muestra

 Representativa del sitio de la infección

 En cantidad suficiente, y tomada en el momento adecuado( idealmente antes del uso de
antibióticos)
 Tomada con técnica aséptica.
 En contenedor adecuado y estéril.
 Transporte óptimo al laboratorio. (tiempo, Temperatura, medios de transporte adecuados)
 Correctamente identificada, nombre completo, fecha de obtención de muestra
 Solicitud de examen completa, nombre con 2 apellidos, cuenta corriente, tipo de muestra,
diagnostico específico
 Precauciones

 Lentes de seguridad o mascarilla con

visera.
 Guantes.
 Cubrebocas.
 Bata.
 Contenedores para especímenes, a
prueba de fugas y de fácil sellamiento.
 Urocultivo
 El urocultivo se realiza para detectar y contar especies microbianas (bacterias
y levaduras) que sean agentes causales de infecciones de vías urinarias.
 Cuidados y recomendaciones
 Realizar higiene de genitales
 Técnica de recolección
 Chorro medio
 Equipo
 Frasco recolector estéril de boca ancha de tapa rosca.
 Transporte
 Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección, no exceder
de dos horas y a temperatura ambiente.
 Orina obtenida a través de sonda

 Cuidados y recomendaciones
 Realizar higiene de genitales
 Técnica de recolección
 Eliminar primer porción de orina y colectar la siguiente en frasco
estéril. En caso de ser permanente se desinfecta .
 Equipo
 Frasco recolector estéril de boca ancha de tapa rosca. Sonda
Nelaton/ Foley. Guantes estériles
 Transporte
 Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección, no
exceder de dos horas y a temperatura ambiente.
 Hemocultivo

 El hemocultivo es un método diagnóstico que se realiza para la detección de

microorganismos en la sangre y así, posteriormente, realizar la identificación y
susceptibilidad antimicrobiana.
 Cuidados y recomendaciones
 Mantener técnica aséptica
 Técnica de recolección
 Para la detección de microorganismos en sangre en sospecha de
bacteriemia se recomienda recolectar entre 20 y 40 ml de sangre (2 a 4
botellas de hemocultivos)
 En niños: Prematuros extremos 0,5 ml. •Neonatos hasta 1 ml. • Lactantes
y niños hasta 6 años 2-3 ml. • Mayores de 6 años 5-10 ml.
 Equipo
 Equipo de asepsia, frascos de hemocultivo, jeringas estériles. Guantes
estériles,
 Transporte
 Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección a temperatura
ambiente
 Punta catéter

 Cuidados y recomendaciones
 Mantener técnica aséptica
 Técnica de recolección
 Prepare la piel del área circundante del sitio de inserción del catéter.
 Retire el catéter y corte de 4 a 5 c.m del trayecto distal del catéter
con pinza estéril, y colóquelo inmediatamente en el tubo estéril.
 Para secreción usar escobillones estériles tome una muestra de la
secreción y coloque en tubo estéril con tapa; y con el otro escobillón
realice un extendido en lámina de vidrio.
 Equipo
 Equipo de asepsia, jeringas estériles, guantes estériles, medio de
transporte
 Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección a
temperatura ambiente
Muestras respiratorias

 Expectoración
 Paciente con tos productiva
 Sin saliva
 Se toma en recipiente de boca ancha

 Aspirado endotraqueal
Condiciones asépticas
Examen copropasitoscopico/Coprocultivo

 Examen Coproparasitoscópico
 Búsqueda de quistes huevos y larvas de parásitos

 Cultivo
 Bacterias enteropatógenas
 Medios de Transporte

 Almacenamiento temporal de los especímenes que

se transportan al laboratorio para su cultivo.
 Mantienen la viabilidad de todos los organismos
presentes en la muestra sin alterar su concentración.
 Sólo contienen buffers y la sales carecen
de carbono, nitrógeno, y factores de crecimiento
orgánico con el fin de evitar la multiplicación
microbiana.
 Medios de transporte utilizados en el aislamiento de
anaerobios deben estar libres de oxígeno .
 Ej Medio Stuart
 Medios de cultivo

 Medios de Transporte
 Medios Generales: no selectivos
 Medios de Enriquecimiento
 Medios Diferenciales
 Medios para Pruebas de Sensibilidad
 Medios para Preservación
Diagnóstico diferencial (tinción)

 Tinción
 Gram
 Baciloscopia (Tinción de Ziehl-Neelsen).
Pruebas bioquímicas
Antibiograma

 Son pruebas microbiológicas que se realizan para determinar la sensibilidad de una colonia
bacteriana a un antibiótico.
 Permite definir para cada antibiótico si la bacteria es sensible (eficaz), intermedio,
resistente (ineficaz)
 Espectrometría de masas

 La identificación bacteriana basada en la espectrometría

de masas, específicamente en el MALDI-TOF MS.
 Se ha sido utilizada como un método rápido para la
identificación de rutina de microorganismos patógenos
mediante el perfil de proteínas.
 La espectrometría de masas es un método que permite la
identificación de una molécula mediante la medición de
su masa en relación a su carga (relación masa/carga).
 Este espectrómetro tiene la capacidad de medir
macromoléculas de hasta 100.000 Dalton, dentro de las
cuales están los péptidos y proteínas que forman parte de
hongos y bacterias. 
 Pruebas moleculares/ Inmunológicas

PCR, qPCR, FISH, Southern

blot, clonación, secuenciación, DNA
etc.

RT-PCR, RT-qPCR, Northern blot,

RNA
Miccroarreglos, SAGE (serial
analysis of gene expression),
RNAseq, etc.

Western Blot, ELISA, electroforesis,

Inmunoflourescencia, Espectrometría
Proteínas
de masas, etc.
 PCR

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio utilizada para

amplificar secuencias de ADN. El método utiliza secuencias cortas de ADN llamados
cebadores para seleccionar la parte del genoma a amplificar.

La temperatura de la muestra se sube y se baja repetidamente para ayudar a la enzima de

replicación del ADN a duplicar la secuencia del ADN que está siendo copiada. Con esta
técnica se pueden producir un billón de copias de la secuencia en estudio en sólo unas
pocas horas.
PCR

95ºC

55ºC

72ºC
Electroforesis de ácidos nucleicos

• Mediante la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su

tamaño, visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de
ácidos nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de
entereza.
 RT-PCR
Reverse Transcriptase.

Se sintetiza una cadena de DNA cDNA) a

partir de una de RNA molde.

Expresión de genes (mRNA).

Genomas virales RNA (HIV, Flu, COVID).

Aplicaciones

 Clasificar organismos
 Genotipificación
 Arqueología molecular
 Detección de mutaciones
 Secuenciación
 Detección de patógenos
 Huella genética
 Ingeniería genética
 Diagnóstico prenatal
 Expresión heteróloga.
 Caso clínico

 Se trata de un varón de 37 años, sin refiere sensación distérmica ni fiebre ni otras

enfermedades previas conocidas ni manifestaciones a nivel sistémico. La
tratamientos habituales, valorado en consulta exploración física era normal.
por cuadro de 10 meses de evolución de
alteraciones en el hábito intestinal; refiere
episodios periódicos mensuales de unos 10-15
días de duración de deposiciones líquidas,
marronáceas, abundantes, sin productos
patológicos, precedidas de dolor abdominal
tipo cólico, con urgencia y tenesmo, y una
pérdida ponderal cuantificada de 12 kg de peso
en este periodo.
 En la anamnesis por aparatos el paciente no
 Se realizó estudio analítico con hemograma completo (incluida fórmula leucocitaria),
bioquímica renal y hepática, parámetros nutricionales, función tiroidea, serología de
enfermedad celiaca y proteinograma que resultaron dentro de la normalidad.
 En el coprocultivo se informó crecimiento de Salmonella typhimurium, sin evidencia de
otros gérmenes enteropatógenos, ni tampoco parásitos ni toxina de C. difficile. Se
completó estudio con gastro y colonoscopia con toma de biopsias sin alteraciones de
significación patológica en el estudio macro ni microscópico.
 El paciente siguió tratamiento con levofloxacino durante 7 días con remisión de la
sintomatología y recuperación ponderal progresiva en las revisiones posteriores.
 1. Mencione que otras bacterias pueden causar infecciones gastrointestinales
 2. Además del coprocultivo que otras estudios de laboratorio pueden realizarse para
establecer el diagnóstico
 3. Medios de cultivo utilizados para realizar el coprocultivo
 4. Prueba inmunológica con la que puede identificarse el antígeno de Salmonella tiphy.