Celia Martín-Granizo Garcia

SEMINARIO 4 – CINÉTICA ENZIMÁTICA E INHIBICIÓN.

1.- Se mide la cinética de un enzima como función de la concentración de sustrato en

presencia y ausencia de un inhibidor (I), a concentración 4 mM.

a) ¿Cuáles son los valores de Vmax y Km en ausencia de inhibidor? ¿Y en su presencia?

b) ¿De qué tipo de inhibición se trata? Justifícalo mediante una representación de

Lineweaver-Burk.

Se trata de una inhibición competitiva ya que la

vmax no varía y la km aumenta con respecto a
la que no está inhibida. En la gráfica se sabe
porque el corte con el eje y no varía mientras
que con el eje x si.

C)¿Cuál es la constante de unión (Ki) de este inhibidor?

d) Calcula las velocidades iniciales (Vo) de las reacciones a concentraciones de inhibidor de 4
y 8 mM, utilizando una concentración de sustrato de 15 mM.

e)

¿Cuál es el porcentaje de inhibición obtenido en el apartado anterior para ambas reacciones?

2.- Se mide la cinética de un enzima como función de la concentración de sustrato en
presencia y ausencia de un inhibidor (I), a las concentraciones 2 y 4 mM.

a) ¿Cuáles son los valores de Vmáx y Km en ausencia de inhibidor? ¿Y en su presencia?

b) ¿De qué tipo de inhibición se trata? Justifícalo mediante una representación de

Lineweaver-Burk.

Se trata de una inhibición acompetitiva ya que

disminuye tanto la Vmax como la Km. Los
cortes con el eje x e y se modifican pero la
pendiente no, porque el cambio es
proporcional (por eso se producen rectas
paralelas).
c) ¿Cuál es la constante de unión (Ki) de este inhibidor?

d) Calcule la relación Km/Vmáx en las diferentes condiciones estudiadas. ¿Qué significado

tiene este valor?

3º.- Se estudia la cinética de una enzima y el efecto de la concentración de sustrato sobre la

actividad enzimática, en ausencia y presencia de una concentración conocida de una
molécula moduladora, donde se ha determinado previamente que la Vmáx de dicha enzima
es de 1 μmol/min. Los valores de velocidad de reacción obtenidos se incluyen en la tabla
siguiente:

a) Representa estos datos gráficamente para tener una curva de velocidad en función de la
concentración de sustrato. De acuerdo con el aspecto de la curva obtenida, ¿parece
cooperativa?

Se trata de una curva hiperbólica

que corresponde con la cinética
de Michaelis menten, de las
enzimas no alostéricas.

Se trata de una cooperatividad

negativa, debido a la forma
hiperbólica de la curva.
b) Genera una representación de Hill con estos datos (en presencia y ausencia de la molécula
moduladora. ¿Muestra la representación de Hill algún indicio de existencia de
cooperatividad? ¿De qué tipo? ¿Cuánto vale el coeficiente de Hill? ¿Y el valor de la Km?

c) ¿Qué valor de Km aparente se obtiene en presencia del modulador?¿Cómo se comporta el

modulador? ¿A qué clase de enzima alostérica pertenece?

Como el valor de la Km aparente en presencia del modulador es mayor que la Km sin

modulador, podemos decir que se trata de un modulador alostérico negativo, lo que significa
que disminuye la afinidad y se dificulta la unión con el sustraro.

Se trata de una enzima alostérica heterotrópica ya que la presencia del modulador solo afecta
a la Km, y concretamente de clase k ya que se modifica la afinidad de la enzima por el sustrato.