DOCENTE: LILIBETH NIÑO LOPEZ Ing, MSc, PhD

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

El cultivo de un microorganismo se basa en el conocimiento de sus necesidades nutritivas y físicas.
Entendemos por cultivo de microorganismos el proceso que induce a la multiplicación de ellos. En
el laboratorio podemos preparar o seleccionar medios adecuados a las necesidades de crecimiento
de una bacteria.
Un medio puede ser de consistencia líquida, en este caso se denomina caldo, o sólida, si se
agrega agar al caldo.
El agar es un polisacárido, extraído de algas, que funciona como sustancia solidificante e inerte, ya
que no actúa como elemento nutritivo frente a la gran mayoría de las bacterias. El agar le confiere
al medio una consistencia sólida, o si se agrega en menor cantidad se pueden preparar medios
semisólidos.
Clasificación de los medios de cultivo
Según la naturaleza de sus ingredientes:
1. Proteicos o naturales: Están constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el añadido de minerales y otras sustancias. Contienen peptona,
hidrolizados o extractos que son productos de la lisis o hidrolisis parcial de proteínas.
2. Sintéticos: No contiene en su formulación productos de naturaleza proteica, se preparan a partir
de ingredientes químicamente puros.
3. Semisintéticos o intermedios: Llevan algunas sustancias químicas cuya naturaleza y cantidad se
conoce, junto con sustancias de naturaleza y composición indefinida.
Se estudiarán los medios de cultivo sintéticos químicamente definidos. Estos medios poseen la
ventaja de que se tiene un conocimiento exacto de las exigencias de nutrición y pH que tiene un
microorganismo que será cultivado.
Según su consistencia o estado físico los medios de cultivos:
1. Sólidos: Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les añaden agentes
solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido
(caldo) a razón de 15g/litro.
2. Líquidos: Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en agua.
3. Semisólidos: Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente. Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 7,5 g
de agar /litro de caldo

Dependiendo del uso para que estén destinados pueden ser:

1. Nutritivos: Permiten el crecimiento de la mayoría de los microorganismos, por ser muy
generales, contienen los requerimientos nutricionales mínimos.
2. Enriquecidos: Contienen un medio basal de apoyo al crecimiento, al cual se le agregan
suplementos, como vitaminas, hemina, suero bovino, etc. y están dirigidos a recuperar bacterias
exigentes en requerimientos nutritivos.
3. De enriquecimiento: Son medios de cultivo selectivos que contienen un agente que inhibe la
microbiota acompañante y favorece el crecimiento del agente infeccioso.
4. Selectivos: Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no
deseados. Esto hace que el microorganismo que se desea cultivar lo haga con mayor facilidad.
5. Diferenciales: Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la especie
o grupo de microorganismos, logrando diferenciar géneros y especies

En la actualidad se cuenta con medios deshidratados o medios preparados de acuerdo con

formulaciones reconocidas lo cual no solo facilitan la preparación, sino que garantiza la
estandarización de los mismos, los medios ya preparados deberán almacenarse en refrigeración
para preservarlos de deshidratación y deterioro.
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Clasificación según su uso Medios de cultivo

Nutritivos TSA, TSC y Sabouraud

Enriquecidos Agar sangre, agar chocolate y Löwestein Jensen

Caldo tioglicolato, caldo bilis, caldo peptonado y caldo

Enriquecimiento
tetrationato

Selectivos MacConkey, Thayer Martin y Löwestein Jensen

MacConkey, agar sangre, agar Salmonella – Shiguella, EMB,

Diferenciales
TSI, Citrato, y Urea

Objetivo:
Al finalizar esta práctica los estudiantes serán capaces de:
1. Explicar las ventajas de utilizar diferentes clases de medios de cultivo en el estudio de los
microorganismos.
2. Seleccionar el medio de cultivo adecuado para diferentes microorganismos y diferentes tipos de
estudio.
3. Adquirir los conocimientos para preparación de medios de cultivos sólidos y líquidos a partir de
medios deshidratados.
Requisito:
Que el estudiante sea capaz de:
1. Reconocer que todos los microorganismos necesitan de ciertos factores para crecer y
multiplicarse.
2. Que conozca los componentes que se utiliza para preparar un medio de cultivo sólido y liquido
3. Previsualizar el video anexo a este correo https://www.google.com/search?
q=video+udea+preparacion+medios+de+cultivo&rlz=1C1VDKB_esCO1004CO1004&oq=video+ude
a+preparacion+medios+de+cultivo&aqs=chrome..69i57j33i160.7956j0j7&sourceid=chrome&ie=UTF
-8#kpvalbx=_-z8HZJqmB9TrxgHhxIywAg_30

Materiales
1. Medios deshidratados
2. Probetas
3. Plancha eléctricas
4. Frasco Erlenmeyer
5. Espatula
6. Papel para pesar
7. Agua destilada
8. Balanza
9. Placas de Petri.
Desarrollo: (Observar el video de la práctica)
1. Observar los medios de cultivo deshidratados y observar las cantidades de preparación
para cada uno ya sea sólido o líquido. Debe recordar que los sólidos llevan el nombre de
agar y los medios líquidos llevan el nombre de caldos. 
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2. Pesar la cantidad exacta del medio de cultivo según las indicaciones de la etiqueta del
frasco y colocarlo en un frasco Erlenmeyer. (Se realizará un medio sólido).

3. Agregar el agua destilada requerida, previamente medida en una probeta. 

4. Disolver, el medio con calentamiento llevando la suspensión hasta ebullición. 

5. Para medios sólidos, esterilizar en autoclave (por 15 minutos a 121ºC) enfriar a 50ºC y
verter en placas de Petri estériles, colocando aproximadamente 20 ml por placa. Tapar
parcialmente las placas y después de 5-10 minutos taparlas totalmente. 

6. Hacer prueba de esterilidad de los medios preparados, colocando una placa o tubo (uno
por cada veinte placas o tubos) en la estufa de 37ºC durante 24 horas. Si hay crecimiento
microbiano, el medio de cultivo no ha sido preparado en condiciones de esterilidad, si no
se presentan colonias se ha preparado adecuadamente.

Guardar las placas en refrigeración para que los medios no se deterioren.

Preguntas.
1. Realizar un mapa mental sobre las clasificaciones de los medios de cultivo.
2. ¿Explicar el por qué se guardan en refrigeración los medios de cultivo ya preparados?
3. ¿Escriba cuánto es el tiempo, las libras de presión y la temperatura la cual se deben
someter los medios de cultivo para una adecuada esterilización?
4. Explique brevemente en qué consiste la prueba de esterilidad.
5. Escriba que medio de cultivo mencionados en la práctica se catalogan como:
a. Diferencial y enriquecido: ___________________________________
b. Diferencial y selectivo: _____________________________________
c. Enriquecido y selectivo: _____________________________________

BIBLIOGRAFÍA

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales (2da
edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.

Merck. 2002. Microbiology Manual

Ortega, Y; Quevedo F. 1991. Garantía de la Calidad de los Laboratorios de Microbiología

Alimentaria. Organización Panamericana de la Salud. Harla S.A. Méxi