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MEDIOS DE CULTIVO

1. OBJETIVOS
Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos en el laboratorio.
Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboracin de un medio de cultivo.

2. INTRODUCCION
En los laboratorios de Microbiologa se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para
mantener las cepas, aislar o identificar microorganismos con varias finalidades: determinar la
existencia de contaminacin de alimentos, medicamentos o cosmticos; diagnosticar alguna
enfermedad, elaboracin de vacunas bacterianas, etc.

3. MARCO TERICO
De manera general se denomina Medio de Cultivo a cualquier material presente una
adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del nmero de
clulas de una poblacin microbiana.
El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin. Uno de
los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado,
as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO


SEGN SU ESTADO FSICO
a) LQUIDOS:
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes de suelos en agua.
Permiten obtener suspensiones con un elevado nmero de microorganismos. Ej.: caldo
nutritivo.
b) SOLIDOS:
Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los cuales se les aaden 1.5 a 2 % de
agentes solidificantes como agar, gelatina o slica gel. Se utilizan con frecuencia en el
aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. Ej.: Agar
nutritivo.
c) SEMISLIDOS:
Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los cuales se les aaden 0.1 a 0.3% de
agentes solidificantes como agar, gelatina o slica gel.

SEGN LA NATURALEZA DE SUS CONSTITUYENTES


a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o
vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se
conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

SEGN SU FORMULACIN:
a) Qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos
que hay en el medio.
b) Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre,
etc.); no se conoce exactamente cul es la composicin del medio; sin embargo,
presenta la ventaja de que ya estn presentes todos o casi todos los elementos que una
clula puede requerir.

SEGN SUS PROPOSITOS DE USO:


a) Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
b) Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...).
c) Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio.
Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiracin, etc. (por ejemplo, medio
de McConkey).
d) Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el
crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de
diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.

e) Medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el


crecimiento de una especie.
f) Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a
especmenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentracin simple.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Siempre es recomendable y se incluye como una regla bsica la de leer las instrucciones de las
etiquetas de los medios de cultivo, por ello no se recomienda re envasar los medios sino,
mantenerlos en los recipientes originales.
Para lograr una preparacin adecuada de los medios de cultivo es recomendable seguir las
siguientes instrucciones:

PREPARACION DE LA SOLUCION

Los medios de cultivo deben ser mezclados o hidratados en recipientes limpios, libres de
detergente. El agua que se utiliza para su mezclado debe ser destilada o desmineralizada.
Los medios de cultivo que no contienen agar ni gelatinas, (liquidos) pueden ser disueltos en
agua fra o ligeramente caliente. Pero si contienen alguna de las dos sustancias deben ser
calentados hasta ebullicin para solubilizar el agar. Nunca sobre calentar porque se puede alterar
su composicin.
Los medios que presentan turbidez debido a sus componentes insolubles, deben ser agitados
para homogenizarlos adecuadamente.

ESTERILIZACION

Se esteriliza por autoclave o por ebullicin de acuerdo a las instrucciones para cada preparacin.
Cuando se esterilizan volmenes grandes de medio se debe aumentar el tiempo de esterilizacin
para permitir la penetracin del calor al interior del recipiente.

SERVIDO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Una vez estril los medios de cultivo deben ser enfriados a temperatura promedio de 45 - 55C
para ser adicionados en los recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las tcnicas
aspticas.

4. MATERIALES

4 Erlenmeyer de 100ml
8 cajas de Petri
8 tubos de ensayo

4 pipeta de 10 ml
4 probeta de 100ml
Esptula
Balanza
Autoclave, estufa y horno
Agar nutritivo EMB y caldo nutritivo

5. PROCEDIMIENTO

Realizar los clculos respectivos para agar y caldo teniendo en cuenta que para para
cada caja deben servir 15-18 ml de agar y para cada tubo entre 7-10 ml de caldo.
Ejemplo: Para preparar 8 cajas con agar, multiplique 8 po15 ml = 120ml
Mida el volumen de agua destilada segn sus clculos.
Teniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, haga la relacin de polvo de agar que
debe pesar de acuerdo a lo especificado en la etiqueta del medio.
Pese la cantidad del medio necesario de acuerdo a los clculos.
Mezcle el polvo con la mitad del volumen de agua medida anteriormente, agite y
adicione el restante de agua
Lleve a hervir si es necesario
Esterilizar en el autoclave a 15 lb de presin a 121 C por 15 min.
Sirva 15-18 ml aproximadamente de agar en cada caja cuando la temperatura este a 5055 C, tpelas y deje solidificar, Lo mismo con los caldos sirva 7-10 ml en cada tubo y
tpelos.
Djelos enfriar y gurdelos en la nevera hasta su utilizacin.

6. CUESTIONARIO
1.- Qu es Agar, de donde se extrae?
Agar-Agar, es un extracto de color blanco-crema que se obtiene de distintos tipos
de algas rojas, como el Gelidium, y aunque principalmente se recogen en el Ocano Atlntico,
tambin se puede encontrar en el Mar Cantbrico y Ocano Pacfico. Es muy rico en fibra
soluble y minerales, por lo que ayuda a regular el trnsito intestinal, colesterol, diabetes, y
prevenir el sobrepeso. Debido a su capacidad de absorber agua, se utiliza en cocina para espesar
y gelificar alimentos, ya sean dulces o salados, sin aadir ningn sabor, como la gelatina.
2.- Qu es gelatina de donde se extrae?
La gelatina es una protena natural que se obtiene del
colgeno procedente de los tejidos conectivos de animales (la
gelatina vegetal se conoce como agar-agar). Para su
obtencin, se extraen por hidrlisis las protenas del colgeno
obtenidas de la piel, hueso hervido y molido, pezuas,
huesos, tendones y vsceras de ganado vacuno, porcino,
ovino, equino y avcola.
Es decir, todo lo que no vale de
los animales para venderlos en las carniceras.

3.- Por qu se utiliza agua destilada en la preparacin de los medios de cultivo?


Para la preparacin de medios, soluciones y tampones, debe utilizarse agua destilada que haya
sido sometida a controles peridicos que aseguren su calidad.

Requisitos del agua destilada: Se debe llevar un registro actualizado de los mismos

Conductividad, pH,
Contaminacin microbiana,
Libre de sustancias bactericidas
Inhibidoras o interferentes,

4.- Elabore una tabla indicando medio de cultivo, azcar fermentable, sistema indicador.

MEDIO DE
CULTIVO

M.O QUE
CRECE

TIPO DE
MEDIO

SISTEMA
INDICADOR

Agar EMB

E.coli

Medio de
cultivo
selectivo y
diferencial
Medio de
cultivo
selectivo y
diferencial
Medio de
cultivo
diferencial

Indicadores: eosina y
azul de metileno.

Agar
MacConkey

E. coli,
Citrobacter,
Salmonella,
Shigella
Klebsiella
pneumoniae, S.
typhimurium.

Lactosa

Agar LIA

Salmonella spp

glucosa

Medio de
cultivo
diferencial

Salmonella y
Shigella.

lactosa

Agar TSI

P. mirabilis, S.
typhimurium,
S. enteritidis.

Glucosa o
sacarosa, lactosa

Medio de
cultivo
diferencial
Medio de
cultivo
diferencial

Indicador: citrato de
hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio,
purpura
de
bromocresol
Indicadores: rojo de
metilo

Agar SS

Agar TCES
(Agar Tiosulfato
Citrato Bilis
Sacarosa)
Agar manitol

Vibrio
cholerae, Vibrio
parahemolyticu
s.
Staphylococcus
aureus,

sacarosa

Medio de
cultivo
selectivo

Indicadores: azul de
timol y azul de
bromotimol

Manitol

Medio de
cultivo

Indicador;
fenol

Agar citrato de
Simons

AZCAR
FERMENTAB
LE
Lactosa y/o
sacarosa

citrato

Indicadores:
cristal
violeta, rojo neutro.

Indicadores: azul de
bromotimol

Indicadores: rojo de
fenol

rojo

de

Staphylococcus
epidermidis,
Klebsiella
pneumonia.
Agar bilis verde
brillante.

Coliformes
totales y
fecales,
Klebsiella
pneumoniae,
Enterobacter
spp.

selectivo y
diferencial.

Lactosa y
sacarosa

Medio
selectivo

Indicadores: rojo de
fenol