Métodos y técnicas de cultivo bacteriano

Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en un

laboratorio se denomina medio de cultivo

Algunas bacterias pueden crecer en cualquier medio de cultivo; otras requieren

medios especiales y otras no pueden crecer en ninguno de los medios inertes
existente hasta ahora. Los microbios que se introducen en un medio de cultivo
para que comiencen a crecer se denominan inóculo. Los microbios que crecen y
se multiplican en un medio de cultivo se denominan cultivo.

Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energía y

elementos químicos para la síntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo
de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en
autótrofos si es el CO2 atmosférico (microorganismos que foto sintetizan) y
heterótrofos si utilizan carbono orgánico.

Se dispone de una amplia variedad de medios de cultivo para el crecimiento de

microorganismos en el laboratorio. Casi todos esos medios, disponibles en el
comercio, están construidos por componentes mezclados con anterioridad y solo
precisan del agregado de agua y luego esterilización. De manera continua se
elaboran y revisan medios de cultivo para ser utilizados en el aislamiento y la
identificación de bacterias que son de interés para los investigadores en los
campos de la alimentación, el agua y la microbiología clínica.

Medio Químico

Un medio químicamente definido es uno de los que se conoce la composición

química exacta. En el caso de un organismo quimio heterótrofo, el medio
químicamente bien definido debe contener factores de crecimiento orgánicos que
actúen como fuente de carbono y energía. Es decir; para favorecer el crecimiento
microbiano un medio debe proporcionar una fuente de energía asi como fuentes
de carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y cualquier otro factor de crecimiento que el
organismo no pueda sintetizar.

Medio Complejo

Los medios complejos son compuestos por nutrientes como extractos de

levaduras, carne o plantas o digeridos de proteínas de estas y otras fuentes.
 En los medios complejos los requerimientos de energía, carbono, nitrógeno y
azufre de los microorganismos son aportados sobre todo por las proteínas. Las
proteínas son moléculas grandes y relativamente insolubles que solo la minoría de
los microorganismos puede utilizar de forma directiva, si bien una digestión parcial
por ácidos y enzimas las reducen en cadenas más cortas de aminoácidos
denominadas peptonas (proteína parcialmente digerida). La mayoría de las
bacterias pueden digerir estos fragmentos pequeños y solubles.

Medio Reductor

El cultivo de bacterias anaeróbicas plantea un problema especial. Dado que los

anaeróbicos podrían morir por exposición al oxígeno, deben emplearse medios
especiales denominados medios reductores. Estos medios contienen ingredientes,
como el tioglicolato de sodio, que se combinan químicamente con el oxígeno
disuelto y producen una disminución del oxígeno en el medio de cultivo. Para
lograr el desarrollo y el mantenimiento de cultivos de cultivos puros de anaerobios
estrictos los microbiólogos utilizan medios reductores fraccionados en tubos de
ensayo comunes con tapas bien ajustadas. Estos medios se calientan justo antes
de su empleo para eliminar el oxígeno absorbido.

En una técnica relativamente nueva que se utiliza para proporcionar un

ambiente de anaerobiosis se emplea la enzima oxirrasa, que reduce el oxígeno a
agua. La oxirrasa es una enzima respiratoria proveniente de las membranas
plasmáticas de ciertas bacterias. Cuando se les agrega a los medios de
crecimiento transforma la placa de Petri, oxyplate, en una cámara para
anaerobiosis independiente. Este método que evita la necesidad de aparatos más
incomodos, se está utilizando cada vez más en los laboratorios de microbiología
clínica.

Técnicas especiales de cultivo

Muchas bacterias nunca han podido ser cultivadas de modo exitoso en los medios
artificiales de laboratorio. En el caso del bacilo de la lepra, Mycobacterium leprae,
suele utilizarse el crecimiento en armadillos, que poseen una temperatura
corporal relativamente baja equivalente a la que requiere el microorganismo.

Medios selectivos y diferenciales

Los medios selectivos están diseñados para suprimir el crecimiento de

bacterias no deseadas y favorecer el crecimiento de las deseadas

Los medios diferenciales permiten distinguir con mayor facilidad las colonias
del microorganismo deseado de otras colonias que crecen en la misma placa. De
manera similar, los cultivos puros de microorganismos tienen reacciones
identificables con los medios diferenciales, sea en tubos o en placas.

Cultivo de enriquecimiento

En ocasiones es necesario utilizarlo porque las bacterias presentes en pequeña

cantidad pueden no detectarse, en especial si hay otras bacterias presentes en
cantidades mucho mayores. Esto sucede con frecuencia en muestras de suelo o
materia fecal. El medio para un cultivo de enriquecimiento suele ser líquido y
proporciona nutrientes y condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de
un microbio particular pero no de otros. En este sentido también es un medio
selectivo, pero está destinado a aumentar las cantidades muy pequeñas del
microorganismo deseado hasta niveles detectables.