TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico De Los Mochis

Reporte de laboratorio: Determinación de fósforo en bebidas de cola

Alumna:

Otero Robles Grecia María

No. De control:

21441163

Carrera:

Ingeniería Bioquímica

Grupo:

T2N

Materia:

Análisis instrumental

Profesor(a):

Dra. Monroy García Imelda Noehmi

15-marzo-2023
INTRODUCCIÓN
México es el primer lugar per cápita en consumo de refresco en el mundo. En general,
se piensa que los refrescos de cola son bebidas relativamente inofensivas y que un
excesivo consumo de estos productos no causa más daño que caries dental y aumento
de peso debido al alto contenido de azúcar. Sin embargo, los daños pueden ir más allá.
Además de azúcar, un refresco de cola tiene ácido fosfórico, cafeína y nuez de cola, y
estos elementos pueden llegar a causar diferentes trastornos al organismo. El fósforo
está íntimamente relacionado con el calcio tanto en la nutrición humana como en la
absorción de este mineral. Un aporte alto de fósforo impide la absorción de calcio y
aumenta la cantidad de hormona paratiroidea, la cual puede disminuir la formación de
huesos (Farías, 1988).

ESPECTROFOTOMETRIA se refiere a la medida de cantidades relativas de luz

absorbida por una muestra, en función de la longitud de onda. Cada componente de la
solución tiene su patrón de absorción de luz característico. Comparando la longitud de
onda y la intensidad del máximo de absorción de luz de una muestra versus soluciones
estándar, es posible determinar la concentración de componentes disueltos en la
muestra.

Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros métodos analíticos de laboratorio son

varias: es rápida, precisa, versátil, fácil de usar y eficiente en costo. Los
espectrofotómetros se han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años con
los avances de tecnología, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de
química analítica.

Para la determinación de fósforo la reacción es la siguiente:

7H3PO4 + 12(NH4)6Mo7O24 4H2O 7(NH4)3(PO4(MoO3 )12) + 51NH4 +

51OH- + 33H2O

El complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla de Mo+5 y Mo+6, su composición es

indefinida. Este complejo es reducido a un compuesto azul soluble cuya absorbancia es
medida espectrofotométricamente a una longitud de onda de 830 nm y es proporcional
a la cantidad de fósforo presente en la muestra, como agente reductor se utiliza el ácido
ascórbico.

OBJETIVOS
 Conocer los componentes de un espectrofotómetro.
 Aprender a manejar el espectrofotómetro.
 Determinar espectrofotométricamente el contenido de fósforo en un refresco de
cola, utilizando el método de fosfomolibdato.
 Aplicar las leyes de la espectrofotometría en el cálculo de la concentración de una
muestra problema.
 Aprender a elaborar e interpretar las curvas de calibración.

MATERIALES
Equipo o material Reactivos
1 Espectrofotómetro 0.0273 g Fosfato diácido de potasio
(KH2PO4)
9 matraces de aforación de 50 mL 0.7800 Molibdato de amonio
3 pipetas de 5 mL 1.056 g Ácido ascórbico
1 pipeta de 1 mL 11 mL de H2SO4 concentrado
6 celdas para espectrofotómetro Agua desionizada
2 vasos de precipitado de 50 mL
Piceta Insumos que debe traer el alumno
(INDISPENSABLE PARA PODER
REALIZAR LA PRÁCTICA)
1 probeta de 25 mL Refresco de cola, ponerse de acuerdo
para traer diferentes marcas.
1 propipeta de 2mL
1 propipeta de 5mL NOTA: El equipo deberá desgasificar el
refresco un día antes de la práctica
1 incubadora con termómetro
(destapándolo y agitándolo
continuamente hasta eliminar el gas).
Todo el material utilizado debe
lavarse previamente con agua
destilada. No emplear jabón para su
limpieza.

METODOLOGÍA
Inicialmente, se prepararon 6 estándares en matraces de aforación de 50 mL
correspondientes a 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 y 2 ppm. Posteriormente, se agregaron a cada
matraz 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL respectivamente de la solución patrón, 20 mL de solución
reductora y se aforo a 50 mL con agua destilada. Esto fue hecho de manera cuidadosa
para poder obtener resultados óptimos, ya que cualquier error, ya sea más cantidad de
solución patrón, o una aforación incorrecta, puede alterar por completo el resultado. Al
mismo tiempo de la preparación de los 6 estándares que servirían como curva de
calibrado, se preparó la muestra de refresco. Se tomó 1 mL de refresco desgasificado y
se aforo a 50 mL. De esta solución formada, se tomaron 5 mL, y a esos 5 mL se le
agregaron 20 mL de solución reductora, para finalmente aforarlo a 50 mL con agua
destilada. Obteniendo así la muestra. Una vez obtenidas las muestras, se introdujeron al
horno, y se incubaron durante 45 minutos aproximadamente a 50ºC. Pero
deliberadamente se dejaron unos minutos más, debido a la perdida de calor causada por
la introducción de las demás muestras y estándares de los diversos equipos que
trabajaron en el laboratorio. Después del tiempo de incubación, se extrajeron los
estándares y las muestras, y se tomó la porción indicada y se introdujo en la celda. Paso
seguido, se introdujeron las celdas según el número del sistema, iniciando con el sistema
0, el Blanco, que permitirá ajustar la absorbancia medida por el espectrofotómetro, esto
830 nm. Finalmente, se leyeron y recopilaron los datos, elaborando una tabla a base de
los resultados obtenidos.

RESULTADOS Y ANÁLISIS
Para determinar la longitud de onda se utilizó el estándar de mayor concentración de
P2O5 y a partir de este se realizó un barrido para determinar la longitud de onda (λmáx.)
a la cual se obtiene un valor máximo de absorbancia.

ML. AGREGADOS
SISTEMA DE SOLUCIÓN ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN
PATRÓN (100PPM)
0 0 0 0
1 1 0.432 2
2 2 0.692 4
3 3 1.22 6
4 4 1.39 8
5 5 1.66 10
MUESTRA 0.102
Tabla 1. Cálculos para curva de calibración.

Posteriormente, se presenta la gráfica de los resultados, en la cual los valores situados

en la abscisa (X) corresponden a los valores de la concentración de cada estándar en
partes por millón (ppm), y los valores de la ordenada (Y) corresponden a la absorbancia
obtenida de acuerdo a la concentración del estándar.

Imagen 1. Resultados de concentración y absorbancia.

 Imagen 2. Estándares después de 45 minutos de incubación.

-Obtener la ecuación de la recta, calcular el coeficiente de correlación (r), y emitir juicios

respecto al valor obtenido.

La ecuación de la recta obtenida, es (0.0031) + (0.1671) (x). Y el coeficiente

correlación r da un valor de 0.9908. Por lo tanto, el margen de error en el sistema
fue poco. El sistema número 3 fue el de mayor desviación, lo que indica errores
en la preparación de este.

-Calcular la concentración del P 2 O 5 en el refresco:

a) Interpolando en la gráfica. Interpolando en la gráfica, se obtiene que, por una

absorbancia de 0.102, se espera que la concentración se encuentre entre 0 y 1.
Usando un punto medio, seria 0.5ppm aproximadamente.
b) Usando la ecuación de la gráfica obtenida. Haciendo uso de la ecuación
obtenida, se tiene que: m = 0.264
A = b+mx  (0.102) = 0 + (0.264) C  C = (0.102) / (0.264) = 0.38ppm.
Por lo que se procede a averiguar la concentración mediante:
C1V1 = C2V2  (0.38ppm)(50mL) = C2 (5ml)  C2= 3.8ppm
C1V1 = C2V2  (3.8ppm)(50mL) = C2 (1ml)  C2= 190ppm P2O5

-Determinar el contenido de fósforo presente en el refresco, toma en cuenta la dilución

realizada y el factor estequiométrico para transformar P 2 O 5 en P.
 Se convierten los pesos moleculares:
P(2) = 37(2) = 62 g/mol
0(5) = 16(5) = 80 g/mol
Por lo que se tendría usualmente, 142 g/mol pero solo se busca conocer la
cantidad de P, así que se realizan fórmulas de 3:
((62 g/mol) (100%)) / (142 g/mol) = 43.66%
((43.66%) (190 ppm)) / (100%) = 82.954 ppm

CONCLUSIONES
Se cumplió el objetivo de conocer y aprender el manejo de los diferentes aparatos
utilizados en el laboratorio (espectrofotómetro de uv-vis, la máquina de incubación con
ultrasonido), con el propósito de determinar y realizar una curva de calibración para
cuantificar la concentración de fosforo en la muestra de cola (Coca-Cola) que se analizó,
esto mediante la preparación de estándares, las cuales se utilizaron para el barrido de
exploración.

El espectrofotómetro de UV-Vis mide la capacidad de transmitancia de las soluciones, la

cual es inversa a la absorbancia. Gracias a este equipo se puede determinar la
concentración de fósforo de las muestras indirectamente a partir de las absorbancias
obtenidas en base a las concentraciones del P2O5.

La absorbancia es directamente proporcional a la concentración de fósforo en las

soluciones. Para lograr lo anterior, en esta práctica se utilizó el método
espectrofotométrico del azul de molibdeno con el molibdato de amonio y ácido ascórbico
para desarrollar color.

El barrido de exploración se realizó a partir de la solución estándar más concentrada

para que las absorbancias obtenidas de las demás soluciones

estándar estén dentro de la longitud de onda establecida.

Es necesaria la medición de un blanco, y la realización de una curva de calibración para
minimizar los errores sistemáticos al momento de medir las absorbancias de las
muestras.

REFERENCIAS
Arias Garzón, K. J. (2020). La espectrofotometría UV-Vis como una herramienta para el
desarrollo de las habilidades metacognitivas, un estudio enfocado en la actividad
antioxidante. México: Universidad Pedagógica Nacional.

González, E., Ahumada, R., Medina, V., Neira , J., & González, U. (2004).
Espectrofotometría de absorción atómica con tubo en la llama: aplicación en la
determinación total de cadmio, plomo y zinc en aguas frescas, agua de mar y
sedimentos marinos.

Hereña Robles, C. J., & Melo De Paz, I. S. (2018). El espectrofotometro uv-visible y su

utilización en el analisis de cobre. México: Repositorio.

Oxte Rodríguez, Z., & Zapata Cruz, G. E. (23 de Agosto de 2012). DocPlayer. Obtenido
de https://docplayer.es/38895796-Laboratorio-de-metodos-instrumentales-
practica-1-determinacion-de-fosforo-en-bebidas-de-cola-por-espectrofotometria-
uv-vis-integrantes.html

S. Murillo, Y., Giraldo, L., & Moreno, J. C. (2010). DETERMINACIÓN DE LA CINÉTICA

DE ADSORCIÓN DE 2,4-DINITROFENOL EN CARBONIZADO DE HUESO
BOVINO POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VIS. Bogotá Colombia: Universidad
de los Andes.

ANEXOS
1. Definir cada uno de los siguientes términos:
 a) Absorbancia: Medida de la atenuación de una radiación al atravesar una
sustancia, que se expresa como el logaritmo de la relación entre la intensidad
saliente y la entrante.
b) Transmitancia: La transmitancia se define como la cantidad de energía que
atraviesa un cuerpo en determinada cantidad de tiempo.
c) Longitud de paso óptico: La distancia por la que pasa la luz a través de la
muestra y su contenedor.
d) Longitud de máxima absorción: Es la representación gráfica de transmitancia
o absorción frente a longitudes de onda. Además, cada sustancia tiene un
espectro característico para cada sustancia.
e) Curva de calibración: La curva de calibración es un método muy utilizado en
química analítica para determinar la concentración de una sustancia (analito)
en una muestra desconocida, sobre todo en disoluciones

2. Dibuja un diagrama esquemático de un espectrofotómetro indicando cada una de

sus partes y realiza una breve descripción de su función.

Un espectrofotómetro está conformado por las siguientes partes:

 Fuente de luz: Lámpara que emite las longitudes de onda.
 Colimador: Lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un haz de rayos
paralelos.
  Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.
 Muestra: Disoluciones a analizar.
 Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el
desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una
corriente eléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
3. Enuncia las siguientes leyes de la espectrofotometría.
a) La Ley de Bouguer: "La intensidad de un haz de luz monocromática, que incide
perpendicular sobre una muestra, decrece exponencialmente con la
concentración de la muestra", según esta ley: A = K.C. la celda usada. C =
Concentración de la muestra.
b) La Ley de Beer: La intensidad de un haz de luz monocromática, que incide
perpendicular sobre una muestra, decrece exponencialmente con la
concentración de la muestra", según esta ley: A = K.C. la celda usada. C =
Concentración de la muestra.
c) La Leyes fundamentales de la espectrofotometría: l método
espectrofotométrico se rige por dos leyes fundamentales: Ley de Lambert y Ley
de Beer

4. ¿Qué tipo de soluciones no cumplen la Ley de Lambert- Beer?

La ley tiende a no ser válida para concentraciones muy elevadas, especialmente si el
material dispersa mucho la luz. La relación de la ley entre concentración y absorción
de luz está basada en el uso de espectroscopía para identificar sustancias.

5. ¿Qué es una curva de calibración y para qué sirve?

una curva de calibración es la representación gráfica que relaciona una señal
instrumental en función de la concentración de un analito y define un intervalo de
trabajo en el cual, los resultados a informar tienen una precisión y exactitud conocida
que ha sido documentada en la validación de cada método.

6. ¿Por qué es importante el preparar un blanco para esta prueba?

Un blanco de muestra puede corregir posibles errores derivados del color o la turbidez
de una muestra en un momento determinado antes de añadir reactivos. Al poner a
cero un instrumento con un blanco de muestra, solo se mide el color que se desarrolla
a partir de la reacción con los reactivos.

7. ¿Cuál es la razón de que la longitud de onda que se selecciona en el

espectrofotómetro sea de 830 nm?
Para tener una medición y así registrar rangos espectrales UV/Vis, más exactos.

8. Explique la razón de los siguientes cuidados que se deben tener con la celda del
espectrofotómetro:
 Limpiarla con papel arroz antes de introducirla al equipo.
 Llenarla hasta un volumen determinado.
 Escurrir perfectamente la celda antes de emplearla nuevamente.
 No usar escobillón al lavarla.
 No emplear jabón en su limpieza.
 Tener cuidado de que coincida la marca de la celda con la del
espectrofotómetro.

9. ¿Cuáles pueden ser las posibles fuentes de error en las determinaciones

espectrofotométricas?
Error relativo en la determinación de la concentración procedente de un error dado en
la medida de la transmitancia.

10. ¿Qué problemas tendría con los resultados de la curva de calibración si no dejo
reposar las muestras el tiempo indicado por la técnica?
No tendríamos un resultado estandarizado por lo que estaría mal ejecutado.
- ¿Qué pasa si los dejo más tiempo que el que me indica?
Se tendrá un mal diseño de calibración ya que será un poco difícil de tener exactos
los datos del espectrofotómetro.