LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGÍA

PRÁCTICA N° 3

TITULO
Preparación de medios de cultivo

ESTUDIANTES QUE INTEGRAN EL GRUPO

Emilio Villarreal, Ariana Herrera y Lesly Rivadeneira

1. OBJETIVO GENERAL
Aplicar los métodos para la elaboración de los diferentes métodos de cultivos y realizar en los
laboratorios de microbiología.
1.1 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Identificar los tipos de medio de cultivo y cual es su utilidad.
 Reconocer el procedimiento en general para preparar mediante metodologías indicadas.
 Determinar la clasificación de los medios de cultivo.
 Diferenciar los medios de cultivo utilizados.
2. INTRODUCCIÓN
“Son preparados que intentan reproducir artificialmente las condiciones del hábitat natural de los
agentes bacterianos tratando de cubrir todas sus necesidades nutricionales para su multiplicación”
( García et al., 2002, p. 83).
Esto con el fin de aislar las diferentes especies bacterianas, sustentar su crecimiento, identificarlas y
llevar a cabo un estudio de las mismas, siguiendo condiciones de cultivo tales como: temperatura,
atmosfera, presión osmótica, humedad, pH, entre otros.

Se van a clasifica
1. Según su contenido
- Definidos o sintéticos: Se conoce su composición química ya que se usan productos
puros e individualizados.
- No sintéticos o empíricos: No se conoce su composición exacta ya que se preparan con
extractos de carne, levadura, etc.

2. Según su estado o consistencia

- Líquidos: Disueltos en agua sin sustancias solidificantes (como caldos).
- Semisólidos: Contiene agar en escasa proporción.
- Solidos: Agregando agar al medio líquido en cantidad suficiente para solidificarlo.

3. Según su utilización o función

- Básicos o comunes: Aptos para bacterias no exigentes, con nutrientes mínimos.
- Enriquecidos: Suplementados con sustancias nutritivas para bacterias exigentes.
- Selectivos: Permiten el crecimiento de ciertas bacterias e inhiben otras.
- Diferenciales: Sustancias que pondrán en manifiesto visualmente la presencia de
alguna característica bioquímica de la bacteria.
 - Identificación: Destinados a comprobar alguna cualidad específica para reconocer la
identidad de un microorganismo.
- Transporte: Aquellas que no van a procesarse de inmediato y deban ser trasladadas.

3. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

Etanol Tiras pH fix 0-14
Sangre Guantes de látex
Agua destilada Torniquete elástico
Agar MacConkey Tubo vacutainer edta
Agar Base (sangre) Recipiente de plástico
Cuchara de plástico Aguja toma múltiple 21 G
Caja bipetri plástica Probeta de plástico 100 ml
Capsula de extracción de sangre Frasco de vidrio tapa azul 100 ml
4. PROCEDIMIENTOS

Procedimiento Agar MacConkey

 Pesar la cantidad de medio de cultivo especificada por el fabricante para preparar agar
MacConkey.
 Llenar probeta de plástico con 50 ml de agua destilada.
 Colocar 50 ml de agua destilada en un frasco adecuado (prelimpiado y rotulado) de vidrio y
tapa azul que servirá como recipiente para la esterilización del medio de cultivo.
 Disolver el medio nutritivo dentro del frasco de tapa azul con agua destilada hasta alcanzar
el volumen total.
 Calentar la mezcla con ayuda de microondas hasta la completa disolución del medio y polvo.
 Poner el frasco con la mezcla en placa de calor hasta que el líquido hasta empiece su punto
de ebullición.
 Sacar el frasco y dejar enfriar hasta que se encuentre en un estado manejable.
 Repartir los medios sólidos aún cuando estén fundidos en caja bipetri.
 Esperar hasta que la mezcla enfríe y solidifique en su envase definitivo.

Los medios de cultivo se esterilizan en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

Procedimiento Agar base sangre

 Extraer sangre.
 Llenar probeta de plástico con 50 ml de agua destilada.
 Pesar la cantidad de medio de cultivo especificada por el fabricante para preparar agar de
base sangre.
 Colocar 50 ml de agua destilada en un frasco de vidrio y tapa azul que servirá como
recipiente para la esterilización del medio de cultivo.
 Disolver el medio nutritivo dentro del frasco de tapa azul hasta alcanzar el volumen total.
 Calentar la mezcla con ayuda de microondas hasta la completa disolución del medio y polvo.
 Poner el frasco con la mezcla en placa de calor hasta que el líquido hasta empiece su punto
de ebullición.
 Sacar el frasco y dejar enfriar hasta que se encuentre en un estado manejable.
 Una vez preparada la base de agar sangre, agregar 5 ml de sangre humana con el medio más
frío, aunque aún derretido.
 Aumentar la sangre de manera aséptica y lenta para lograr homogeneidad.
 Repartir los medios sólidos aún cuando estén fundidos en caja bipetri.
 Esperar hasta que la mezcla enfríe y solidifique en su envase definitivo.

5. OBSERVACIONES

Imagen 1. Colocar 50 ml de agua destilada en Imagen 2. Preparación de agar MacConkey.

probeta de plastico.

Imagen 3. Preparación agar MacConkey después Imagen 4. Preparación MacConkey en caja bipetri
de ser calentado en microondas y placa de calor. plástica.

Imagen 5. Colocar Agar Base (sangre) en la mitad Imagen 6. Resultado final caja bipetri con agar
restante. sangre y MacConkey
 Imagen 7. Demostración pico de flauta. Imagen 8. Autoclave utilizado para esterilizar.

Etanol Caja Petri con cepa Streptococcus spp.

6. DISCUSIÓN
Los medios de cultivo consisten en una combinación de nutrientes que, en concentraciones
apropiadas y bajo condiciones físicas ideales, posibilitan el desarrollo de microorganismos.(Gutiérrez.
S. 2001).

Agar macConkey, este medio se emplea para aislar bacilos Gram negativos de fácil crecimiento, tanto
aerobios como anaerobios facultativos, a partir de muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las
especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae pueden desarrollarse en este medio.
(MacFaddin, 1985).
Agar base sangre es un medio de cultivo empleado para aislar diversos microorganismos, que al
agregar sangre facilita el crecimiento de aquellos con requerimientos nutricionales más exigentes y
posibilita la observación clara de reacciones de hemólisis.

7. CONCLUSIONES
 En la práctica se pudo observar dos diferentes preparaciones de cultivo , siendo estos: agar
sangre y MacConkey , útiles para el aislamiento y crecimiento de bacterias.
 Los medios de cultivo deben prepararse según las indicaciones de cada fabricante siguiendo
un orden para llevan a cabo para una correcta elaboración. Dentro del proceso se pueden
establecer 4 pasos: pesado, disolución, esterilización y dispensado del medio de cultivo.
 Los medios de cultivo pueden ser clasificados según su: consistencia (líquidos, solidos y
semisólidos) , contenido ( complejos, sintéticos y semisintéticos) y función (enriquecimiento,
selectivos, diferenciales, transporte e identificación)
 En esta práctica pudimos ver cuáles son los dos tipos de Agar Sangre y cómo es su
procedimiento, dependiendo su composición siendo su mayor diferencia son sus colores
debido a la sangre que se utiliza en uno de ellos.

8. RECOMENDACIONES
Seleccionar cuidadosamente los nutrientes, ajustar las concentraciones adecuadas, y asegurar
condiciones físicas óptimas como pH y temperatura. Además, es importante mantener la esterilidad
durante la preparación y almacenamiento para evitar contaminaciones.
9. BIBLIOGRAFÍAS
Ureña, L. (2002). Microbiología oral. Mc Graw Hills.
https://drive.google.com/file/d/17xqEJcEtvbx4m4EqP-9ak8qy_igEFGWl/view?usp=drivesdk
(2021) MacConckey Agar. Britania.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60707267ecda2.pdf