Tema 7.

PARTE 2-INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

 Inhibición enzimática. Tipos de inhibición

 Reacciones bisustrato

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 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Inhibidores: pequeña moléculas químicas o iones que interfieren con las
reacciones ralentizándolas o deteniéndolas.

Importantes para el estudio de:

 Mecanismo de acción enzimática
 Especificidad de sustrato
 Naturaleza del centro activo
 Identificación residuos fundamentales para la catálisis

Utilidad:
 Determinación rutas metabólicas
 Medicina. Antibióticos
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 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

INHIBICIÓN REVERSIBLE: E + I ⇄ EI

• Competitiva

• Acompetitiva

• No competitiva: pura y mixta

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE : E + I  EI

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

E + I ⇄ EI
• El inhibidor presenta una semejanza
estructural con el sustrato.
• Se une reversiblemente a la enzima
bloqueando el acceso del sustrato al
centro activo.
• El inhibidor compite con el sustrato por
el centro activo de la enzima: la formación
del complejo enzima-sustrato disminuye
en presencia del inhibidor.
• Si se aumenta la cantidad de SUSTRATO
el inhibidor competitivo es desplazado de
la enzima
• El inhibidor NO inactiva la enzima.
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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA
E + I ⇄ EI

Ki

Al esquema básico de una

reacción enzimática se
añade un nuevo factor que
es el inhibidor y una nueva
constante = constante de
inhibición (Ki).
Esta constante de inhibición
viene definida por la
relación entre la cantidad de
enzima e inhibidor libre y el
complejo enzima-inhibidor.
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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

En presencia de un inhibidor
competitivo este tipo de inhibición se
puede revertir a altas concentraciones
de sustrato, cuando la velocidad se
aproxima a la velocidad máxima.

En presencia de un inhibidor
competitivo se observan dos Km: Km
(Km de la reacción sin inhibidor) y Km
ap (aparente – la obtenida en la
reacción con inhibidor).

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

Vmaxap = Vmax

En la inhibición reversible
competitiva la velocidad
máxima aparente no varía y
es igual a la velocidad máxima
de la reacción sin inhibidor

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INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

Sin inhibidor

Con inhibidor

Km
Kmap = α Km
α=1 + [I]/Ki

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INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA
E + I ; Vmaxap = Vmax ; Kmap = αKm

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA
Ejemplo: Succinato deshidrogenasa

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA
Ejemplo: alcohol deshidrogenasa

Etanol A
Alcohol deshidrogenasa Acetaldehido

Metanol Formaldehido

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE ACOMPETITIVA
ES + I ⇄ ESI

Inhibición acompetitiva:

La afinidad dell inhibidor es por el complejo ES, no

por la Enzima sola, por tanto solo se une al complejo
enzima-sustrato en un sitio diferente al centro
activo.

Se obtiene un complejo enzima-sustrato-inhibidor

improductivo.

El inhibidor no se une en el mismo sitio que el

sustrato lo que dificulta su disociación e impide la
formación de los productos.

En este tipo de inhibición se impide la catálisis.

La inhibición acompetitiva es poco frecuente en las
reacciones de un solo sustrato, es habitual en las
reacciones de dos sustratos.
 INHIBICIÓN REVERSIBLE ACOMPETITIVA
ES + I ⇄ ESI

En este tipo de reacción por mucho

que aumentemos el sustrato, siempre
va a haber una proporción de enzima K’i
atrapada en el complejo improductivo
enzima-sustrato-inhibidor

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 INHIBICIÓN REVERSIBLE ACOMPETITIVA
La proporción de enzima
atrapada en el complejo
improductivo enzima-
sustrato-inhibidor, tiene
un impacto en la
velocidad máxima de la
reacción: disminuye. Vmax
(Vmax ap = Vmax/α’)
Vmaxap = Vmax/α’
Además, la cantidad de
sustrato necesaria para
alcanzar la mitad de la
velocidad máxima será
menor en una reacción
con inhibidor
acompetitivo. (Km ap =
Km/α’)

Para obtener la ecuación

de Michaelis en
presencia de un
inhibidor acompetitivo
basta con sustituir la
Vmax y la Km por la Km
Vmax ap (= Vmax/α’) y
Km ap (= Km/α’) y Kmap = Km/α’
simplificar.

α=1 + [I]/Ki
 INHIBICIÓN REVERSIBLE ACOMPETITIVA
ES + I ; Vmaxap = Vmax/α’ ; Kmap = Km/α’

En la representación de Lineweaver-Burk para una reacción sujeta a una inhibición acompetitiva se observa como una
línea paralela a la reacción sin inhibidor. La Km ap y la Vmax ap son menores que la Vmax y Km pero ambas variables se
van a reducir en la misma proporción de manera que la pendiente, o lo que es lo mismo, el ratio Km/Vmax va a
permanecer constante.
Al igual que en la ecuación de Michaelis, para obtener la ecuación de los dobles inversos de una reacción con inhibidor
acompetitivo basta con sustituir la Km ap y la Vmax ap.
 INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA
E + I/ES + I ⇄ EI/ESI

Inhibiciones no competitivas:

Es la inhibición más compleja.

El inhibidor presenta afinidad tanto

por la enzima libre como la enzima
unida a sustrato.

El inhibidor se une a la enzima en un

sitio distinto al centro activo.

La unión del inhibidor produce un

cambio conformacional que no
impide la fijación del sustrato a la
enzima, pero sí impide la acción
catalítica. 16
 INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA
E + I/ES + I ⇄ EI/ESI

En la inhibición no competitiva tenemos 2

constantes de disociación:
La que refiere al complejo enzima-inhibidor
(constante de inhibición Ki);
y la que refiere al complejo enzima-
sustrato-inhibidor (constante de inhibición
Ki’).

Si el inhibidor se une a la enzima libre es

necesario más sustrato para alcanzar la
mitad de la velocidad máxima, la Km
aumenta (similar a lo que ocurre en la
inhibición competitiva

Si el inhibidor se une al complejo enzima-

sustrato, es necesario menos sustrato para
alcanzar la mitad de la velocidad máxima
(ésta disminuye), la Km disminuye (similar a 17
lo que ocurre en la inhibición acompetitiva).
 INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA
E + I/ES + I ⇄ EI/ESI

Inhibición Pura: Ki=K’i

Inhibición Mixta: Ki≠K’i

Inhibición PURA: La unión entre el inhibidor y la enzima o el complejo enzima-sustrato ocurre de manera
aleatoria. Las constantes de disociación Ki y Ki’ son iguales.
En este tipo de inhibición la unión del inhibidor a la enzima no afecta la unión del sustrato a la enzima.

Inhibición MIXTA: La unión no ocurre de manera aleatoria y las constantes de disociación son diferentes.
 INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA PURA

En el esquema cinético de una inhibición no

competitiva pura al aumentar el sustrato, la
proporción de inhibidor unido a la enzima libre
se disocia, pero al igual que ocurría en la
inhibición acompetitiva, siempre va a haber una
proporción de enzima atrapada en el complejo
enzima-sustrato-inhibidor, lo que va a tener un
impacto en la velocidad máxima de la reacción:
Vmax ap = Vmax/α’.

Además, en una inhibición no competitiva pura

Vmax
donde las constantes de disociación Ki y Ki’ son Vmaxap = Vmax/α’
iguales y siempre que la unión del inhibidor no
afecte a la unión del sustrato la cantidad de
sustrato precisa para alcanzar la mitad de la
velocidad máxima será igual en la reacción sin
inhibidor y en la reacción con inhibidor no
competitivo, es decir, las Km serán iguales. (Km
ap = α/α’ Km = Km puesto que α=α’.).
Kmap = α/α’ Km
Para obtener la ecuación de Michaelis de una
reacción con inhibidor no competitivo basta con Por tanto
sustituir los valores de la Vmax ap (=Vmax/α’) y Kmap = Km
la Km ap (= α/α’ Km ) en la ecuación y
simplificar.

α=1 + [I]/Ki
INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA PURA
E+I/ES + I / Vmaxap = Vmax/α’ / Kmap = α/α’ Km

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 EFECTOS DE INHIBIDORES REVERSIBLES

I Competitive I Non-competitive I Uncompetitive

Vmax Vmax Vmax
vo vo
Direct Plots

Vmax’ Vmax’
I I I

Km Km’ [S], mM Km = Km’ [S], mM Km’ Km [S], mM

Vmax unchanged Vmax decreased
Km increased Km unchanged Both Vmax & Km decreased
Double Reciprocal

1/vo I 1/vo I 1/vo

I
Two parallel
Intersect lines
at Y axis
1/ Vmax Intersect 1/ Vmax 1/ Vmax
at X axis

1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S] 1/Km 1/[S]

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 EFECTOS DE INHIBIDORES REVERSIBLES
INHIBIDOR Vmax,ap Km,ap
NO Vmax Km
COMPETITIVO Vmax αKm
ACOMPETITIVO Vmax/α’ Km/α’
MIXTO Vmax/α’ αKm/α’
MIXTO PURO Vmax/α Km

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 INHIBICIÓN IRRREVERSIBLE
E + I  EI

 Inhibición permanente
 Unión irreversible por medio de enlaces covalentes.
 Modificaciones químicas de los grupos catalíticos.
 Una vez modificada la enzima, está siempre inhibida.

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 INHIBICIÓN IRRREVERSIBLE
E + I  EI

OH
CH2
Active site
serine Enzyme 24
 INHIBICIÓN IRRREVERSIBLE
E + I  EI

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 INHIBICIÓN IRRREVERSIBLE SUICIDA
E + I  EI

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 REACCIONES BISUSTRATO
Son reacciones Bi-Bi (2 sustratos y 2 productos). Reacciones de
transferencia.
A-X + B ↔ P + B-X
E

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 REACCIONES BISUSTRATO

A-X + B ↔ P + B-X
E

1. Desplazamiento secuencial o simple:

Ambos sustratos deben encontrarse simultáneamente en el centro activo
para poder formar el complejo terciario ESS. Se forma complejo ternario.
i) Ordenado: existe una secuencia establecida de entrada de los
sustratos y de salida de los productos.
ii) Al azar: no existe una secuencia obligatoria.
2. Doble desplazamiento o ping-pong:
El E libre se activa con el S1 y forma el P1, quedando modificado
temporalmente el E que reacciona con el S2 formando un P2 y quedando el
E sin modificar. No existe la formación del complejo ternario. La secuencia
de entrada de sustratos está establecida.
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 REACCIONES BISUSTRATO
Desplazamiento secuencial ordenado

Complejo ternario

Notación de Cleland

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 REACCIONES BISUSTRATO
Desplazamiento secuencial ordenado

Ej. Enzimas deshidrogenasas (Alcohol, Malato y lactato deshidrogenasas)

Oxidaciones de sustratos con el coenzima NAD+ y NADP+

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 REACCIONES BISUSTRATO
Desplazamiento secuencial al azar

Complejo ternario

Notación de Cleland

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 REACCIONES BISUSTRATO
Desplazamiento secuencial al azar

Ej. Creatina Quinasa, Adenilato Quinasa, Citrato sintasa,

Hexoquinasa (Fosforilación de la glucosa con ATP )

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 REACCIONES BISUSTRATO
Doble desplazamiento o ping-pong

Notación de Cleland

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 REACCIONES BISUSTRATO
Doble desplazamiento o ping-pong

Ej. Transaminasas (Aspartato aminotransferasa), Tripsina, CoA transferasa

S1 S2 P2 P1

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