UNIVERSIDAD VIZCAYA DE LAS AMÉRICAS.

LICENCIATURA EN NUTRICIÓN.

MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLÓGICO

MICROBIOLOGÍA.

Marcela Aimeé Lasso Sulú

MÉTODOS DE SIEMBRA

El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan

alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno, los
métodos de siembra más empleados son los siguientes:

1. Siembra por estrías.

2. Siembra por punción.
3. Siembra volumétrica.
4. Siembra masiva.

Siembra por estrías

Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo

sólidos distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en
forma de cuña.(Slam)

Instrumentos de siembra a emplear.

Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas

ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos
en la misma siembra.

Siembra por punción

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y

el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las
manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares
que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la
aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.

Fig. 124: Siembra por punción

Siembra volumétrica

Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo

volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos.
Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de
Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece
de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la
sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla
respectivamente el volumen que será sembrado.

Siembra masiva

Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de

Driglaski. En este caso la gota de muestra líquida se esparce con la espátula
por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiendo un movimiento en
espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso
embebido de un cultivo líquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la
superficie de una placa de agar.

Métodos de cultivo:

 Método de diseminación en placa: método de recuento en placa en el

cual el inóculo se esparce sobre la superficie de un medio de cultivo
sólido.
Es un procedimiento en el cual el investigador disemina una mezcla
diluida de células sobre una superficie de agar, utiliza una varilla doblada
de vidrio esterilizada, de tal forma que cada célula crece en su propia
colonia separada. Los cultivos son incubados por un periodo de tiempo
específico. En el medio sólido aparece un crecimiento
macroscópicamente visible o un grupo de microorganismos, cada
colonia representando un cultivo puro. Luego de que las colonias han
crecido, son contadas y se calcula el número de bacterias en la muestra
original.

 Método de la placa vertida: método de inoculación de un medio

nutritivo sólido mediante el mezclado de las bacterias en el medio
fundido y el vertido del medio en una placa de Petri para que solidifique.
Se utiliza extensivamente con bacterias y hongos y también puede
producir colonias aisladas. Se prepara una muestra bacteriológica
diluida. El investigador introduce una pequeña cantidad dentro de un
plato de petri vacío. Se vierte agar derretido dentro del plato de petri que
contiene la muestra. El agar y la muestra se mezclan meticulosamente al
cubrir el plato e inclinarlo y revolverlo suavemente. Se le da tiempo para
que el agar se vuelva gel mientras se asienta sobre la superficie plana.
Los platos recubiertos se invierten y se dejan incubar por un periodo de
tiempo específico. Las colonias son luego observadas y contadas, y se
registra la información.
  Método de siembra en estría en placa: método de aislamiento en
cultivo mediante la siembra en estrías de los microorganismos sobre la
superficie de un medio de cultivo sólido.

 Método del número más probable: determinación estadística del

número de coliformes por 100ml de agua o 100 g de alimento.
El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de
la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento
de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban
las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos.
Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas
procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos
que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

Bibliografía:
 Tortora, G., Funke, B. y Case, C. Introducción a la microbiología 9ª Ed.;
Médica Panamericana: Buenos Aires, 2007; pp. 159-174.