TEMA 11: INHIBICIÓN Y REGULACIÓN DE LA REACCIÓN ENZIMÁTICA

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

Puede darse por la unión de inhibidores a diferentes partes de la enzima, que pueden causar cambios
conformacionales o en el centro activo y reducir su actividad. Es un proceso de regulación en la célula
de las rutas bioquímicas, su comprensión aporta información sobre la estructura física del centro activo
(y de su mecanismo catalítico) y numerosos fármacos, venenos o toxinas funcionan como inhibidores de
ciertas enzimas.

INHIBICIÓN REVERSIBLE

El inhibidor no se une de forma covalente a la enzima y se establece un equilibrio de interacción que

depende de la afinidad del inhibidor por la enzima. Puede ser revertida por la eliminación del inhibidor.
Puede ser competitiva, acompetitiva o no competitiva, dependiendo de la variación de la Vmáx y Km que
causen en la enzima.
INHIBICIÓN COMPETITIVA
Se unen al centro activo de la enzima libre al ser sustancias análogas al sustrato de la enzima. La enzima
no los puede catalizar y el tiempo en el que está ocupada, está inutilizada. El efecto es mayor cuanto
menor sea la constante de disociación del inhibidor (Ki), que indica la afinidad del inhibidor por la enzima.
Su efecto también dependerá de la concentración en la que se encuentre.
[𝐸][𝐼]
𝐾𝑖 =
[𝐸𝐼]
La Vmáx no se modifica mientras que la Km aparente aumenta (punto de corte en el eje Y).
α: efecto del inhibidor sobre la acción enzimática
𝑉 [𝑆]
Ecuación de Michaelis-Menten: 𝑉0 = 𝛼𝐾𝑚á𝑥+[𝑆]
𝑚

A concentraciones muy elevadas de sustrato el efecto del inhibidor va disminuyendo.

INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
Se unen al complejo enzima-sustrato de acuerdo a una Ki. , por lo que no es catalíticamente activo.
[𝐸𝑆][𝐼]
𝐾𝑖 =
[𝐸𝐼𝑆]
El inhibidor no interacciona con el centro activo de la enzima (no tiene por qué ser análogo al sustrato),
pero se une a otras zonas y provoca un cambio conformacional que la inutiliza. Se obtienen rectas
paralelas dependiendo de la concentración del inhibidor, disminuyendo tanto Km como Vmáx con respecto
a la recta sin inhibidor.
𝑉 [𝑆]
Ecuación de Michaelis-Menten: 𝑉0 = 𝐾 𝑚á𝑥
+𝛼[𝑆]
𝑚

INHIBICIÓN NO COMPETITIVA O MIXTA

El inhibidor interacciona en un lugar diferente del centro catalítico de la enzima, pero puede unirse tanto
a la enzima libre como al complejo enzima-sustrato.
[𝐸][𝐼] [𝐸𝑆][𝐼]
𝐾𝑖 = y 𝐾′𝑖 =
[𝐸𝐼] [𝐸𝐼𝑆]

En la representación de dobles inversos la Vmáx disminuye pero los valores de Km aumentan. Los puntos
de corte ocurren en el segundo cuadrante de la gráfica.
𝑉 [𝑆]
Ecuación de Michaelis-Menten: 𝑉0 = 𝛼𝐾𝑚á𝑥
+𝛼′[𝑆]𝑚

INHIBICIÓN NO COMPETITIVA PURA

Ki = Ki’ → α = α’. La Vmáx disminuye y la Km se mantiene constante (punto de corte entre las rectas
coincide en el eje X).
𝑉 [𝑆]
Ecuación de Michaelis-Menten: 𝑉0 = 𝛼𝐾𝑚á𝑥
+𝛼[𝑆] 𝑚

ANÁLISIS CINÉTICO DE LA INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

[𝐼]
𝛼 = 1 + 𝐾 , dependiendo Ki del tipo de inhibición a tratar.
𝑖

Inhibición competitiva: Kmap = αKm

Inhibición acompetitiva: Vmáxap = Vmáx/ α
Inhibición no competitiva pura: Vmáxap = Vmáx/ α

EJEMPLOS DE FÁRMACOS
El metotrexato es un análogo al ácido fólico y se usa como inhibidor competitivo de una enzima
encargada de convertir el ácido fólico (Vit B9) en su forma coenzimática, que participa en muchas
reacciones implicadas en la síntesis de nucleótidos y aminoácidos. Al bloquearlo se generan menos
nucleótidos, por lo que se puede usar en tratamientos antitumorales o en enfermedades autoinmunes.

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE

El inhibidor se une de manera covalente al centro activo de la enzima, de forma que la enzima queda
permanentemente inutilizada sin ningún tipo de actividad. La mayoría de inhibidores irreversibles son
sustancias tóxicas análogas al estado de transición del sustrato. Los inhibidores suicidas son no
perjudiciales en su estado normal pero una vez interactúan con la enzima, la bloquean. Son muy usados
en el estudio de los mecanismos enzimáticos.

EJEMPLOS DE FÁRMACOS
Los grupos tiol (-SH) del centro activo de algunas enzimas pueden ser bloqueados por agentes alquilantes
o metales pesados, provocando intoxicaciones. En el caso del Pb, causa anemia al impedir el
funcionamiento de la enzima que participa en la síntesis del grupo Hemo.
Sin embargo, hay inhibidores irreversibles que pueden ser usados como fármacos tales como la penicilina,
la aspirina y los fármacos contra el HIV.

REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Las reacciones químicas de las células están organizadas en rutas metabólicas, con puntos de
ramificación donde se entrelazan unas con otras. Debido a esto, es necesaria una coordinación y
regulación de las enzimas implicadas en las rutas. La regulación mantiene el estado ordenado, conserva
la energía y responde a variaciones ambientales.
- Control genético: se controlan los genes codificadores de las enzimas, manejando la cantidad de enzima
disponible en la célula. Está unido a mecanismos de degradación de enzimas de la célula, muy
relacionado con el marcaje de enzimas mediante modificaciones covalentes.
- Control a nivel del sustrato: la velocidad depende de la concentración de sustrato disponible. Está
vinculado con procesos de transporte del sustrato al interior de la célula o el orgánulo. A veces el producto
de una reacción puede ejercer inhibición competitiva sobre la enzima que los produce, aunque al nivel
de las rutas metabólicas este tipo de inhibición es muy limitado.
- Regulación por enzimas alostéricas: no responden a la cinética de Michaelis-Menten, si no una parecida
a la que tiene la hemoglobina en su unión al O2.
- Regulación por modificación covalente: se añaden o eliminan grupos de forma reversible a través de
enzimas reguladas. Algunos son irreversibles, normalmente para activarla.
- Compartimentación celular: las células eucariotas están organizadas en compartimentos separados
físicamente por membranas. Pueden ocurrir reacciones diferentes en cada una de ellas. Participa un
transporte ordenado de los sustratos y productos a través de estas membranas.

En cada ruta hay una o más enzimas con un efecto mayor en la velocidad total de la ruta de reacción.
Presentan un aumento o descenso de su actividad en respuesta a diferentes señales. En muchos casos, la
primera enzima suele ser la reguladora principal, aunque pueden haber otras con papel secundario.
Dentro de ellas distinguimos las enzimas alostéricas y las que sufren modificación covalente.

ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Son proteínas multiméricas, es decir, tienen varias subunidades cada una con su propio centro activo. En
el modelo concertado todas las subunidades pasan de golpe del estado T al R y viceversa y en el modelo
secuencial hay todas las posibilidades de conformaciones intermedias. Se distinguen dos tipos de enzimas
alostéricas:
- Homoalostéricas: la transición del estado de menor afinidad al de mayor afinidad por el sustrato viene
desencadenado por el propio sustrato. Tienen una unión cooperativa del sustrato y curvas cinéticas del
tipo sigmoideo, como una situación mixta de una conformación de baja afinidad (T) a baja concentración
y otra de alta afinidad (R) a mayor concentración. En el homoalosterismo extremo (curva sigmoidea muy
pronunciada) la enzima responde a concentraciones de sustrato bastante sutiles pasando a la forma R, de
forma que se consume de forma repentina el sustrato, regresando a la conformación T.
- Heteroalostéricas: presentan inhibidores o activadores diferentes al sustrato (reguladores alostéricos)
que permiten a la enzima pasar del estado T al R. Se unen en regiones diferentes a las del centro activo
y los centros catalíticos y los centros reguladores están en subunidades diferentes de la enzima. Los
efectores positivos (activadores) las llevan a la forma R y los negativos (inhibidores) a la forma T. Su
cinética es muy compleja. Pueden presentar ambos tipos de reguladores simultáneamente.