Manejo de material, microscopio y coloraciones - Medios de cultivo y tipos de siembra

Integrantes:

Paola Chaves Grisales

Laura Valentina Pérez

Tecnología en química farmacéutica – Corporación tecnológica de Bogotá

Tecnología farmacéutica

Karen Andrea Peñalosa Galindo

Docente

15 de septiembre de 2022
INTRODUCCIÓN

Medios de cultivo

Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio se

denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien en casi cualquier medio de
cultivo; otras requieren medios especiales y otras no pueden crecer en ninguno de los medios
inertes existentes hasta ahora. Los microbios que se introducen en un medio de cultivo para que
comiencen a crecer se denominan inóculos. Los microorganismos que crecen y se multiplican en
un medio de cultivo se denominan cultivo.

Supóngase que se desea cultivar un microorganismo determinado, tal vez los microbios
provenientes de una muestra clínica particular. ¿Qué criterios debe satisfacer el medio de cultivo?
Primero, debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo especifico que se desea
desarrollar. También debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y
una concentración conveniente de oxígeno, tal vez ausente por completo. El medio que se va a
sembrar es estéril, es decir, en un principio no debe contener microorganismos viables, de modo
que el cultivo contenga solo microbios (y su esencia) que se agreguen al medio. Por último, el
medio de cultivo sembrado debe incubarse a la temperatura correcta.

Imagen 1. Medios de cultivo

Tipos de medios de cultivo

 Medios usuales: contienen las sustancias nutritivas mínimas para el crecimiento de

bacterias metabólicamente no exigentes, como el colibacilo o los estafilococos. Se
preparan con una infusión o extracto de carne, añadiéndose agar cuando se desee medio
sólido.
 Medios enriquecidos: Son medios usuales a los que se les añade suero, sangre o fatores
esenciales específicos, como vitaminas o cofactores. Permiten el crecimiento de las
bacterias exigentes en requerimientos nutritivos, como los estreptococos, el neumococo,
el gonococo y otras que no crecen bien en los medios usuales.
 Medios de aislamiento: utilizado para aislar las bacterias por técnica de agotamiento han
de ser sólidos, según se ha explicado anteriormente.
  Medios selectivos: cuando de una mezcla bacteriana interesa aislar específicamente un
solo tipo de bacteria que esta en escasa cantidad, es recomendable utilizar medios
selectivos.
 Medios de enriquecimiento: En algún caso puede ser útil sembrar previamente la muestra
en un medio de enriquecimiento. Son medios líquidos que cumplen la misma función que
los selectivos; es decir, permiten la multiplicación de la bacteria buscada e inhiben las
otras.
 Medios selectivo-diferencial: en los medios selectivos siempre crecen algunas bacterias
diferentes a la buscada, por ello, para diferenciar las distintas colonias, se añade a los
medios selectivos sustancias que confieren un color diferente a las colonias según la
distinta actividad metabólica de las bacterias que la conforman.

Imagen 2. Tipos de medio de cultivo

Incubación

Cada tipo de bacteria requiere para su multiplicación y temperatura y atmosfera adecuada. Por
ello una vez sembrados los medios de cultivo, deben llevarse a la estufa, en cuyo interior existe la
temperatura optima para el crecimiento de las bacterias, que es de 35°C a 37°C para la mayoría de
los intereses.
 Imagen 3. Incubadora

SIEMBRA

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio

adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación. Una vez
sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
 
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
  
1. Que se efectúen asépticamente
2. Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
3. Que se realicen solo los manipuleos indispensables
4. Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o
bien Flujo laminar.
 
 
Tipos de siembra (placa)
 
 Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo
se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.

 Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez
solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa
anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos
anaerobios facultativos y microaerofílicos.

 Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se
deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de
Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo
de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

 Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja
solidificar.

 Siembra volumétrica: Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida

cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por
ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede
determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin
embargo, la orina empleada en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede
determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado.

 Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la

espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula
 por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiendo un movimiento en espiral.
La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un
cultivo líquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de
agar.
 

PREGUNTAS

1. ¿Cuál es el fundamento del medio de cultivo Sabouraud y como se clasificaría?

Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente

los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la
tripteína y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto
contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el desarrollo
bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el agente solidificante.
Puede ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.

2. ¿Cuál es el fundamento del medio de cultivo nutritivo y como se clasificaría?

Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de carne

constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el
agente solidificante. Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para
favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y
permite una clara visualización de las reacciones de hemólisis.

3. ¿Por qué se deben esterilizar los medios de cultivo antes de inocular uno o varios
microorganismos?

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material
y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como el proceso
mediante el cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de
un objeto, medio o superficie y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el
material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización,
entre ellos: calor (seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones
y aplicación de gas de óxido de etileno (para jeringas y cajas de plástico).

4. ¿Qué macromoléculas se originan a partir de los elementos químicos esenciales para la

célula?

Las proteinas son biopolímeros (macromoléculas orgánicas), de elevado peso molecular,

constituidas basicamente por carbono (C), hidrógeno (H), oxígeno (O) y nitrógeno (N); aunque
pueden contener también azufre (S) y fósforo (P) y, en menor proporción, hierro (Fe), cobre
(Cu), magnesio (Mg), yodo (Y), etc...

Estos elementos químicos se agrupan para formar unidades estructurales (monómeros)

llamados AMINOACIDOS, a los cuales podriamos considerar como los "ladrillos de los edificios
moleculares protéicos". Estos edificios macromoleculares se construyen y desmoronan con
 gran facilidad dentro de las células, y a ello debe precisamente la materia viva su capacidad de
crecimiento, reparación y regulación.

5. ¿las levaduras son hongos?

Si, Las levaduras son hongos unicelulares, también denominados hongos imperfectos porque
no desarrollan micelio.

6. ¿se pueden observar levaduras en el objetivo de 40K del microscopio óptico?

7. ¿las levaduras y los hongos filamentosos se incuban a la misma temperatura?

HONGOS (ORGANISMOS CELULARES HETERÓTROFOS CON PARED CELULAR) Los hongos se

pueden estudiar usando los mismos métodos generales de cultivo de las bacterias. Casi
todos crecen aeróbicamente en los medios de cultivo usuales de bacteriología, a
temperaturas entre 20 y 30° C; como crecen mas lento que las bacterias, cuando se
quieren aislar de un inóculo que posea ambos tipos de microorganismos, es necesario
ajustar las condiciones de manera de inhibir el crecimiento de las bacterias y favorecer el
de los hongos, esto puede hacerse de varias maneras: a) Acidificando el medio (pH 5,6). b)
Incorporando al medio una concentración de azúcar relativamente alta (4%). c)
Añadiéndole al medio un agente antibacteriano.

8. ¿a que temperatura se incuban usualmente las bacterias?

Temperatura entre 20 y 30° C

* Fundamento de un medio de cultivo: se refiere a cuál es la función de cada uno

de los componentes que integran el medio de cultivo.

BIBLIOGRAFÍA

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