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TEMA 14: EL ADN, PORTADOR DE LA INFORMACIN GENTICA.

REPLICACIN DEL ADN


1. El ADN como molcula portadora de la informacin gentica.
2. Flujo de la informacin gentica.
3. Replicacin del ADN.
3.1 Hiptesis sobre la duplicacin del ADN.
3.2 Experimento de Meselson y Sthal.
3.3 Mecanismo de replicacin del ADN.
3.4 Correccin de errores durante la replicacin.
3.5 Diferencias entre el proceso replicativo en procariotas y eucariotas.

1. EL ADN COMO MOLCULA PORTADORA DE LA INFORMACIN GENTICA


Hoy sabemos que la molcula que contiene la informacin de las caractersticas biolgicas
de los seres vivos es el ADN, que junto con las histonas (protenas bsicas) forma los cromosomas.
Sin embargo, la demostracin de que este cido nucleico constitua el material hereditario slo fue
posible gracias a la paciente labor de investigacin de muchos cientficos durante la primera mitad
del siglo XX.

El mdico suizo Friedrich Miescher fue el primero que consigui aislar en 1869, a partir de
ncleos celulares (de leucocitos), una sustancia a la que denomin nucleina formada por
una parte cida (hoy, ADN) y una parte bsica (protenas).

En 1928 cuando F. Griffith buscaba una vacuna contra la neumona provocada por la
bacteria Streptococcus pneumoniae, descubri una sustancia, a la que llam principio
transformante, que contena la informacin gentica.
Griffith trabajaba con dos cepas de bacterias:
- La cepa S ("smooth"= liso) posea una cpsula de polisacridos y al inyectarla
provocaba la muerte de los ratones.
- La cepa R ("rough"= rugoso) careca de cpsula (por falta de una enzima) y
resultaba inofensiva para los ratones.
Tambin comprob experimentalmente que si calentaba la cepa S hasta destruirla y la
inyectaba a los ratones, stos no desarrollaban la enfermedad.
Ms sorprendente an fue el descubrimiento de que si inyectaba conjuntamente la cepa
muerta S y la cepa inofensiva R, los ratones enfermaban y moran, ya que en su sangre se
poda encontrar bacterias S vivas.

Griffith dedujo que las bacterias muertas haban liberado alguna sustancia ("principio
transformante"), que al ser captada por las bacterias inofensivas las transformaba en
virulentas. Es decir, que la informacin gentica se haba transferido de una cepa a otra.
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Biologa.Replicacin ADN
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En esta poca se pensaba que las protenas cromosmicas eran las portadoras de la
informacin gentica y que el ADN tena un papel secundario.
Tuvieron que pasar 16 aos hasta que se consigui identificar la molcula que contena el
material gentico.

En 1944, O.T. Avery, C. Macleod y M. McCarty, dedujeron que el principio transformante de


Griffith era el ADN, pues para que un extracto de clulas S transformara una cepa de clulas
R, el nico componente que deba contener necesariamente era el ADN. Esta capacidad
transformante desapareca cuando se agregaban enzimas que destruan el ADN.

La prueba definitiva fue obtenida en 1952 por Alfred Hershey y Martha Chase, quienes
demostraron de forma concluyente que el ADN, y no una protena, era el material gentico
del bacterifago T2, un virus que ataca a la bacteria E. coli, y que est formado nicamente
por ADN y protenas (las dos sustancias de las que se sospechaba que podra estar formado
el material hereditario).
Las protenas del virus poseen azufre pero no fsforo, mientras que el ADN lleva fsforo,
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pero no azufre. Marcaron radiactivamente un grupo de virus con P y el otro con S. Con
cada grupo infectaron a un cultivo bacteriano diferente, que posteriormente se someti a
agitacin y centrifugacin para separar los restos de virus de las bacterias. Se midi la
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radiactividad, tanto del medio extracelular como del intracelular, y se observ que el S
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haba quedado en el exterior de las clulas mientras que el P haba entrado en las clulas
con el ADN y provocado la formacin de nuevos virus (marcados tambin).

No obstante, quedaba por demostrar cmo un compuesto tan simple poda almacenar y
transmitir tanta informacin. La respuesta la proporcion el progresivo conocimiento de la
estructura del ADN. Desde que, en 1953, James D. Watson y Francis Crick propusieron su
modelo de estructura de doble hlice, que explicaba como se poda almacenar y transmitir la
informacin gentica, ya nadie dud de la funcin y la importancia del ADN.

2. FLUJO DE LA INFORMACIN GENTICA


El ADN es el portador del mensaje gentico y debe:

Transmitir este mensaje de una generacin a otra mediante el proceso de replicacin o


duplicacin. Proceso mediante el cual a partir de una molcula de ADN progenitora se
sintetiza una nueva, originndose as dos molculas de ADN hijas, idnticas a la original.

Expresar este mensaje gentico ya que en l se encuentra la informacin necesaria para


sintetizar las protenas de la clula. La expresin del mensaje gentico se realiza en dos
fases:
- Transcripcin: Proceso por el cual el ADN forma una copia de una parte de su
mensaje, sintetizndose una molcula de ARN mensajero.
- Traduccin. Con la informacin contenida en el ARN mensajero se sintetiza en los
ribosomas una protena.
El flujo de informacin gentica se puede expresar de la siguiente manera:

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Biologa.Replicacin ADN
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Este esquema fue considerado durante muchos aos el "dogma central de la Biologa
Molecular" (enunciado por Crick en 1970).
En la actualidad, esta forma de expresarlo ha tenido que ser modificada, debido a los
mecanismos de replicacin que presentan ciertos virus:
o

Algunos virus (como el del mosaico del tabaco) que tienen su informacin gentica
en forma de ARN poseen una enzima, la ARN replicasa, capaz de fabricar copias de
este ARN.

Los retrovirus almacenan su informacin gentica en una molcula de ARN y cuando


se introducen en una clula son capaces de sintetizar ADN utilizando como molde su
ARN. Para ello emplean una enzima, la transcriptasa inversa o retrotranscriptasa
(el proceso se llama transcripcin inversa). Posteriormente, el ADN transcrito se
integra en el ADN celular.

Tras el descubrimiento del comportamiento de estos virus, el dogma central de la Biologa


Molecular hubo de ser redefinido:

3. REPLICACIN DEL ADN


El ADN, portador de la informacin gentica, debe transmitirse fielmente a cada una de las
clulas hijas obtenidas tras la divisin celular. Por lo tanto, antes de producirse sta, es
imprescindible que el ADN forme una rplica exacta de si mismo, para disponer de dos copias
iguales. Este proceso se conoce con el nombre de replicacin o duplicacin del ADN y tiene lugar
durante la fase S ("sntesis") de la interfase.

3.1 HIPTESIS SOBRE LA DUPLICACIN DEL ADN.


Cuando Watson y Crick elaboraron su modelo de doble hlice en 1953, indicaron tambin
cul podra ser el mecanismo de la replicacin del ADN: separacin de las dos cadenas y cada una
sirve de molde para la sntesis de una nueva cadena complementaria.
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Biologa.Replicacin ADN
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Sin embargo hubo investigadores que propusieron otras hiptesis. Veamos las 3 hiptesis
posibles:

Conservativa. La doble cadena original se mantiene y se sintetiza otra doble cadena


completamente nueva.
Semiconservativa. Es la propuesta por Watson y Crick. En cada molcula hija, una cadena
procede de la molcula progenitora y otra es de nueva sntesis.
Dispersiva. En cada molcula hija existen fragmentos de la progenitora y fragmentos
nuevos.

Unos aos ms tarde, en 1957, Meselson y Stahl demostraron experimentalmente que la


hiptesis correcta era la semiconservativa.

3.2 EXPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL.


Meselson y Stahl cultivaron bacterias (Escherichia coli) en un medio con nitrgeno pesado, el
N. Esto hace que las molculas de ADN sintetizadas con este istopo sean ms densas que las
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construidas con N (el istopo normal), y por lo tanto que se puedan separar mediante
ultracentrifugacin.
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Posteriormente, pasaron algunas bacterias cultivadas con N a un medio con N durante


una media hora, que es el tiempo necesario para que se duplique el ADN bacteriano, lo extrajeron y
lo centrifugaron. Este ADN form una sola banda en el tubo de centrifugacin, en una posicin
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intermedia entre la que ocupaba el ADN con N (ADN "pesado") y el ADN con N (ADN "ligero"). Se
trataba, pues, de un ADN "hbrido" y haba que descartar la hiptesis conservativa.
Si se dejaban las bacterias
durante dos divisiones (2 generacin),
aparecan dos tipos de ADN, uno
hbrido y otro ligero. Si se dejaban
durante tres, el ADN hbrido apareca en
menor proporcin, mientras aumentaba
el ADN ligero. Esto descartaba la
hiptesis dispersiva y demostraba la
semiconservativa.
En 1963 J. Cairns visualiz este
proceso con tcnicas autorradiogrficas. Para ello mantuvo bacterias (E.
coli) en un medio, con timina marcada
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con tritio (H ). Este istopo radiactivo
emite partculas capaces de
impresionar una placa fotogrfica, lo
que permite localizar las nuevas
molculas de ADN.

3.3 MECANISMO DE REPLICACIN DEL ADN.


Aunque la replicacin fue estudiada inicialmente en clulas procariotas, luego se comprob
que el mecanismo es similar en las eucariotas. En ambos casos se dan dos etapas: iniciacin y
elongacin.
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Biologa.Replicacin ADN
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Inicio de la replicacin.
La replicacin comienza en ciertas zonas del ADN
donde existen determinadas secuencias de
nucletidos (abundan las secuencias GATC). A
estos puntos se les llama "origen de replicacin".
El proceso se inicia con una enzima denominada
helicasa que separa las dos hebras de ADN al
romper los puentes de H entre las bases
nitrogenadas complementarias.
Las separaciones de las cadenas, provoca
superenrollamientos en las zonas vecinas, por lo
que existen otras enzimas, las topoisomerasas,
que eliminan la tensin. Para ello cortan una de las
dos hebras (topoisomerasa I) o las dos
(topoisomerasa II o girasa en procariotas) y una vez
eliminadas
las
tensiones,
las
empalman
nuevamente.
Una vez separadas las dos hebras se mantienen
as por la unin de unas protenas SSB ("single
strand binding proteins", protenas de unin a la
hebra sencilla).
En el lugar de origen de la replicacin se ha
formado una burbuja de replicacin en la que hay
dos zonas, con forma de Y, denominadas
horquillas de replicacin, donde se van a
sintetizar las nuevas hebras de ADN. La burbuja de
replicacin se va extendiendo a lo largo del
cromosoma en los dos sentidos, de ah que se diga
que la replicacin es bidireccional.

Alargamiento.
A continuacin comienza la sntesis de las hebras complementarias sobre cada una de las
originales. El proceso se lleva a cabo mediante la enzima ADN polimerasa III, que tiene las
siguientes caractersticas:

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Recorre la hebra molde en sentido 3' 5'.


Va uniendo los nuevos nucletidos en sentido 5' 3'. Para ello utiliza nucletidos
trifosfato. La energa necesaria para el proceso, la proporcionan los propios
nucletidos, al perder dos de su grupos fosfato (PPi).
Ninguna ADN polimerasa puede iniciar la sntesis por si misma, pues slo puede
aadir nucletidos sobre el extremo 3' libre de una cadena de polinucletidos. Por
este motivo es necesario que exista una cadena corta de ARN (de unos 40 o 50
nucletidos) denominada cebador o primer.
El cebador es sintetizado por la enzima primasa (una ARN-polimerasa).

Dado que la ADN polimerasa III recorre el ADN molde en sentido 3' 5', la sntesis de una
de las hebras es continua y se denomina hebra conductora. Sin embargo, la otra hebra es
antiparalela, por lo que la ADN polimerasa debera recorrerla en sentido 5' 3', aadiendo
nucletidos a la hebra en formacin en sentido 3' 5', lo cual no es posible. La sntesis, en
este caso, es discontinua y se produce en segmentos separados. Esta cadena se llama
hebra retardada, pues su sntesis es ms lenta que la hebra conductora. Los segmentos de
ADN sintetizados de este modo se conocen como fragmentos de Okazaki (cada fragmento
est formado por el cebador de ARN y unos 1000 o 2000 nucletidos de ADN).

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Posteriormente, interviene la ADN polimerasa I, que primero elimina los segmentos de ARN
cebador, gracias a su accin exonucleasa (rotura de enlaces fosfodister a partir de un
extremo libre), y luego, gracias a su actividad polimerasa, rellena los huecos con ADN.
Finalmente, hay otra enzima, la ADN ligasa que une todos los fragmentos.

Por ltimo, cada hebra recin sintetizada y la que ha servido de molde se enrollan originando
una doble hlice.
A pesar de todas estas etapas, el proceso de replicacin es muy rpido. En E. coli, por
ejemplo, se unen 45.000 nucletidos /minuto.

3.4 CORRECCIN DE ERRORES DURANTE LA REPLICACIN.


Durante la replicacin es frecuente que se produzcan errores y se incorporen nucletidos que
no tengan correctamente apareadas sus bases. La ADN polimerasa I y III actan entonces como
exonucleasas eliminando los nucletidos mal colocados (la I y III tienen actividad exonucleasa 3' 5'
y la I adems 5' 3', lo que le permite eliminar el ARN cebador).
Aunque el mecanismo de correccin de errores es muy eficiente, a veces queda alguno sin
corregir. Esos errores (mutaciones) pueden ser importantes en la evolucin.

3.5 DIFERENCIAS ENTRE EL PROCESO REPLICATIVO EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS.


El proceso de replicacin es similar en las bacterias y en las clulas eucariotas. Cabe
destacar algunas diferencias:
-

El ADN en los eucariotas est asociado a histonas. Se ha comprobado que las histonas
originales se mantienen en la hebra conductora, mientras que se forman nuevas histonas
que se unen a la hebra de ADN retardada.

El tamao de los fragmentos de Okazaki es menor en los organismos eucariotas (100 a 200
nucletidos) que en los procariotas (1000 a 2000) nucletidos).

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Biologa.Replicacin ADN
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Existen 3 ADN polimerasas en los procariotas (I, II y III, la II interviene en procesos de


reparacin del ADN) y 5 en los eucariotas: , , , , y , (la interviene en la replicacin del
ADN mitocondrial).
Teniendo en cuenta que la longitud del ADN de un cromosoma eucaritico es mucho mayor
que la del ADN bacteriano, y que, seguramente debido a la presencia de histonas, el proceso
es bastante ms lento, en los eucariotas no hay un solo origen de replicacin, sino cientos.
Cada unidad de replicacin se denomina replicn.

Los cromosomas de las clulas eucariotas al ser lineales presentan un problema aadido,
que no se da en el ADN circular de las bacterias.
En eucariotas el proceso de replicacin del ADN se va completando normalmente hasta
llegar a los extremos del cromosoma, los telmeros. En ellos, cuando se elimina el ltimo ARN
cebador, la hebra retardada quedar incompleta, ya que la ADN polimerasa no podr rellenar el
hueco, al ser incapaz de sintetizar en direccin 3' 5'. Este acortamiento de los telmeros (calculado
entre 50 y 200 pb por cada divisin celular) supone la disminucin progresiva de la longitud del
cromosoma, fenmeno asociado a los procesos de envejecimiento y muerte celular.
El ADN de los telmeros est constituido por secuencias de seis nucletidos que se repiten
numerosas veces. La hebra de extremo 3' es rica en guanina (AGGGTT en la especie humana) y
lgicamente, la del extremo 5' es rica en citosina. A medida que las clulas se van dividiendo (y
envejeciendo), los telmeros se van acortando. Pero dado el carcter repetitivo y no codificante de
stos, inicialmente esa prdida de los extremos de cada cromosoma no tiene consecuencias, pero
llega un momento en que afecta a regiones codificantes, entonces la funcin celular se ve
perjudicada y la clula termina por morir.
En las clulas madre de los gametos, las clulas cancerosas o las de los tejidos
embrionarios, que se dividen continuamente, existe una enzima, llamada telomerasa y constituida
por una parte proteica y un ARN, que acta como molde para alargar la hebra del extremo 3'
(saliente). Esta prolongacin, catalizada por la telomerasa, sirve como molde, para la sntesis, por
parte de la ADN polimerasa alfa, del extremo 5' que qued incompleto.

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ACTIVIDADES
1.- Es siempre el ADN la molcula portadora de la informacin gentica? Justifica tu respuesta.
2.- En qu consiste, bsicamente, la duplicacin del ADN y cul es su importancia biolgica? Se
puede considerar este proceso como sinnimo de sntesis de ADN? Razona la respuesta.
3.- En el experimento de Meselson y Stahl, qu porcentaje de ADN de densidad hbrida se
obtiene despus de una generacin de crecimiento de las bacterias en 14N?
a) 0
b) 25
c) 50

d) 75
e) 100

4.- Colorea las cadenas en cada uno de los casos descritos en el experimento de Meselson y
Stahl. Utiliza para ello el esquema que aparece en la pgina 4.
5.- Cul habra sido el resultado del experimento de Meselson y Stahl si el ADN se replicase
segn la hiptesis conservativa?
6.- Explica que resultados se habran obtenido en la 2 y 3 generacin del experimento anterior
si la hiptesis correcta fuese la dispersiva.
7.- En la replicacin de una molcula de ADN de doble hebra, y despus de tres ciclos de
replicacin, cuntas hebras de nueva sntesis habrn aparecido? Razona la respuesta.
8.- La ADN polimerasa precisa nucletidos trifosfato a pesar de que los incorpora a la cadena
que se est sintetizando, como nucletidos monofosfato. Sabiendo que los enlaces entre los
grupos fosfato son muy ricos en energa, qu explicacin puedes dar a este hecho?
9. En el siguiente esquema de una horquilla de replicacin identifica las letras:

A.
B.
C.
D.
E.

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10.- En este esquema se observa una doble cadena de ADN en la que una hebra ha sufrido
la prdida de un segmento:

a) Qu tipo de enlaces se han roto?


b) Cules sern los nucletidos que se aadirn, en qu orden, y a partir de qu
extremo?
c) Qu enzimas actuaran?
11.- Completa la tabla siguiente sobre las enzimas que intervienen en la duplicacin del ADN
bacteriano:

ENZIMA

FUNCIN

ADN polimerasa I
Topoisomerasa I
Topoisomerasa II
Primasa
ADN ligasa
Helicasa
ADN polimerasa III

12.- Actualmente, una de las lneas de investigacin ms importante es la bsqueda de


inhibidores de la telomerasa humana. Sabras explicar por qu?

ACTIVIDADES PAU
13.- Indique qu es la replicacin. Describa este proceso. Qu significa que la replicacin
es semiconservativa? (Junio 2003- Opcin A)

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