PRÁCTICA N°1

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

El cultivo de un microorganismo se basa en el conocimiento de sus necesidades

nutritivas y físicas. Entendemos por cultivo de microorganismos el proceso que
induce a la multiplicación de ellos. En el laboratorio podemos preparar o seleccionar
medios adecuados a las necesidades de crecimiento de una bacteria.
Un medio puede ser de consistencia líquida, en este caso se denomina caldo, o
sólida, si se agrega agar al caldo.
El agar es un polisacárido, extraído de algas, que funciona como sustancia
solidificante e inerte, ya que no actúa como elemento nutritivo frente a la gran
mayoría de las bacterias. El agar le confiere al medio una consistencia sólida, o si
se agrega en menor cantidad se pueden preparar medios semisólidos.

Clasificación de los medios de cultivo

Según la naturaleza de sus ingredientes:

1. Proteicos o naturales: Están constituidos por sustancias complejas de origen

animal o vegetal y usualmente se complementan con el añadido de minerales y
otras sustancias. Contienen peptona, hidrolizados o extractos que son productos
de la lisis o hidrolisis parcial de proteínas.

2. Sintéticos: No contiene en su formulación productos de naturaleza proteica, se

preparan a partir de ingredientes químicamente puros.

3. Semisintéticos o intermedios: Llevan algunas sustancias químicas cuya

naturaleza y cantidad se conoce, junto con sustancias de naturaleza y
composición indefinida.

Se estudiarán los medios de cultivo sintéticos químicamente definidos.

Estos medios poseen la ventaja de que se tiene un conocimiento exacto de las
exigencias de nutrición y pH que tiene un microorganismo que será cultivado.
Según su consistencia o estado físico los medios de cultivos:

1. Sólidos: Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les

añaden agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. Se preparan
añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro.

2. Líquidos: Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes

disueltos en agua.

3. Semisólidos: Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican

totalmente a la temperatura ambiente. Se preparan añadiendo un agar a un
medio líquido (caldo) a razón de 7,5 g de agar /litro de caldo

Dependiendo del uso para que estén destinados pueden ser:

1. Nutritivos: Permiten el crecimiento de la mayoría de los microorganismos,

por ser muy generales, contienen los requerimientos nutricionales mínimos.

2. Enriquecidos: Contienen un medio basal de apoyo al crecimiento, al cual se

le agregan suplementos, como vitaminas, hemina, suero bovino, etc. y están
dirigidos a recuperar bacterias exigentes en requerimientos nutritivos.

3. De enriquecimiento: Son medios de cultivo selectivos que contienen un

agente que inhibe la microbiota acompañante y favorece el crecimiento del
agente infeccioso.

4. Selectivos: Presentan algún componente que impide el desarrollo de

microorganismos no deseados. Esto hace que el microorganismo que se
desea cultivar lo haga con mayor facilidad.

5. Diferenciales: Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna

característica de la especie o grupo de microorganismos, logrando diferenciar
géneros y especies

En la actualidad se cuenta con medios deshidratados o medios preparados

de acuerdo con formulaciones reconocidas lo cual no solo facilitan la preparación,
sino que garantiza la estandarización de los mismos, los medios ya preparados
deberán almacenarse en refrigeración para preservarlos de deshidratación y
deterioro.
Clasificación
Medios de cultivo
según su uso

Nutritivos TSA, TSC y Sabouraud

Enriquecidos Agar sangre, agar chocolate y Löwestein Jensen

Enriquecimiento Caldo tioglicolato, caldo bilis, caldo peptonado y

caldo tetrationato

Selectivos MacConkey, Thayer Martin y Löwestein Jensen

Diferenciales MacConkey, agar sangre, agar Salmonella –

Shiguella, EMB, TSI, Citrato, y Urea

Objetivo:
Al finalizar esta práctica los estudiantes serán capaces de:
1. Explicar las ventajas de utilizar diferentes clases de medios de cultivo en el
estudio de los microorganismos.
2. Seleccionar el medio de cultivo adecuado para diferentes microorganismos y
diferentes tipos de estudio.
3. Adquirir los conocimientos para preparación de medios de cultivos sólidos y
líquidos a partir de medios deshidratados.
Requisito:
Que el estudiante sea capaz de:
1. Reconocer que todos los seres vivos necesitan de ciertos factores para crecer
y multiplicarse.
2. Que conozca los componentes que se utiliza para preparar un medio de cultivo
sólido y liquido
3. Previsualizar la ruta de aprendizaje en el campus virtual sobre normas de
seguridad
4. Previsualizar el video en el campus virtual sobre materiales a utilizar en las
prácticas de laboratorio.
5. Realizar la evaluación corta prelaboratorio que se publica los lunes previo a su
práctica de laboratorio a las 18:00 horas

Material por instructor:

1. Medios deshidratados
2. Probetas
3. Cocinas eléctricas
4. Frasco Erlenmeyer
5. Bajalengua
6. Papel encerado para pesar
7. Agua destilada
8. Balanza
9. Tubos de vidrio con tapón de rosca y placas de Petri.
Desarrollo: (Observar el video de la práctica en el campus virtual)

1. Observar los medios de cultivo deshidratados y observar las cantidades de

preparación para cada uno ya sea sólido o líquido. Debe recordar que los
sólidos llevan el nombre de agar y los medios líquidos llevan el nombre de
caldos.

2. Pesar la cantidad exacta del medio de cultivo según las indicaciones de la

etiqueta del frasco y colocarlo en un frasco Erlenmeyer. (Se realizará un
medio líquido y sólido)
3. Agregar el agua destilada requerida, previamente medida en una
probeta.

4. Disolver, el medio con calentamiento llevando la suspensión hasta ebullición.

5. Para medios sólidos, esterilizar en autoclave (por 15 minutos a 121ºC) enfriar a
50ºC y verter en placas de Petri estériles, colocando aproximadamente 20 ml por
placa. Tapar parcialmente las placas y después de 5-10 minutos taparlas
totalmente.
 6. Para medios líquidos, posterior a la ebullición, distribuir en tubos con
tapón de rosca (sin apretar) y esterilizar en autoclave (por 15 minutos a
121ºC)

7. Hacer prueba de esterilidad de los medios preparados, colocando una

placa o tubo (uno por cada veinte placas o tubos) en la estufa de 37ºC
durante 24 horas. Si hay crecimiento microbiano (imagen A), el medio de
cultivo no ha sido preparado en condiciones de esterilidad, si no se
presentan colonias (imagen B) se ha preparado adecuadamente.
.

Guardar las placas y tubos en refrigeración para que los medios no se

deterioren.
Preguntas.

1. Realizar un mapa mental sobre las clasificaciones de los medios de cultivo.

2. ¿Explicar el por qué se guardan en refrigeración los medios de cultivo ya

preparados?
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3. ¿Escriba cuánto es el tiempo, las libras de presión y la temperatura la cual

se deben someter los medios de cultivo para una adecuada esterilización?

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4. Explique brevemente en qué consiste la prueba de esterilidad.

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5. Escriba que medio de cultivo mencionados en la práctica se catalogan

como:
a. Diferencial y enriquecido: ___________________________________
b. Diferencial y selectivo: _____________________________________
c. Enriquecido y selectivo: _____________________________________

(Esta guía deben entregarla en el apartado de tareas que se colocará en la semana de

la práctica, el formato será en letra Arial 12, convertido en PDF, no se aceptarán
tareas iguales)