FACULTAD DE QUÍMICA

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

6º. Semestre. QFB

PRÁCTICA 12.

DETERMINACIÓN DE FÓSFORO EN BEBIDAS DE COLA POR

ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS

INTRODUCCIÓN:

El ácido fosfórico es un líquido cristalino incoloro e inodoro y en su forma pura es peligro si se entra en
contacto directo o con sus vapores, ya que irritan la piel, los ojos y el sistema respiratorio.

Esta sustancia es adicionada a muchas bebidas gaseosas, especialmente a las de cola, debido a que
proporciona un sabor ácido; además previene el crecimiento de moho y bacterias que pueden
multiplicarse fácilmente en una solución azucarada. La mayor parte de la acidez de los refrescos
proviene del ácido fosfórico.

Por otro lado, el fósforo, es un mineral esencial en la dieta ya que contribuye al crecimiento y
mantenimiento de los huesos y dientes. Estudios en humanos han demostrado que la ingesta de 1 - 2 g
diarios de ácido fosfórico es necesaria para suplir los requerimientos metabólicos de este micronutriente.

Es poco común padecer de deficiencia de ácido fosfórico, ya que el fósforo se encuentra naturalmente
en muchos alimentos y el ácido fosfórico se usa como aditivo en muchos otros, por lo que la mayoría de
las personas obtienen suficiente de este mineral en su dieta.

Sin embargo, una ingesta excesiva puede causar problemas a la salud, provocando osteoporosis y
enfermedades cardíacas. El calcio y el fósforo trabajan juntos para formar y mantener los dientes y
huesos sanos, por lo que estos elementos en equilibrio para que sean efectivos. Demasiado fósforo
puede disminuir la cantidad de calcio en el cuerpo, provocando pérdida de masa ósea. También puede
afectar la capacidad de su cuerpo para utilizar otros minerales, como hierro, zinc y magnesio.

La determinación de fósforo en forma de ácido fosfórico puede realizarse mediante espectrofotometría

UV-visible, empleando el método del azul de molibdeno.

En realidad, el ion ortofosfato o cualquiera de sus especies ácidas, no presentan absorción en el espectro
UV-Vis; sin embargo, es posible generar un compuesto cromóforo sensible a esta zona del espectro
cuando se adiciona molibdato de amonio a una disolución que contiene fosfatos en medio ácido. El
molibdato se reduce a un complejo azul soluble (fosfomolibdato de amonio) de acuerdo con las
reacciones químicas de la siguiente ecuación (Worsfold et al., 2005; APHA, 2012):

7H3PO4 + 12[(NH4)6Mo7O24·4H2O] ↔ 7[(NH4)3(PO4(MoO3)12)] + 51NH4+ + 51OH- + 33H2O

El complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla de Mo+5 y Mo+6, su composición es indefinida. La

absorbancia de este complejo es medida espectrofotométricamente y es proporcional a la cantidad de
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fósforo presente en la muestra. Varios agentes reductores se han utilizado para este fin, entre ellos el
cloruro estañoso, agentes reductores orgánicos como el ácido 1-amino-2-naftol-4-sulfónico + sulfito,
hidroquinona, así como ácido ascórbico.

OBJETIVOS:

• Conocer las partes y el manejo de un espectrofotómetro de UV-VIS.

• Realizar una curva de calibración para cuantificar, el contenido de fósforo en una muestra de
refresco de cola empleando la técnica de espectrofotometría de UV-VIS.

ACTIVIDAD PREVIA:

Responder el siguiente cuestionario en la bitácora. Es requisito para el ingreso al laboratorio.

1. Explique el fundamento fisicoquímico de la determinación cuantitativa por espectrofotometría de

UV-VIS.
2. ¿Qué tipo de muestras pueden ser analizadas por espectrofotometría de UV-VIS?
3. ¿Cuáles son los intervalos de límites de detección y cuantificación comunes para la técnica de
UV-VIS?
4. ¿Qué es un grupo cromóforo en espectrofotometría de UV-VIS?
5. ¿Para qué se realiza un barrido de longitud de onda en espectrofotometría de UV-VIS y qué tiene
que ver esta actividad con la sensibilidad del método?

MATERIAL E INSTRUMENTACIÓN:

• Espectrofotómetro de UV-VIS
• Balanza analítica
• Sonicador
• 8 matraces volumétrico de 10 mL
• 2 matraces volumétrico de 25 mL
• 3 matraces volumétrico de 50 mL
• 5 vasos de precipitados de 25 mL
• 8 celdas de cuarzo para espectrómetro de UV-Vis
• 4 pipetas graduada de 5 mL

REACTIVOS:

• Fosfato monobásico de potasio (K2HPO4)

• Molibdato de amonio ((NH4)6Mo7O24)
• Ácido ascórbico (5-((s)-1,2-dihidroxietil)-3,4-dihidroxifuran-2(5H)-ona)
• Ácido sulfúrico (H2SO4)
• Agua tipo 1

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PROCEDIMIENTO

Preparación de disoluciones:

• Disolución de P2O5

1. Preparar 25 mL de una solución stock de 100 ppm de P2O5 a partir de fosfato monobásico de
potasio o de fosfato dibásico de potasio.
2. De la solución de 100 ppm de P2O5 preparar 25 mL de una solución de trabajo de 4 ppm.

• Disolución reductora

3. Pesar 0.156 g de molibdato de amonio y disolver en 5 mL de agua destilada.

4. Pesar 0.2112 g de ácido ascórbico y disolver en 10 mL de agua destilada
5. Medir 2.2 mL de H2SO4 concentrado y diluir en 15 mL de agua.
6. Mezclar las tres soluciones anteriores y aforar a 50 mL con agua destilada.

Curva de calibración:

7. De la solución de trabajo, extraer alícuotas de 1, 2, 3, 4 y 5 mL.

8. Agregar 4 mL de la solución reductora y aforar a 10 mL.
9. Incubar durante 30 minutos a 50º c (baño maría).

Preparación de la muestra (Trabajar un duplicado)

10. Desgasificar aproximadamente 10 mL de la muestra con vacío y agitación constante o en un

baño de ultrasonido.
11. Tomar 1 mL de refresco desgasificado y aforar a 50 mL.
12. Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior, añadir 4 mL de solución reductora y aforar a
10 mL con agua destilada.
13. Incubar durante 30 minutos a 50 ºC (baño maría).
14. Se debe trabajar con un blanco.

Análisis espectrofotométrico

15. Realizar un barrido de exploración con el punto de la curva de calibración más concentrado, de
700 a 850 nm.
16. A partir de la longitud de onda en la que se alcanza el máximo de absorción, realizar el análisis
de la curva de calibración y las muestras.

Cálculos

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17. Utilizar la curva de calibración para cuantificar el contenido de fósforo en la muestra.

18. Graficar los valores de absorbancia contra concentración en ppm.

REFERENCIAS
• Cavazos, N.; Zárate, L; Torres, E. Determinación de fósforo y cafeína en bebidas de cola.
Educación química, 12, 2, pp. 115-120.
• Cáñez M, García A. Validación de un método analítico para la determinación de fósforo por
espectrofotometría ultravioleta-visible. Revista de Ciencias Biológicas y de la Salud. XVII (1): 32-
39 (2015).

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