BIOQUMICA II 2017 I I

PRCTICA N 7
UROGNESIS DEL HGADO
I.-Objetivos:
Identificar la formacin de rea en el hgado.
Evidenciar la accin de la arginasa con la obtencin de urea.
Cuantificar la cantidad de nitrgeno inorgnico presente en la muestra.
II.-Resultados:
2.1. Experimento N1: Obtencin de la enzima arginasa a partir de hgado
de rata

Pesar 5g Enjuagar con KCl Homogenizar con: Centrifugar a 3000

de hgado 0.15M, secar 10ml de solucin KCl rpm por 10min.
con papel filtro 0.15M-MnCl2 5 mM Conservar a 2C-8C

2.2. Experimento N1: Activacin de la enzima arginasa

Tabla N1: Datos de reactivos y parmetros para activacin de la enzima arginasa
Enzima Buffer Temperatura de Tiempo de
incubacin incubacin
1ml Arginasa 1ml Glicina 0.2M 37C 30 minutos
pH=9

2.3. Experimento N1: Estudio de la actividad enzimtica y determinacin

de amoniaco
Tabla N2: Reactivos para el estudio de la actividad enzimtica
Reactivos Tubo1 Tubo 2
Arginina 0.1M 0.8ml 0.8ml
Buffer glicina 0.5ml 0.5ml
0.2M pH=9
Arginasa 0.5ml --------
Agua destilada -------- 0.5ml

Tabla N3: Reactivos para la cuantificacin de amoniaco

Reactivos 1 2 S.T. B
Sobrenadante 10ul 10ul ----- -----
Estndar de nitrgeno ----- ----- 10ul -----

Ureasa ----- ----- 1ml -----

Proporcin

Reactivo 1 Agua ----- ----- ----- 10ul

de trabajo destilada
Reactivo de 1ml 1ml 1ml 1ml
20 salicilato

Reactivo de hipoclorito 1ml 1ml 1ml 1ml

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Tabla N4: Datos de las absorbancias para la cuantificacin del amoniaco

Tubo 1 Tubo 2 S.T. B
Absorbancia 0.997 0.306 0.638 0

Fig. 1. Coloracin de los tubos para la cuantificacin de amoniaco

a) Clculos matemticos para la determinacin amoniaco

[.]
Frmula a utilizar : [M.P.]mg/dl= x Abs.M.P
.
Datos: [N]=30mg/dl

Abs. M.P.= Abs. tubo1-Abs.tub2

Abs. M.P.= 0.997-0.306=0.691

[.]
[Amoniaco] mg/dl= x Abs.M.P
.

30/
[Amoniaco] mg/dl= x 0.691
0.638

[Amoniaco] mg/dl=32.49mg/dl

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III.-Discusin:

La ureognesis es un proceso metablico exclusivamente heptico mediante el

cual el amonaco es convertido en urea. Visto de forma global el proceso de la
ureognesis consiste en la conversin de dos molculas de amonaco y una de
anhdrido carbnico en una molcula de urea. El significado biolgico de esta va
metablica consiste en que el amonaco, de elevada toxicidad, es convertido en urea
que posee una toxicidad mucho ms baja. (1) Una vez formada la urea en el hgado esta
alcanza los riones a travs de la sangre y es excretada por la orina. La ureognesis es
el mecanismo ms eficiente que poseemos para eliminar amonaco y diariamente
excretamos alrededor de 25 a 30 g de este compuesto, con lo cual se logra mantener la
amonemia dentro de sus lmites normales. Sin embargo, el proceso de la ureognesis
es mucho ms complejo de lo que pudiera pensarse a partir de la simplicidad de la
reaccin global de formacin de urea. La sntesis de urea transcurre en el hgado
mediante una secuencia de reacciones enzimticas denominada ciclo de la urea o ciclo
de Krebs-Henseleit, (ver Fig. N2) permite anular el efecto txico del NH4+ al
transformarlo en urea. (2)

Fig. 2. Reacciones del ciclo de la rea

En la Tabla N1 nos muestra los parmetros para la activacin de la enzima arginasa,

uno de ellos es la temperatura a 37C, sin embargo, para mantener la estabilidad de la
en enzima est el buffer glicina a pH=9, este grado pH se puede alcanzar con NaOH
diluido a pequeas cantidades, como se puede mostrar en la Fig.N3. La glicina tiene
dos etapas de disociacin: (1) la prdida de H + del grupo carboxlico cido a pH bajo; y
(2) la prdida de H + del grupo amino ms bsico a pH alto (3), por ende, se debe tener
cuidado a la hora de alcalinizar.

Fig. 3. Titulacin de la glicina con NaOH

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En la Tabla N3 nos muestra los reactivos para determinar la cuantificacin del

amoniaco, el que debe resaltarse es el reactivo de trabajo. Est formado por reactivo
1 (cido saliclico 5mM, nitroprusiato 5mM) y reactivo 2 (ureasa, estabilizantes) en
proporcin de 20:1 respectivamente, cabe resaltar que debe mantenerse a 2C-8C.
Adems, se demostr la actividad enzimtica de la arginasa y ureasa. Estas enzimas
juegan un rol importante en el metabolismo del nitrgeno proteico en los seres humanos,
por ejemplo, en la ureognesis que facilitan la sntesis y excrecin de la urea para anular
el efecto txico del amonio. La arginasa metaboliza a la enzima arginina y la ureasa
desdobla a la urea en NH3, CO2 agua. (4) (ver Fig. 4 y Fig. 5). Esta actividad enzimtica
se cuantifico con la presencia del reactivo hipoclorito dando diferentes coloraciones (ver
Fig. 1) y funcin a la absorbancia.

Fig. 4. Actividad enzimtica de la arginasa

Fig. 4. Actividad enzimtica de la ureasa

En cuanto al valor de amoniaco obtenido de 32.49mg/dl, es un valor aceptable
comparndole con la concentracin estndar de Nitrgeno ureico de 30mg/dl (dato de
referencia del laboratorio), cabe resaltar que cada laboratorio debe establecer su propio
rango de referencia en funcin a su poblacin de trabajo, adems este valor puede ser
afectado por la temperatura, pH, concentracin del sustrato, enzima. (5)
IV.-Conclusiones:
Se evidencio la sntesis de urea en el hgado de rata.
La arginasa es una enzima que acta sobre la arginina bajo ciertos parmetros
para obtener urea, est por accin de la ureasa se obtiene amoniaco
La cantidad de amoniaco obtenido en 5 g de hgado de rata es 32,49 mg/dl
IV.-Referencias bibliogrficas:
1. HUNTINGTON GB, ARCHIBEQUE SL. Practical aspects of urea and ammonia metabolism
in ruminants. J Anim Sci. 2000; 78: 742:749.
2. REYNOLDS CK. Metabolism of nitrogenous compounds by ruminant liver. J Nutr 1992;
122: 850-854.
3. BERGMAN EN, HOGUE DE. Glucose turnover and oxidation rates in lactating sheep. Am
J Physiol 1967; 213: 1378-1384.
4. SINCLAIR KD, SINCLAIR LA, ROBINSON JJ. Nitrogen metabolism and fertility in cattle: I.
Adaptative changes in intake and metabolism to diets differing in their rate of energy
and nitrogen release in the rumen. J Anim Sci 2000; 78: 2659-2669.
5. NOLAN JV, NORTON BW, LENG RA. Further studies of the dynamics of nitrogen
metabolism in sheep. Br J Nutr 1976; 35: 127-147.

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Bioqumica ii
Alumno: Acua Leiva Rodrigo
1. cules son los efectos ergognicos de la arginina?

En estudios recientes se ha demostrado que la suplementacin con L-

arginina mejoraba la capacidad fsica durante la prctica del ciclismo antes de
llegar al nivel de fatiga neuromuscular. Sin embargo, los dos estudios con
suplementacin de L-arginina en ciclistas con mucha experiencia en el
entrenamiento de resistencia no encontraron cambios en el tiempo de fatiga
ni en los picos de VO2 mx.(11). Estos datos, pese a ser limitados, nos sugieren
que los propias adaptaciones que se producen con el ejercicio crnico de
resistencia hacen que los posibles beneficios de la suplementacin con L-
arginina sean mnimos. Adems es importante que en el futuro los estudios
vayan encaminados a observar los cambios en el consumo de nutrientes con la
suplementacin de L-arginina, y no tanto en el flujo sanguneo, pues ste no es
tan importante sobre el rendimiento deportivo como lo es el intercambio de
nutrientes.
Fuente: https://www.entrenamiento.com/nutricion/suplementos/funciona-la-l-
arginina/#ixzz4vd0JV9t1

Fuente: https://es.slideshare.net/Danipazgf/arginina-15254919