EXTRACCIÓN DE ADN HUMANO

BIOLOGIA MOLECULAR
1- CONSULTAR LA METODOLOGIA UTILIZADA PARA LA EXTRACCIÓN DE
ADN HUMANO.
La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de poder
estudiarlo, analizarlo o manipularlo. En la investigación biomédica el ADN se
utiliza para analizar y diagnosticar a pacientes con enfermedades
neurodegenerativas, cáncer, infecciones. Entre otras.
para conocer sobre los fundamentos y las bases moleculares debemos entender
que se debe pasar por diferentes etapas como la fase pre-analítica lo que
equivale a la elección de la muestra su transporte y almacenamiento, después
tenemos una etapa post-analítica que engloba donde se interpreta y documenta
el resultado. La fase pre-analítica donde se obtiene la muestra es una de las más
importantes debido a que es la que nos permite obtener una muestra adecuada,
pura todo lo anterior se verá reflejado en la segunda etapa.
MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN
1. GRADIENTE CON CSCL (CLORURO DE CESIO)
Se utiliza para separar ADN por densidad
2. EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN

2.Purificación 3. Precipitación
1. Extracción

LISIS- La lisis celular es el
proceso de ruptura de la
membrana celular de
células
 Agregando etanol
Eliminación de absoluto
proteínas y lípidos de  Centrifugar
membrana celular,  Limpiar con etanol
estos se eliminan al 70%
agregando solventes  Luego centrifugar y
como: se limpia el etanol

 Fenol
Se puede realizar con
 Debe agitarse
métodos:
(aspecto de
 Químicos emulsión)
 Físicos  Centrifugarse
 Enzimáticos  Reenvasar
 cloroformo
 MÉTODOS RELACIONADOS

 QPCR O PCR EN TIEMPO REAL

La PCR en tiempo real es una modalidad del PCR de punto final, donde la
acumulación de ADN amplificado es detectado y cuantificado a medida que la
reacción avanza, es decir: “En tiempo real” esto se logra incorporando una
molécula fluorescente que se asocia al ADN amplificado, donde el incremento
de esta fluorescencia es la proporcional al incremento de la cantidad de
moléculas de ADN amplificadas en la reacción.

 APLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS
las aplicaciones médicas de la biotecnología, a lo largo de la historia, han sido
el desarrollo de antibióticos, la producción de vacunas o de fármacos como la
insulina.

 SECUENCIACIÓN
La secuenciación del ADN permite conocer el orden de los nucleótidos de un
fragmento de ADN provenientes de una PCR. Para llevar a cabo este método es
necesario utilizar una proteína llamada polimerasa de ADN, nucleótidos estándar
y nucleótidos modificados. Estos elementos producirán cadenas de ADN de
diferentes longitudes, donde el último nucleótido será uno de los modificados. El
resultado de este método es un conjunto de fragmentos de ADN de diferentes
longitudes, los cuales posteriormente serán separados por tamaño utilizando
electroforesis a través de un tubo capilar. Durante la separación se va
obteniendo la secuencia de cada fragmento de ADN al ir observando cada
nucleótido marcado. En la investigación biomédica, la secuenciación se realiza
para conocer las variaciones en la secuencia de un fragmento de ADN o un gen
específico de un individuo; esto es esencial para realizar un diagnóstico de
alguna enfermedad.

 GENOTIPIFICACIÓN

1. Método de Extracción de ADN (Extracción de ADN. Nivel básico) o Método

de Extracción de ARN total (Extracción de ARN total: Nivel Básico): por medio
de este método se obtienen los ácidos nucleicos a partir de células que pueden
provenir de cualquier tejido. Para cualquiera de los dos métodos es necesario
analizar la calidad de la extracción realizando un gel de electroforesis. Si se
desea extraer ARN total es necesario separar el ARNm.

1.1 Método de Aislamiento de ARNm y síntesis de ADN (Aislamiento de ARNm

y síntesis de ADN, Nivel Básico): En este método se separa el ARN mensajero
(ARNm) a partir de una muestra de ARN total y posteriormente se analiza con
una electroforesis.
2. Método Electroforesis en gel (Electroforesis (gel de agarosa y poliacrilamida)
Nivel básico): este método se utiliza para separar fragmentos de ADN o ARN;
dicha separación permite conocer la calidad de nuestras muestras.

3. Método de PCR (PCR Nivel: básico): este método permite obtener un gran
número de copias de ADN a partir de un ADN molde; multiplicar la cantidad de
ADN es necesario para la secuenciación.

4. Método de electroforesis gel de agarosa (Electroforesis (gel de agarosa y

poliacrilamida) Nivel básico): método que se utiliza para separar fragmentos de
ADN provenientes de la PCR. Este paso es necesario para eliminar
componentes no deseados, esto se hace solo recortando la banda deseada y
posteriormente se purifica.

5. Purificación de banda: en este paso se recorta una sección del gel que
contiene nuestro fragmento de ADN y se procede a su purificación. Es
recomendable cargar dos muestras en el mismo gel, una marcada con un
colorante y otra no (que es la que será recortada). Por lo general se utilizan
métodos comerciales para su purificación.

6. Método de Cuantificación del ADN: después de la purificación del ADN es

necesaria su cuantificación. Para esto se utiliza un aparato llamado
espectrofotómetro, el cual mide la concentración en una muestra.

7. Método Secuenciación convencional Nivel básico): con este método se

conoce la secuencia de los nucleótidos del ADN.

8. Análisis de la secuencia y sus variaciones (Bioinformática): este paso se

puede hacer de manera manual en el caso tener pocas muestras o empleando
herramientas bioinformáticas cuando se utilizan varias secuencias.

Salida/Resultado Secuencia de un gen o fragmento de ADN o ADN con los

análisis de sus variaciones.

Nombre estudiante: Yeison Lucas Gómez

1 Semestre de Enfermería
Código: 110202019