Fundamentos de las gráficas de

cinética enzimática
Cómo leer gráficas de cinética enzimática (y cómo se hacen). Km y Vmáx. Inhibidores
competitivos y no competitivos.

Introducción
Imaginemos que quieres comprar un automóvil deportivo. ¿Qué te
gustaría saber sobre las diferentes opciones (Ferrari, Porsche, Jaguar, etc.)
para decidir cuál es el mejor? Uno de los factores obvios sería qué tan
rápido puede correr cuando pisas el acelerador a fondo. Pero tal vez
también quieras saber información más detallada sobre su rendimiento,
como qué tan rápido puede acelerar de 0 a 100 km/hr. En otras palabras,
en lugar de saber únicamente su velocidad máxima, también querrías
saber la cinética de cómo el automóvil alcanza esa velocidad.

Los bioquímicos tienden a sentirse de manera semejante con respecto a

las enzimas que estudian. Quieren saber todo lo que puedan sobre los
efectos de una enzima en la velocidad de reacción, no solo qué tan rápida
puede ser cuando trabaja a todo lo que da.

De hecho, puedes obtener una gran cantidad de información sobre el

funcionamiento de una enzima y su interacción con otras moléculas, como
los inhibidores, tan solo con medir qué tan rápido cataliza una reacción
bajo una serie de condiciones diferentes. La información obtenida en estos
experimentos generalmente se representa en forma de gráficas, por lo que
dedicaremos un poco de tiempo a discutir cómo se elaboran dichas
gráficas (y cómo se leen para obtener el máximo provecho de ellas).
Fundamentos de las gráficas de cinética
enzimática
Las gráficas como la que se ve a continuación (que muestra la velocidad
de reacción como una función de la concentración de sustrato) se usan a
menudo para mostrar información sobre cinética enzimática.
Proporcionan una gran cantidad de información útil, pero también
pueden resultar muy confusas la primera vez que las ves. Aquí, iremos
paso a paso por el proceso de elaboración e interpretación de una de estas
gráficas.

Gráfica de cinética enzimática que muestra la velocidad de reacción como

una función de la concentración del sustrato.
Imagen modificada de "Enzimas: Figura 3", de OpenStax College, Biología (CC BY 3.0).

Imagina que tienes tu enzima favorita en un tubo de ensayo y quieres

saber más acerca de cómo se comporta bajo distintas condiciones. Así que
realizas una serie de pruebas en las que tomas diferentes concentraciones
de sustrato -digamos, 0 M, 0.2 M, 0.4 M, 0.6 M, 0.8 M y 1.0 M- y encuentras
la velocidad de reacción (qué tan rápido tu sustrato se convierte en
producto) cuando añades enzima en cada caso. Por supuesto, tienes que
ser cuidadoso para añadir la misma concentración de enzima en cada
reacción, de forma que puedas comparar manzanas con manzanas.

¿Cómo determinas la velocidad de reacción? Bueno, lo que en realidad

quieres es la velocidad de reacción inicial, justo en el momento en que
combinas el sustrato y la enzima, y esta cataliza la reacción tan rápido
como puede a esa concentración particular de sustrato (porque la
velocidad de reacción disminuirá a cero conforme se usa el sustrato). De
este modo, medirías la cantidad de producto sintetizado por unidad de
tiempo al inicio de la reacción, cuando la concentración de producto
aumenta en forma lineal. Este valor, la cantidad de producto sintetizado
por unidad de tiempo al inicio de la reacción, se llama velocidad
inicial o V_0V0V, start subscript, 0, end subscript para esa concentración.

Digamos que ya encontraste los valores V_0V0V, start subscript, 0, end

subscript para todas las concentraciones que te interesan. Ahora puedes
trazar cada concentración de sustrato con su V_0V0V, start subscript, 0,
end subscript como un par (X, Y). Una vez que hayas trazado todos los
pares (X, Y) para las diferentes concentraciones, podrás conectar los
puntos por medio de una curva que mejor se ajuste a ellos para obtener
una gráfica. Para muchos tipos de enzimas la gráfica que se obtiene se
parece mucho a la línea morada que se muestra más arriba: los valores
de V_0V0V, start subscript, 0, end subscript se incrementan rápidamente
en concentraciones bajas de sustrato, luego se estabilizan a una meseta
plana en altas concentraciones de sustrato.
Gráfica de cinética enzimática que muestra la velocidad de reacción como
una función de la concentración del sustrato, se señala la Vmáx (velocidad
máxima) y la Km (concentración de sustrato cuando la velocidad de
reacción es 1/2 Vmáx).
Imagen modificada de "Enzimas: Figura 3", de OpenStax College, Biología (CC BY 3.0).

Esta meseta se genera porque la enzima está saturada, es decir, todas la

moléculas de enzima disponibles ya están ocupadas procesando sustratos.
Cualquier molécuala adicional de sustrato tendrá que esperar hasta que
una enzima se desocupe, por lo que la velocidad de reacción (la cantidad
de producto generado por unidad de tiempo) está limitada por la
concentración de enzima. Esta velocidad máxima de reacción es
característica de una enzima en particular a una concentración dada y se
conoce como velocidad máxima o V_{max}VmaxV, start subscript, m, a,
x, end subscript. La V_{max}VmaxV, start subscript, m, a, x, end
subscript es el valor de Y (valor inicial de velocidad de reacción) en el cual
se estabiliza la gráfica anterior.
La concentración de sustrato que da una velocidad que está a la mitad de
la V_{max}VmaxV, start subscript, m, a, x, end subscript se llama K_mKmK,
start subscript, m, end subscript y es una medida útil sobre la rapidez
con que aumenta la velocidad de reacción respecto a la concentración del
sustrato. La K_mKmK, start subscript, m, end subscript también es una
medida de la afinidad de una enzima por su substrato (la tendencia a
unirse a él). Una K_mKmK, start subscript, m, end subscript más baja
corresponde a una mayor afinidad por el sustrato, mientras que
una K_mKmK, start subscript, m, end subscript más alta corresponde a una
menor afinidad por el sustrato. A diferencia de la V_ {max}VmaxV, start
subscript, m, a, x, end subscript, que depende de la concentración de
enzima, K_mKmK, start subscript, m, end subscript siempre es la misma
para una enzima particular en una reacción determinada (aunque
la K_mKmK, start subscript, m, end subscript "aparente", medida
experimentalmente, puede modificarse por inhibidores, como se explica a
continuación).

Gráficas de cinética enzimática e inhibidores

Bueno, ¿pero qué son los inhibidores? Ya hemos hablado de dos tipos de
inhibidores, competitivos y no competitivos, en el artículo
sobre regulación enzimática.

• Los inhibidores competitivos afectan el progreso de la reacción al

unirse a una enzima, por lo general en el sitio activo, y evitan que el
sustrato real se una. En un momento dado, solo el inhibidor
competitivo o el sustrato pueden unirse a la enzima (no ambos). Es
decir, el inhibidor y el sustrato compiten por la enzima. La inhibición
 competitiva actúa disminuyendo el número de moléculas de enzima
disponibles para unirse el substrato.

• Los inhibidores no competitivos no impiden que el sustrato se una

a la enzima. De hecho, el inhibidor y el substrato no afectan la unión
del otro con la enzima en lo absoluto. Sin embargo, cuando el
inhibidor se une, la enzima no puede catalizar su reacción para
producir un producto. De esta forma, la inhibición no competitiva
actúa reduciendo el número de moléculas funcionales de enzima que
pueden realizar la reacción.

Si quisiéramos mostrar los efectos de estos inhibidores en una gráfica

como la de arriba, podríamos repetir el experimento completo dos veces
más: añadiendo cierta cantidad de inhibidor competitivo a cada reacción
de prueba en una y con cierta cantidad de inhibidor no competitivo en
otra. Obtendríamos los siguientes resultados:

Gráfica de cinética enzimática que muestra la velocidad de reacción como

una función de la concentración del sustrato para una enzima normal, una
enzima con un inhibidor competitivo y un inhibidor no competitivo. Para
el inhibidor competitivo, la Vmax es la misma que para la enzima normal,
pero la Km es mayor. Para el inhibidor no competitivo, la Vmax es menor
que para la enzima normal, pero la Km es la misma.
Imagen modificada de "Enzimas: Figura 3", de OpenStax College, Biología (CC BY 3.0).

• Con un inhibidor competitivo, la reacción puede alcanzar en algún

momento su V_{máx}VmaˊxV, start subscript, m, a, with, acute, on
top, x, end subscript normal, pero se necesita de una mayor
concentración de sustrato para alcanzarla. En otras
palabras, V_{máx}VmaˊxV, start subscript, m, a, with, acute, on top, x,
end subscript no cambia, pero la K_mKmK, start subscript, m, end
subscript aparente es mayor. ¿Por qué se debe agregar más sustrato
para alcanzar V_{máx}VmaˊxV, start subscript, m, a, with, acute, on
top, x, end subscript? El sustrato extra hace que las moléculas de
sustrato tengan la abundancia suficiente para “ganarle”
consistentemente a las moléculas de inhibidor su lugar en la enzima.

• Con un inhibidor no competitivo, la reacción nunca puede alcanzar

su V_{máx}VmaˊxV, start subscript, m, a, with, acute, on top, x, end
subscript, sin importar cuánto sustrato añadamos. Un subconjunto
de las moléculas de enzima siempre estará "envenenado" por el
inhibidor, por lo que se reduce la concentración efectiva de la
enzima (que determina la V_{max}VmaxV, start subscript, m, a, x, end
subscript). Sin embargo, la reacción alcanza la mitad de su
nueva V_{máx}VmaˊxV, start subscript, m, a, with, acute, on top, x, end
subscript en la misma concentración de sustrato, por lo que K_mKm
K, start subscript, m, end subscript no cambia. El hecho de
que K_mKmK, start subscript, m, end subscript no cambie refleja que
 el inhibidor no afecta la unión de la enzima con el sustrato, solo
disminuye la concentración de enzima utilizable.

[Más información sobre tipos de inhibidores y su comportamiento cinético]

Modelo de Michaelis-Menten y enzimas

alostéricas
Muchas enzimas actúan de manera similar a la enzima hipotética del
ejemplo anterior, generan curvas parabólicas cuando se grafica la
velocidad de reacción como función de la concentración de sustrato. Las
enzimas que muestran este comportamiento pueden describirse la
mayoria de las veces con una ecuación que relaciona la concentración del
sustrato, la velocidad inicial, la K_mKmK, start subscript, m, end subscript,
y la V_{max}VmaxV, start subscript, m, a, x, end subscript, conocida como
ecuación de Michaelis-Menten. Las enzimas cuya cinética obedece dicha
ecuación se denominan enzimas michaelianas. Si quieres revisar con más
detalle la ecuación de Michaelis-Menten y el modelo en el que se basa,
puedes ver los videos sobre Michaelis-Menten en la sección del MCAT.

Las enzimas Michaelis-Menten son diferentes a las enzimas alostéricas

(vistas en el artículo principal sobre regulación enzimática). Las enzimas
alostéricas normalmente tienen múltiples sitios activos y a menudo
muestran cooperatividad, esto es, que la unión de un sustrato a un sitio
activo aumenta la capacidad de otros sitios activos para unir y procesar
sustratos.
Gráfica de la velocidad de reacción como una función de la concentración
de sustrato para una enzima cooperativa. La curva tiene forma de S
(sigmoide), con una marcada transición de velocidad de reacción baja a
velocidad alta en un rango estrecho de concentraciones de sustrato.

Las enzimas cooperativas son más sensibles en su respuesta a los cambios

en las concentraciones de sustrato que otras enzimas y exhiben una
transición "tipo interruptor" de una velocidad de reacción baja a una alta
conforme aumenta la concentración de sustrato. Esto corresponde a una
curva de velocidad contra sustrato con forma de S, como se muestra
arriba.