PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 16

ASIGNATURA: Bioquímica Agroindustrial

“Cuantificación de aspartame y acesulfame K en bebidas gaseosas”
I. INTRODUCCIÓN
Astudillo y Orellana (2017), en su investigación, indican que debido a los posibles efectos
carcinogénicos, mutagénicos y genotóxicos de los edulcorantes artificiales no calóricos y el
consumo masivo de productos con estos aditivos, su uso ha sido muy controversial. Existen
normas que establecen los límites máximos de edulcorantes que deben estar presentes en
dichas bebidas; sin embargo, mantener un control de estas concentraciones se complica
debido a que en las normas generales de etiquetado de alimentos, no. A partir del consumo
masivo de edulcorantes, se ha visto necesario determinar su inocuidad, para lo cual, se han
realizado estudios como el ejecutado por la facultad de Medicina de la Universidad de Harvard
en el que se evidenció la reducción de actividad de la Fosfatasa Alcalina Intestinal en ratones
que consumieron agua con Aspartame. Debido a la controversia aún existente sobre el efecto
tóxico del consumo de edulcorantes no calóricos y el actual consumo masivo de productos
bajos en calorías, es necesario conocer la concentración de dichos edulcorantes en las
bebidas gaseosas, con el fin de no superar los valores recomendados por la Food and
Agriculture Organization of the United Nations (FAO), de 600 mg/kg para Acesulfame de
potasio y para Aspartame respectivamente, y a su vez mantener la inocuidad en su consumo,
respetando la Ingesta Diaria Admisible (IDA) establecida por la Food and Drug Administration
(FDA), de 40 mg/kg de peso corporal para Aspartame y 15 mg/kg de peso corporal para
Acesulfame de potasio, su uso no se restringe para niños y mujeres embarazadas, sin
embargo no se recomienda su consumo (Codex Alimentarius, 2013, citado por Astudillo y
Orellana, 2017). Es así que la presente práctica, trata de la cuantificación de aspartame y
acesulfame K en gaseosas, siendo de mucho interés e importancia para el estudiante de
Ingeniería Agroindustrial.

II. OBJETIVOS
2.1. Conocer de modo virtual la metodología para cuantificar aspartame y acesulfame K en
bebidas gaseosas.
2.2. Identificar virtualmente los materiales, reactivos y equipos utilizados en cuantificación de
aspartame y acesulfame K en bebidas gaseosas.

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA (MARCO TEÓRICO)

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1. Muestras:
- Diferentes tipos de bebidas gaseosas.

4.2. Materiales:
- Balones de aforo 1000, 500, 250, 100, 50 mL.
- Pipetas serológicas de 5 y 10 mL.
- Tubos de ensayo tapa rosca 15 mL.
- Probetas de 50 mL.
- Cápsulas de porcelana.
- Vasos de precipitación de 250 y 600 mL.
- Embudo caña corta.
- Soporte para embudos.
- Varillas de agitación.
- Espátulas

4.3. Equipos:
- Balanza analítica.
- Estufa.
- Espectrofotómetro UV y luz visible (VIS).
- Cámara fotográfica
- Teléfono móvil (celular)

4.4. Reactivos:
- Éter etílico.

1
 - Ácido sulfúrico al 50%.
- Hidróxido de Sodio al 50% (p/v).
- Etanol al 99%.
- Acetato de etilo.
- Agua destilada
- Estándar de Acesulfame de potasio.
- Estándar de Aspartame.

4.5. Metodología
4.5.1. Preparación de e estándares y curvas de calibración
a. Curva de calibración Acesulfame de potasio
- Disolver 0,5 g de Acesulfame de potasio en 10 mL de agua destilada.
- Aforar a 500 mL para obtener una solución madre de 1000 partes por millón
(ppm).
- Preparar soluciones de 500, 250, 100, 50, 25, 10 y 5 ppm a partir de la solución
madre.
- Realizar las respectivas lecturas y se construyó la curva de calibración.

b. Curva de calibración Aspartame

- Disolver 0,5 g de Aspartame con 10 mL de etanol al 99%.
- Aforar a 500 mL obteniendo una solución madre de 1000 partes por millón (ppm).
- Preparar soluciones de 500, 250, 100, 50, 25, 10 y 5 ppm a partir de la solución
madre.
- Realizar las respectivas lecturas y se construyó la curva de calibración.

4.5.2. Extracción y lectura de muestras

a. Extracción de Acesulfame de potasio
- Colocar 25 mL de bebida en un embudo de separación.
- Añadir 5 mL de ácido sulfúrico al 50% y dejar enfriar a temperatura ambiente.
- Agregar dos porciones de 25 mL de éter etílico, descartar la capa acuosa.
- Añadir a la capa etérea 5 mL de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y dejar enfriar
a temperatura ambiente.
- Añadir tres porciones de etanol al 99%, descartar la capa etérea.
- Llevar el extracto a la estufa a 40°C y evaporar a sequedad.
- Disolver el residuo con 12,5 mL de agua destilada.

b. Cuantificación de Acesulfame de potasio en espectrofotómetro ultravioleta

- Realizar un barrido colocando agua destilada en la celda de referencia y la
solución de 25 partes por millón (ppm) en la celda de muestra.
- Determinar a una longitud de onda de 210 nm.
- Realizar las lecturas de los extractos de Acesulfame de potasio por triplicado y
anotar las lecturas correspondientes.

c. Extracción de Aspartame
- Colocar 25 mL de bebida en un embudo de separación.
- Añadir 5 mL de ácido sulfúrico al 50% y dejar enfriar a temperatura ambiente.
- Agregar dos porciones de 25 mL de éter etílico, descartar la capa etérea.
- Añadir a la capa acuosa 5 mL de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y dejar enfriar
a temperatura ambiente.
- Añadir dos porciones de acetato de etilo, descartar la capa acuosa.
- Filtrar a través de papel filtro previamente remojado con acetato de etilo.
- Llevar el filtrado a la estufa a 40°C y evaporar a sequedad.
- Disolver el residuo on 12,5 mL de etanol al 99%.

d. Cuantificación de Aspartame en espectrofotómetro ultravioleta

- Realizar un barrido colocando etanol al 99% en la celda de referencia y la
solución de 25 partes por millón (ppm) en la celda de muestra.
- Determinar a una longitud de onda de 212 nm.
- Realizar las lecturas de los extractos de Aspartame por triplicado y anotar las
lecturas correspondientes.
- Calcular la concentración de las muestras por medio de la ecuación:
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏

2
 Donde:
y = Absorbancia de las muestras,
m = Pendiente,
x = Concentración del analito de interés, y,
b = Ordenada al origen.

V. RESULTADOS

VI. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS

VII. CONCLUSIONES

VIII. RECOMENDACIONES

IX. CUESTIONARIO
9.1. ¿Desde cuándo se vienen usando los edulcorantes aspartame y acesulfame K?
9.2. ¿Qué efectos dañinos producen en el organismo? Indique algún trabajo de investigación
al respecto.
9.3. ¿Qué son los edulcorantes naturales sin calorías? Explique qué es la stevia, la taumatina
y el Lou Han Guo.
9.4. ¿Cómo futuro Ingeniero Agroindustrial, qué alternativa propondría a las empresas que
usan los edulcorantes artificiales para evitar afectar la salud de la población?

X. BIBLIOGRAFÍA