INGENIERÍA GENÉTICA

Prof. Víctor Vásquez-Villalobos, Dr. Ing.

En 1953 James Dewey Watson y
Francis Compton Crick publicaron
en la revista Nature publicaron un
artículo con el gráfico de la doble
hélice del DNA.

«The moment I saw the DNA

model … I realized it is the key of
understanding to all problems of
biology»
Erwin Chargaff, determinó con ayuda de
métodos cromatográficos, que la relación
de adenina a timina y de guanina a
citosina es siempre alrededor de 1 (regla
de Chargaff) a partir del modelo de DNA
de Watson y Crick.

Cuyo apareamiento es esencial para la

transferencia exacta de la información
genética
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGÍA: DNA

Gregor Mendel (1822 Friedrich Miescher

– 1884) formuló las (1844 – 1895) Theodore Oswald
primeras leyes de la descubrió en 1869 Avery (1877- 1955)
los ácidos demostró, que el DNA
herencia.
nucléicos. es el portador de la
herencia.

Rosalind Franklin
(1920 – 1958). El doble ganador de
Realizaron los Maurice Wilkins
(1916 – 2004), premio Nobel Linus
primeros estudios
premio nobel con Pauling (1901 –
físicos con el DNA
por difracción de Watson y Crick. 1994).
rayos X.
 DNA: La doble hélice porta el material hereditario

DNA: Es el cerebro celular que regula el

número y naturaleza de cada tipo de
estructura y composición celular.
Transmite la información hereditaria .
Determina la estructura de las proteínas, que a
través de enzimas determinará el resto de
funciones celulares.

Doble hélice del DNA.

 Del DNA a la proteína

Estructura de la doble Cómo se transfiere la

hélice del DNA. secuencia de bases del DNA
al RNAm y desde los
ribosomas se traduce a una
secuencia de aminoácidos.
 Las DNA polimerasas catalizan la replicación de la doble hebra de DNA

Antes de la división celular (mitosis) se realiza el proceso de REPLICACIÓN

obteniéndose una copia exacta del mismo. Con este propósito el DNA se abre
como cremallera en 2 hebras sencillas. De cada una de las dos hebras la DNA
polimerasa sintetiza una nueva hebra, quedando al final dos nuevas hélices.

DNA polimerasa: la
hebra matriz se destaca
en purpura, y la nueva
hebra formada en verde.
En ingeniería genética
la PCR utiliza DNA-
polimerasas (llamadas
también Taq-
polimerasas) estables
al calor de la bacteria
La aislo Arthur
Thermus aquaticus,
Kornberg de
asilada de la fuentes
Escherichia coli,
de agua hirviente del
premio nobel
Parque Nacional de
1959
Yellowstone
INICIO DE REPLICACIÓN

HORQUILLA DE REPLICACIÓN
INICIO DE REPLICACIÓN - PROCARIOTAS
INICIO DE REPLICACIÓN - EUCARIOTAS
FINALIZACIÓN
CORRECCIÓN DE ERRORES
Acción de las ADN LIGASAS:
• Se encargan de unir los extremos de dos fragmentos de
ADN.
 No todos los genes constan de DNA: los virus RNA utilizan RNA de una
única hebra

El genoma de casi todos los organismos

consta de DNA. Sin embargo, algunos virus
utilizan RNA, rodeado de una envoltura
proteica.

El virus de mosaico del tabaco (VMT),

consta de una molécula de RNA de una
única hebra con 6395 nucleótidos y una
envoltura proteica con 2130 subunidades
idénticas.

VMT con subunidades

proteicas y una molécula de
RNA de una única hebra.
Otra clase de virus RNA son los retrovirus. En ellos el rio de
información genética no fluye como es habitual, desde el
DNA al RNA, sino en dirección contraria (retro). A los
retrovirus pertenecen el VIH causante del sida y algunos
virus precursores de cáncer.

Contienen dos copias de RNA de una única hebra. Al entrar

en la célula atacada, este RNA se reescribe a DNA
mediante una enzima viral que entra conjuntamente, la
transcriptasa inversa y la doble hebra de DNA formada de
este modo entra en el genoma cromosómico del huésped.
En 1940 George W. Beadle, Edward L. Tatum y Joshua
Lederberg (fundadores de la genética de fagos)
postularon: «un gen conduce a la producción de una
enzima (proteína)». Obtuvieron el premio nobel de
medicina o medicina en 1959).

Las proteínas no se producen directamente en el DNA

El DNA genómico de la bacteria procariotas nada

libremente en el plasma.

El DNA eucarioto se encuentra encerrado en el núcleo

celular. A parte las eucariotas poseen también DNA
mitocondrial, y las células vegetales lo contienen en los
cloroplastos. La proteínas se originan fuera del núcleo en
el citoplasma en los ribosomas
Biosíntesis proteica en
procariotas

Biosíntesis proteica en
eucariotas
Traducción del RNAm a proteína
en el ribosoma

Robert W. Holley investigó en

RNAt, premio nobel en 1968
 REGULACIÓN
DIFERENCIA DEL PROCESO EUCARIOTAS - PROCARIOTAS
 Eucariotas: separación espacial y temporal.
 Procariotas: traducción simultánea con transcripción.
En 1955, microbiólogos japoneses aislaron durante la una epidemia de disentería
una cepa de la bacteria Shigella resistente a antibióticos.

Explicación

Los plásmidos, permanecen libres en las células bacterianas fuera del DNA
principal.

Por su pequeño tamaño los plásmidos son un medio ideal de transporte de

material hereditario
 PRIMEROS EXPERIMENTOS DE INGENIERÍA GENÉTICA

Se utilizo el plásmido pSC 101: posee el gen tc que hace a E, coli resistente al
antibiótico tetraciclina

psC 102: posee un gen resistente a la kanamicina (gen ka)

El primer experimento de
ingeniería genética
Instalación y clonación del ADN de la rana africana
en bacterias
 Insulina humana a partir de bacterias

En 1921 en Toronto el aislamiento de la

insulina de páncreas animal.

En 1922 se probo la clínicamente la

hormona con éxito y la compañía
americana Eli Lilly & Co. La produjo bajo
en nombre de «Iletin».

Posteriormente lo haría Hoechst bajo el

nombre de Sanofi-Aventis, asi mismo
las compañías Novo Nordish y Berlín
Chemie en Alemania,

En 1936 la compañía Hoechst fue la

primera que consiguió producir hormona
cristalina concentrada.
En 1953 Fredrick Sanger
determinó la estructura de
la insulina.

Entre 1963 y 1965 la

síntesis total de la insulina

En 1969 se utilizó el
análisis estructural por
rayos X para calificar su
estructura espacial
En 1980, 17 voluntarios recibieron inyecciones de insulina
proveniente de bacterias producida por ingeniería genética
en el Guy’s Hospital de Londres. Antes se obtenía del
páncreas de toros y cerdos.

Posteriormente se autorizó su aplicación médica.

Diabetes tipo I:

Se produce por la autodestrucción autoinmunitaria de las

células que forman insulina en el páncreas y empieza antes
de los 20 años de vida.

Diabetes tipo II:

Aparece a la mitad de la vida (90% de los diabéticos) sobre

todo en personas obesas
Síntesis de la proinsulina de ratas mediante bacterias
 Expresión de la insulina en dos
cepas separadas de Escherichia coli
la Insulina es una pequeña hormona que consta de dos
cadenas protéicas, de las cuales una tiene 21
aminoácidos (cadena A) y la otra tiene 30 (cadena B).

La función de la cadena C consiste en alinear

correctamente una ras otra las cadenas A y B. Sin ese
correcto plegamiento en el espacio, la insulina no
sería completamente activa.
Estructura espacial de la molécula de insulina con puentes disulfuro
(amarillo) y hélices β de las cadenas A y B.
 Proceso general de
recombinación y clonación
Enzimas de restricción: ejemplos
Algunos vectores de clonación
 Síntesis de la
vitamina C con
células de
Erwininia
manipuladas
genéticamente
Síntesis de
vitamina C por
Reichstein
 La selección de levaduras para uso industrial requiere de una
caracterización para su inequívoca identificación y diferenciación
 ¿Se impone la levadura inoculada durante la fermentación?

B-VIII
B-VIII
T-73
T-73

B-VI
B-VI
B-II
B-II
m

m
MODIFICACIÓN GENÉTICA DE “STARTERS”
Levaduras vínicas modificadas genéticamente mediante técnicas del DNA recombinante
Gen expresado
Toxina “killer” K1
Pectato liasa
Poligalacturonsas
β-(1,4)-endoglucanas
β-(1,4)-endoglucanas
Arabinofuranosidasa
β-glucosidasa
Xilanasa
L(+)-lactato deshidroge-
nasa
Malato permeasa y enzi-
ma málico
Disminución de la acidez
del vino
Sobreexpresión de glice-
rol-3-fosfato dehidroge-
nasa
Expresión de bacteriocinas
de Pediococcus acidilactici
y Leuconostoc carnosum
Efecto en la levadura vínica o en el vino
Ventaja ecológica de la cepa al inocular
Problemas de filtración e incremento del aroma afrutado
ND
Incremento del aroma afrutado
Incremento del aroma afrutado
Incremento del aroma afrutado
Incremento del aroma afrutado e incremento de resveratrol
Incremento del aroma afrutado
Aumenta la acidez del vino
Disminución de la acidez del vino
Incremento de los aromas secundarios: ésteres
Incremento de la producción de glicerol
Inhibición del crecimiento de bacterias alterantes del vino
Por primera vez, científicos del Australian
Wine Research Institute han secuenciado
el genoma de una
levadura vínica, caracterizando las
“recetas de la vida” que dan forma a este
microorganismo amigo
del enólogo.
Este trabajo prepara el camino para el
desarrollo de nuevas cepas de levaduras,
que potencialmente
podrían contribuir con soluciones
innovadoras al problema de paradas
fermentativas, y aumentar las
opciones que tiene el enólogo de modelar
el vino de manera de obtener el contenido
alcohólico y el
perfil aromático deseados.
INGENIERÍA GENÉTICA

Prof. Víctor Vásquez-Villalobos, Dr. Ing.