EL ADN, PORTADOR DE LA

INFORMACIÓN GENÉTICA.
REPLICACIÓN DEL ADN
 TIPOS DE ÁCIDOS NUCLEICOS

 Los ácidos nucleicos  almacenamiento, transmisión y expresión de

la información genética codificada en los seres vivos.

 DNA Codifica información para construir todos los RNAs y

proteínas de una célula.
 Ribosómico (rRNA)  componente estructural de
los ribosomas  llevan a cabo la síntesis de
proteínas.
 Mensajero (mRNA)  transporta información desde
 RNA
un gen hasta el ribosoma.
 Transferencia (tRNA)  molécula adaptadora que
traduce la información del mRNA en secuencias de
aminoácidos.
 Dogma central de la Biología Molecular:
ACIDOS NUCLEICOS:
El DNA y RNA son polímeros lineales largos que contienen
información de tal modo que pueda ser transmitida de una
generación a la siguiente

Flujo de la información genética

Transcripción Traducción

ADN ARN Proteínas

Replicación

ADN ARN Proteínas

Transcripción
inversa
Replicación ARN
Del jardín de Mendel a Watson y Crick
1865- Mendel publica sus descubrimientos sobre las leyes básicas de la
herencia
1869- Friedrich Meischer : descubrimiento de la nucleína (ácida y con gran
cantidad de fosfato)
Kossel (1882-1889) y Levene (años 1920) determinaron la composición
química de DNA. Se piensa que es un tetranucleótido.
1928- Fred Griffith observa la transformación de bacterias no patógenas de
neumococos en bacterias patógenas
1944- Avery-Mc Leod y Mc Carty identifican el DNA como el agente
transformante de los experimentos de Griffith
Finales años 40: Erwin Chargaff y col. estudian la composición de bases de
los nucleótidos del DNA de diferentes organismos
1952- Hershey y Chase en sus experimentos con el bacteriófago T2
demostraron las funciones independientes del ácido nucleico y de las
proteinas del virus
Principios de los 50:. Rosalin Franklin y Maurice Wilkins mediante
difreacción de rayos x dedujeron que las moléculas de DNA son helicoidales
con dos periodicidades a lo largo del eje longitudinal
1953 Watson y Crick proponen el modelo de estructura del DNA
 EXPERIMENTO DE GRIFFITH (1928):
La bacteria Pneumococcus  cápsula delgada y brillante de polisacárido 
bacteria patógena (neumonía en los humanos).
Inicio de la interpretación del “principio transformador”.
 ESTUDIOS DE AVERY, MACLEOD Y McCARTY (1944):
 El principio transformante (P. T.), purificado, dio un análisis
químico elemental que coincidía con el del DNA.
 Muchas propiedades y electroforesis del material purificado eran
semejantes a las del DNA.
 No se perdió actividad transformadora al extraer proteínas y
lípidos.
 Tripsina y quimotripsina no afectaban la actividad transformadora.
 Ribonucleasa no tenía ninguna acción sobre el P. T.
 Desoxirribonucleasa disminuía la actividad transformadora.
El experimento de Avery-MacLeod-McCarty:

•Cuando se inyecta a ratones, la cepa encapsulada neumococo es letal.

•La cepa no encapsulada es inocua.
•Al igual que las células muertas por acción del calor de la cepa encapsulada.
•Investigaciones anteriores a cago del bacteriólogo Frederick Griffith habían
demostrado que bacterias virulentas muertas por calor (inofensivas para los
ratones) añadidas a una cepa viva no virulenta transformaban permanentemente
esta última, convirtiéndola en una cepa encapsulada, virulenta y letal.
•Avery extrajo el ADN de neumococos virulentos muertos por calor, eliminando la
proteína en la medida de lo posible, y añadieron este ADN a bacterias no
virulentas. El ADN penetró en las bacterias no virulentas, que resultaron
transformadas permanentemente en una cepa virulenta.
 EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE (1952):
El bacteriófago T2 infecta a la bacteria E. coli. Está formado por
un núcleo central de DNA rodeado de una cubierta proteica.

cabeza

Pared celular bacteriana

collar

vaina

Fibras de la cola

Placa base Salientes de la cola

 El experimento de Hershey-Chase
Se prepararon dos muestras de partículas del bacteriófago T2 marcadas isotópicamente.
Una marcada con 32
P en los grupos fosfatos del ADN y otra con S en los residuos
35

aminoácidos que contienen azufre de las proteínas de la cápside (el ADN no contiene S y
las proteínas víricas no contienen P). Suposiciones separadas de bacterias no marcadas
fueron infectadas con las dos muestras de fagos marcados. Cada suspensión de células
infectadas fue agitada en un homogeneizador para romper la unión entre las cápsides
víricas y las bacterias. Se separaron por centrifugación las cápsides víricas vacías
(“fantasmas”) y las bacterias. Las células infectadas por el fago marcado con P contenían
32

P; el ADN vírico marcado había penetrado en las células, y los fantasmas víricos no
32

contenían radioactividad. Las células infectadas por el fago marcado con 35

S no contenían
radioactividad, mientras que los fantasmas víricos contenían 35
S. Después de la eliminación
de las cubiertas del virus se observó la presencia de progenie vírica en ambas
suspensiones: el mensaje genético para la replicación de los virus debía haber sido
introducido por el ADN de los virus y no por su proteína.
 DNA del fago marcado con 32
P.
Cubierta proteica marcada con 35S.

Separación de las

 La mayor parte del DNA del fago

cabezas víricas vacías

estaba en la bacteria, y el 30% del 32

P
primitivo aparecía en los descendientes.
Experiencia de Hershey y Chase (1952)
 Los DNA tienen distintas composiciones de bases

Leyes de Chargaff (1940-50)

La composición de bases del DNA varía entre especies.

Muestras de DNA aisladas de tejidos diferentes de la misma
especie tienen la misma composición de bases.
La composición de bases del DNA de un especie no varía
con la edad del organismo, ni con su estado nutricional ni con
las condiciones ambientales.
En todos los DNAs independientemente de la especie:
A = T y G =C
por lo tanto, A + G = C + T (purinas=pirimidinas)
Principios de los 50:. Rosalin Franklin y Maurice Wilkins
mediante difracción de rayos x dedujeron que las
moléculas de DNA son helicoidales con dos periodicidades
a lo largo del eje longitudinal
En 1953, Watson y Crick postularon un modelo tridimensional para la
estructura del DNA que tenía en cuenta todos los datos disponibles
 ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL DNA: MODELO DE WATSON Y CRICK

· Características del modelo:

 Dos cadenas

helicoidales, sentidos opuestos

y giro hacia la derecha.

 Bases nitrogenadas en el

interior de la hélice, y

esqueleto covalente en el

exterior.
 (0,34 nm)

 10 (10,5) pares de bases por

vuelta.

Bases adyacentes  3,4 Å.

(3,6 nm)
Rotación  36º.

Diámetro  20 Å.

Paso de rosca  34 Å (36 Å).

(2 nm)
 Puentes de hidrógeno entre los pares de bases de ambas cadenas.

 La secuencia de bases posibles no está restringida.

 Estructura de Watson y Crick  B-DNA.

 Otras variantes:

 A-DNA  Dextrógira. Más ancha y más corta que la forma

B. Unos 11 pb por vuelta y un diámetro de unos 26 Å. Cuando la

humedad relativa se reduce a 75%.

 Z-DNA  Levógira. Unos 12 pb por vuelta y un diámetro de

unos 18 Å. Dinucleótido d(XpYp).

CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS

 Moléculas de DNA  CROMOSOMAS.

 La mayoría de virus y bacterias  único cromosoma.

 Los organismos eucariotas  nº variable (abeja = 16; maiz = 20;

hombre = 46).

 En células somáticas de los eucariotas  dos copias de cada

cromosoma  pares homólogos.

Número haploide = nº de Número diploide = nº total

cromosomas diferentes (N). de cromosomas (2N).
CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)

 La mayor parte de los procariotas son haploides  sólo

una copia de cromosomas.

 La totalidad de la información genética de un

organismo, incluyendo el DNA intergénico  GENOMA.

 Los DNAs son varios órdenes de magnitud más largos

que las estructuras biológicas que los contienen.

CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)
Propiedades de algunas moléculas de DNA existentes en la naturaleza
CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)

 VIRUS:

 Son complejos supramoleculares que pueden autorreplicarse en

células hospedadoras adecuadas.

 El ácido nucleico del virus transporta

el mensaje genético y utiliza las
enzimas y ribosomas del hospedador
para su beneficio.

 Requieren menor información

genética que las células.

 Formas replicativas.
Bacteriófago
CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)
 PROCARIOTAS:

 Una célula de E. coli contiene una sola molécula de DNA

circular doble hebra cerrada covalentemente. Contiene 4x106
pb y una longitud de contorno de 850 veces la longitud de la
célula de E. coli.

Longitud del cromosoma de E. coli

comparada con la longitud de la célula.
CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)
 PROCARIOTAS (cont.):

 PLÁSMIDOS  Portan información genética y se

replican.

Cromosoma de E.
coli.

DNA de una célula lisada de E. coli. Flechas

blancas indican DNA plasmídicos.
CROMOSOMAS Y GENOMAS: TAMAÑOS Y FORMAS (cont.)

 EUCARIOTAS:

 DNA nuclear y DNA en las mitocondrias, con diferente

secuencia de bases.

 Los cloroplastos.

 El DNA mitocondrial codifica a los tRNA, los rRNA y algunas

proteínas, todos ellos mitocondriales.

 El DNA nuclear es lineal. La longitud de contorno total de

todo el DNA de una sola célula humana es de 2m. La
longitud total del DNA contenido en el cuerpo humano adulto,
que consta de 1014 células, es de 2x1014 m.
EMPAQUETAMIENTO EN EUCARIOTAS: ESTRUCTURA NUCLEAR

 Cromosomas eucarioticos  Complejo formado por DNA, RNA

y proteína  CROMATINA.

 La cromatina  Fibras con proteína y DNA en cantidades

iguales en masa, y una pequeña cantidad de RNA.

 Las proteínas  HISTONAS.

 Hay cinco clases de histonas: H1, H2A, H2B, H3 y H4.

 NUCLEOSOMAS.
EMPAQUETAMIENTO EN EUCARIOTAS: ESTRUCTURA NUCLEAR (cont.)

 Los 146 pb que rodean el núcleo

H2
B forman una vuelta y ¾ de
H H
3
4 superhélice levógira 
superenrollamiento solenoidal con
giro a la izquierda.
EMPAQUETAMIENTO EN EUCARIOTAS: ESTRUCTURA NUCLEAR (cont.)

Dos cromátidas (10

vueltas cada una)

Una vuelta
(30 rosetas)

Una roseta Matri

(6 bucles) z
nuclea
r
Un bucle
Estructura de orden superior de los (75000
nucleosomas: la fibra de 30 nm. pb)

Fibra de 30 nm

Cromatina en
forma de
“cuentas de
rosario”

DNA
GENES

· Gen  Parte del cromosoma que determina o afecta a un

solo carácter o fenotipo.

· Beadle y Tatum (1940) expusieron esporas de N. crassa a la

acción de rayos X y de otros agentes que lesionan DNA.

 Gen = fragmento de material genético que determina o

codifica una enzima.

Hipótesis: UN GEN – UNA ENZIMA

UN GEN – UNA PROTEÍNA
UN GEN – UN POLIPÉPTIDO
GEN ESTRUCTURAL
GENES (cont.)

· Gen estructural  Gen que codifica a polipéptidos o RNA;

es decir, codifica la secuencia primaria de algún producto

génico final.

· En el DNA también hay secuencias reguladoras 

contienen señales para identificar el principio y final de los

genes estructurales; o participan en la activación o

desactivación de la transcripción de los genes

estructurales.
GENES (cont.)

· COLINEALIDAD  Alineamiento

secuencial entre los tripletes

codificantes del DNA y los

aminoácidos a los que codifican.

· Suele ocurrir en muchos

procariotas, donde secuencias

reguladoras y estructurales ocupan

gran parte del DNA.

GENES (cont.)

· Grado de repetición de segmentos de DNA eucariótico:

 10%  segmentos cortos de menos de 10pb (millones de

veces)  ALTAMENTE REPETITIVOS.

 20%  segmentos de unos centenares de pb (miles de

veces)  MODERADAMENTE REPETITIVOS.

 70%  SEGMENTOS ÚNICOS y segmentos que sólo se

repiten unas pocas veces.

 Secuencias altamente repetitivas  DNA satélite (composición

de bases diferente). No codifica proteínas o RNA.
GENES (cont.)

 DNA altamente repetitivo 

CENTRÓMEROS y TELÓMEROS.

 Centrómero  Elemento estructural

de los cromosomas que une las dos
cromátidas de cada cromosoma.
 Cada cromosoma  un solo
centrómero.
 Telómeros  Secuencias repetitivas
muy conservadas. En los extremos de
los cromosomas eucarióticos lineales,
a los que ayudan a estabilizarse.
GENES (cont.)

 En genes eucarióticos  INTRONES

(no se traducen).

 Se pierde la colinealidad.

 Los segmentos codificantes 

EXONES.
GENES (cont.)

 MAPAS GENÉTICOS o
MAPAS DE
CROMOSOMAS.

 Minutos  medida
genética.

 Cada minuto  40000pb.

Mapa genético de E.
coli.
TIPOS Y FUNCIÓN DEL RNA

1. RNA de transferencia (tRNA): Transportan los aminoácidos en forma

activada a los ribosomas para la formación de enlaces peptídicos, en
una secuencia dictada por el mRNA molde.

2. RNA ribosómico (rRNA): Componente principal de los ribosomas,

desempeña un papel tanto catalítico como estructural.

3. RNA mensajero (mRNA): Molde para la síntesis de proteínas:

En bacterias: una molécula de mRNA por gen o por grupo de genes.

En eucariotas: un mRNA por cada gen.

Los mRNA procariotas y eucariotas se procesan de forma diferente.

Las células eucariotas contienen pequeñas moléculas de RNA adicionales:
4. RNA nuclear pequeño (snRNA): participa en el empalme de los exones de
RNA
5. Una pequeña molécula de RNA es parte de la partícula que reconoce
señales, un complejo de RNA y proteína citoplasmática que coadyuva a
dirigir las proteínas a sus destinos.
6. MicroRNA (miRNA) moléculas pequeñas de RNA (21 nucleótidos) no
codificadoras que se unen a las moléculas complementarias de mRNA e
inhiben su traducción.
7. RNA pequeños de interferencia (siRNA): pequeñas moléculas de RNA que
se unen al mensajero y facilitan su degradación
8. El RNA también es un componente de la telomerasa, una enzima que
mantiene los telomeros de los cromosomas
tRNA
(A) Estructura secundaria del rRNA 16S
(B) Estructura terciaria del rRNA 16S obtenida por cristalografía de rayos X
RNA: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN

 El RNA, intermediario:

Información genética (en el DNA)   proteínas funcionales.

· Transporta mensaje genético desde el nucleo hasta el citoplasma.

· Una molécula de mRNA por cada gen o grupo de genes que vayan a

expresarse.

· En procariotas, una única molécula de mRNA puede codificar una o

varias cadenas polipeptídicas.

 RNA: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN (cont.)

RNA no
codificant
e

Diagrama esquemático de los mRNA de procariotas

· En procariotas, si el mRNA contiene información para la síntesis de un

polipéptido  MONOCISTRÓNICO.

· Si codifica para dos o más polipéptidos diferentes  POLICISTRÓNICO.

· La mayoría de los mRNA de eucariotas son monocistrónicos.

· El RNA no codificante incluye secuencias reguladoras de la síntesis

proteica.
RNA: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN (cont.)

· Transcripción  una cadena simple de RNA, independientemente de

la clase de RNA.

· Conformación helicoidal con giro a la derecha, con interacciones de

apilamiento de bases (más fuertes entre dos purinas).

· Puede aparearse antiparalelamente con una hebra de otro RNA o

DNA, siguiendo las “reglas” estándar de Watson y Crick.

· También hay G = U.

· Secuencias palindrómicas y autocomplementarias.

· No tiene una estructura secundaria regular y simple.

RNA: ESTRUCTURA Y FUNCIÓN (cont.)

Horquill
a

Saliente

Estructura secundaria del RNA

PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS.
DESNATURALIZACIÓN Y RENATURALIZACIÓN DEL DNA

 Propiedades físicas y químicas de los ácidos nucleicos 

características de sus residuos nucleotídicos.

 Disoluciones de DNA aislado y en estado nativo  muy

viscosas a pH 7,0 y temperatura ambiente.

 DESNATURALIZACIÓN = FUSIÓN.

 Desnaturalización  Rotura de los puentes de hidrógeno y

pérdida de interacciones hidrofóbicas  Se ionizan las bases.

 La fusión NO rompe enlaces covalentes.

PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS.
DESNATURALIZACIÓN Y RENATURALIZACIÓN DEL DNA (cont.)

Temperatur
a de fusión

 Liberación de parejas de bases

 incremento de A260 
EFECTO HIPERCRÓMICO.
PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS.
DESNATURALIZACIÓN Y RENATURALIZACIÓN DEL DNA (cont.)

 Tm depende de la composición de bases.

 Tm (elevado % G+C) > Tm (elevado % A+T).
PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS.
DESNATURALIZACIÓN Y RENATURALIZACIÓN DEL DNA (cont.)

 RENATURALIZACIÓN = HIBRIDACIÓN = TEMPLADO

= ANNEALING.

 Dos hebras completamente separadas  hibridación en dos

pasos: 1º lento; 2º rápido.

 DÚPLEX HÍBRIDOS.

 Localización de genes en un DNA (a

través del mRNA)  “Principio del
ensayo de hibridación”.
HIBRIDACIÓN DEL DNA
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

 Síntesis de una molécula de DNA dúplex hija

utilizando como molde una molécula idéntica de DNA dúplex

parental.

 Proceso complejo, participan muchas enzimas.

 Apareamientos de bases estrictos.

PRIMERA CARACTERÍSTICA IMPORTANTE:

PROCESO SEMICONSERVATIVO
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
(cont.)

 EXPERIMENTO DE
MESELSON-STAHL
(1957)

 Cultivo de células de E.

coli en un medio con 15N

(pesado) y posterior

traslado a un medio con 14N

(ligero).
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

 Punto de separación de las dos hebras  HORQUILLA DE

REPLICACIÓN  tiene lugar la síntesis.

Horquilla
de
replicación

 Podría haber una o dos horquillas de replicación (replicación

unidireccional o replicación bidireccional).
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

 En los cromosomas bacterianos  replicación bidireccional

con un solo origen.

 Comienza en un punto de origen

y transcurre de forma bidireccional

 autorradiografías de DNA de E. coli

en medios con timidina marcada con

tritio (3H)  experimento de J. Cairns

(1963).
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

 Existencia de “ojos” o “lazos” de replicación.

 Los lazos de replicación siempre empiezan en un punto único 

ORIGEN DE REPLICACIÓN.
Estructuras   Replicación
.

Micrografía electrónica realizada por John Cairms.

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

 La síntesis de la nueva hebra SIEMPRE transcurre de 5’ a 3’,

y la cadena molde es leida de 3’ a 5’.

SEGUNDA CARACTERÍSTICA IMPORTANTE:

PROCESO SEMIDISCONTÍNUO

 En los años 60 Hebra conductora o

continua o adelantada

FRAGMENTOS DE
OKAZAKI [longitud
entre 100 y 2000
nucleótidos (según
la célula)]. Hebra rezagada o
discontinua o retardada
POLINUCLEÓTIDOS

 Esqueletos covalentes 
hidrofílicos.

 Grupos fosfato  ionizados

a pH fisiológico.

 Cadenas lineales de
polinucleótidos 
POLARIDAD específica y
extremos 5’ y 3’ bien
diferenciados.
 POLINUCLEÓTIDOS
 Representaciones esquemáticas:

Extremo 5’ Extremo
3’

 pT-G-C-A-TOH

 pTpGpCpApT  Oligonucleótidos  Ácidos

 pTGCAT nucleicos de cadena corta.
 Polinucleótidos  Ácidos nucleicos
de cadena larga.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 CEBADORES DE RNA:

 Todas las DNA polimerasas necesitan un cebador con

un extremo 3’-OH libre para la síntesis de DNA.

 Síntesis DNA  síntesis RNA.

 RNA polimerasa sintetiza “de novo”  primasas.

 DNA naciente está unido covalentemente a un

fragmento corto de RNA.

 Cebadores  10-60 nucleótidos (según especie), y

complementarios a la hebra de DNA molde.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 En E. coli  la RNA polimerasa y la primasa.

 El DNA replicado maduro NO contiene ningún fragmento

de RNA.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 DNA POLIMERASAS:

 Tres enzimas: DNA Pol I, DNA Pol II y DNA Pol III.

 DNA POLIMERASA I:

 Descubierta por A. Kornberg.

 Coloca desoxirribonucleósidos trifosfato en el extremo 3’ de la

hebra que está creciendo  ataque nucleofílico y liberación de PPi.

(DNA)n residuos + dNTP  (DNA)n+1 residuos + PPi

 ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
Desoxinucleósido
5’-trifosfato que se
adiciona

Cadena de
DNA en
crecimiento
(cebador)

Cadena de
DNA Actividad
molde polimerasa

 La enzima se disocia y reasocia del molde cuando está

añadiendo los nucleótidos  PROCESIVIDAD.

(DNA)n residuos + dNTP  (DNA)n+1 residuos + PPi
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 Dos actividades hidrolíticas independientes:

Exonucleasa 3’  5’ Exonucleasa 5’  3’

CORRECCIÓN TRASLADO DE
DE PRUEBAS MELLA
 ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
Exonucleasa 3’  5’
 Dos actividades hidrolíticas
Exonucleasa 5’  3’
independientes:
 Exonucleasa 3’  5’  “CORRECCIÓN DE
PRUEBAS”:
centro activo de
la polimerasa
molde pulgar

cebador

centro activo de
la exonucleasa
3’5’
 ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
 Exonucleasa 5’  3’  “TRASLADO DE MELLA”:

 La actividad exonucleasa 5’ 

3’ también elimina los

cebadores de RNA y rellena

los huecos resultantes con DNA

sintetizado de nuevo.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 DNA POLIMERASA II:

 Descubierta por Kornberg.

 Actúa en la reparación del DNA.

 DNA POLIMERASA III:

 Es la DNA replicasa de E. coli.

 10 subunidades diferentes, y las actividades de

polimerización y de corrección de pruebas localizadas en
subunidades diferentes.
 ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 Holoenzima de la DNA Pol

III.

 No actividad exonucleasa 5’  3’.

 Mayor procesividad que la DNA

Pol I.

 Dos subunidades  alrededor del

DNA.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS
 OTRAS ENZIMAS Y PROTEÍNAS IMPLICADAS:

 La helicasa  separa las hebras de DNA dúplex. Utiliza la energía del

ATP.

 Las topoisomerasas  alivian la tensión topológica. Utilizan la energía

del ATP.

 Las proteínas fijadoras de DNA (SSB)  impiden que las hebras

separadas de DNA molde vuelvan a hibridarse antes de la replicación.
 Sistema DNA replicasa o replisoma  trabajo coordinado de las
proteínas anteriores junto a la holoenzima de la DNA Pol III.

 La DNA ligasa  sella los enlaces fosfodiéster.

Las primasas  enzimas ARN-polimerasas que van a sintetizar los

cebadores de ARN.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS DE LA REPLICACIÓN
EN PROCARIOTAS

 En E. coli se activa el fosfato utilizando NAD+.

 En eucariotas, arqueas y algunos fagos, la ligasa utiliza ATP,
liberando PPi.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS

 Mecanismo:
- Inicio - Elongación - Terminación

 INICIO:
 En E. coli, el origen de replicación es el gen ori C, con 245 pb.
 Dos series de repeticiones cortas.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS

 Cada una de las secuencias en tándem de 13 pb comienza

por GATC, y son ricas en A-T.

 Componente clave del inicio  proteína Dna A = reconoce la

secuencia origen.

 El DNA debe estar superenrollado negativamente.

 Dna B (una helicasa) y Dna C se unen a la Dna A para abrir

la doble hélice.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS

 La porción desenrollada se estabiliza

por las SSB.

 La DNA girasa alivia la tensión

topológica.

 La replicación ha de estar muy

regulada  El inicio es la única fase

regulable.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS
 ELONGACIÓN:
 Síntesis de la hebra conductora  En dirección 5’  3’.

 Síntesis de la hebra retrasada

 Se forma un bucle en el molde
de la hebra retrasada.
Coordinación entre la hebra conductora y la hebra rezagada
 Síntesis del DNA en las hebras conductora y rezagada
Hebra
conductora

Complejo de Hebra
carga de la rezagada
abrazadera

Nueva
subunidad 
cargada en el
cebador de
RNA
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS
(cont.)

Proteína
 Primosoma 
s SSB Primosoma
unidad
fundamental
formada por la
helicasa DNA B y
la primasa en la
síntesis de la
Hebra
Hebra
conductora
rezagada hebra rezagada.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS
(cont.)
 TERMINACIÓN:

 Región de unas 350 Kb con varios sitios de terminación de 20

pb: TerA, TerD y TerB (para la izda), TerC, TerB, TerF y TerG
(para la dcha).

 Sitios de terminación
Horquilla en
Horquilla en contra
de las agujas del
reloj
sentido de las
agujas del polares.
reloj

 Presencia de la proteína
Tus  gran proporción de
aminoácidos básicos.
MECANISMO DE LA REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS
(cont.)

 Los cromosomas circulares

ligados están catenados.

 No es unión covalente.

 La separación requiere una

topoisomerasa tipo II.
REPLICACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO

 Proceso similar al de procariotas, pero con diferencias:

 Los fenómenos que desencadenan la división celular 

fosforilaciones de proteínas cromosómicas específicas catalizadas

por quinasas nucleares (se activan por ciclinas).

 En el inicio hay un conjunto proteico de múltiples

subunidades, el ORC (complejo de reconocimiento del origen).

 Velocidad de movimiento de la horquilla de replicación es

menor (50 nucleótidos/s).

REPLICACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO (cont.)

 Hay múltiples orígenes de replicación (uno cada 30 - 300

kb):

 REPLICÓN  Unidad de replicación.

 La replicación no se origina simultáneamente en todos los

orígenes; sólo grupos de 20 a 80 replicones adyacentes.

 La activación de los replicones comienza por la síntesis de

los cebadores.
REPLICACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO (cont.)

 Hay varios complejos proteicos que actúan:

 RPA (proteína de replicación A): proteína

eucariótica de unión al DNA de cadena sencilla.

 RFC ( factor C de replicación): Desplaza a la DNA

polimerasa  y atrae a PCNA.

 Hay 5 tipos diferentes, al menos, de DNA polimerasas

con funciones y localizaciones diferentes (, , ,  y ):

REPLICACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO (cont.)

DNA Pol   Participa en la replicación del DNA cromosómico.

Inicia la síntesis de los cebadores de los fragmentos de Okazaki.
No posee actividad de “corrección de pruebas”.

DNA Pol   Procesos de reparación de DNA.

DNA Pol   Replicación de DNA mitocondrial.

DNA Pol   Asociada a la proteína PCNA (antígeno nuclear de

proliferación celular), que la estimula. Posee actividad de
“corrección de pruebas”. Síntesis de ambas hebras.

DNA Pol   Similar a la anterior. Participa en reparación.

REPLICACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO (cont.)

DNA polimerasas eucarióticas

TELÓMEROS Y TELOMERASAS

 Características de los telómeros:

 Constituyen los extremos de los cromosomas

eucarióticos lineales.

 Bloques de 1 – 12 Kb, con unidades de 6 – 8 pb de la forma

5’(xTxeGyy 3’entre 1 y 4) repetidas en tándem centenares o miles
3’ AxCy 5’
de veces (DNA repetitivo no codificante) y con extremos cohesivos.

La hebra TG es más larga que la complementaria.

 Secuencias ricas en G en el extremo 3’.

 Aparecen lazos T para estabilizar el telómero.

TELÓMEROS Y TELOMERASAS
(cont.)

Estructura de los lazos

T de los telómeros.
TELÓMEROS Y TELOMERASAS
(cont.)

 Problema:

 Replicación en el extremo 5’ de la hebra rezagada del

telómero no se produce habitualmente  el cebador situado en

dicho extremo no puede reemplazarse por DNA.

 Una RNasa elimina los cebadores restantes  la longitud del

telómero se acortaría con el nº de ciclos celulares.

 Acortamiento de los telómeros  reloj biológico que mide el

proceso de envejecimiento celular.

TELÓMEROS Y TELOMERASAS
(cont.)

 Características de las telomerasas:

 Enzimas encargadas de la replicación de los

telómeros.

 Ribonucleoproteínas con secuencias ricas en C y

complementaria a la secuencia telomérica del extremo 3’.

 Añaden al extremo 3’ de la hebra que se copia

segmentos de TxGy, complementarios a la secuencia interna

CyAx de la telomerasa.
TELÓMEROS Y TELOMERASAS
(cont.)

 Características de las telomerasas (cont.):

 La extensión del 3’ permite que se sintetice un

cebador que, a su vez, dejaría que la DNA Pol sintetizara

completamente la secuencia complementaria del telómero,

sin acortamiento.

 Su acción  longevidad de las células.

 Su activación  aparición del cáncer.

TELÓMEROS Y TELOMERASAS
(cont.)

Secuencia Telómer
cromosómica o

La telomerasa añade
secuencias repetidas al
extremo 3’

Adición del RNA cebador (---) seguido

de la síntesis de la cadena rezagada ( 
)

Ligazón, eliminación del RNA

cebador