“Año del Bicentenario del Perú: 200 años de independencia”

UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIA AMBIENTALES
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

INFORME N°16

CUANTIFICACIÓN DE ASPARTAME Y ACESULFAME K EN BEBIDAS

GASEOSAS

CURSO : BIOQUIMICA AGROINDUSTRIAL

INTEGRANTES : DENNIS RICOPA VASQUEZ

DOCENTE : Ing. RONALD MARLON LOZANO REATEGUI

CICLO : V

PUCALLPA – YARINACOCHA

2021

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I. INTRODUCCIÓN
Astudillo y Orellana (2017), en su investigación, indican que debido a los posibles
efectos carcinogénicos, mutagénicos y genotóxicos de los edulcorantes artificiales no
calóricos y el consumo masivo de productos con estos aditivos, su uso ha sido muy
controversial. Existen normas que establecen los límites máximos de edulcorantes
que deben estar presentes en dichas bebidas; sin embargo, mantener un control de
estas concentraciones se complica debido a que en las normas generales de
etiquetado de alimentos, no. A partir del consumo masivo de edulcorantes, se ha visto
necesario determinar su inocuidad, para lo cual, se han realizado estudios como el
ejecutado por la facultad de Medicina de la Universidad de Harvard en el que se
evidenció la reducción de actividad de la Fosfatasa Alcalina Intestinal en ratones que
consumieron agua con Aspartame. Debido a la controversia aún existente sobre el
efecto tóxico del consumo de edulcorantes no calóricos y el actual consumo masivo
de productos bajos en calorías, es necesario conocer la concentración de dichos
edulcorantes en las bebidas gaseosas, con el fin de no superar los valores
recomendados por la Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO),
de 600 mg/kg para Acesulfame de potasio y para Aspartame respectivamente, y a su
vez mantener la inocuidad en su consumo, respetando la Ingesta Diaria Admisible
(IDA) establecida por la Food and Drug Administration (FDA), de 40 mg/kg de peso
corporal para Aspartame y 15 mg/kg de peso corporal para Acesulfame de potasio, su
uso no se restringe para niños y mujeres embarazadas, sin embargo no se
recomienda su consumo (Codex Alimentarius, 2013, citado por Astudillo y Orellana,
2017). Es así que la presente práctica, trata de la cuantificación de aspartame y
acesulfame K en gaseosas, siendo de mucho interés e importancia para el estudiante
de Ingeniería Agroindustrial.

II. OBJETIVOS
2.1. Conocer de modo virtual la metodología para cuantificar aspartame y
acesulfame K enbebidas gaseosas.
2.2. Identificar virtualmente los materiales, reactivos y equipos utilizados en
cuantificación deaspartame y acesulfame K en bebidas gaseosas.

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA (MARCO TEÓRICO)

3.1. ADITIVOS ALIMENTICIOS
Cualquier sustancia que no se consume normalmente como alimento por sí
misma, ni se usa normalmente como ingrediente típico del alimento, tenga o no
valor nutritivo, cuya adición intencional al alimento para un fin tecnológico
(inclusive organoléptico) en la fabricación, elaboración, tratamiento, envasado,

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 empaque, transporte o almacenamiento provoque, o pueda esperarse
razonablemente que provoque directa o indirectamente, el que ella misma o sus
subproductos lleguen a ser un complemento del alimento o afecten sus
características. Esta definición no incluye los contaminantes, ni las sustancias
añadidas al alimento para mantener o mejorar las cualidades nutricionales
(Codex Alimentarius, 2006).
Los aditivos alimenticios juegan un rol vital en la industria alimenticia moderna y
generalmente, son usados para mantener la calidad y características de los
alimentos. (Zhu et al., 2005). Los preservantes son aditivos alimenticios, y entre
los comúnmente utilizados están el ácido sórbico y sus sales, ácido benzoico y
sus sales. La Vanilina, es un aditivo alimenticio importante que actúa como
compuesto saborizante. Otro tipo de aditivo alimenticio son los edulcorantes y los
más comunes son: sacarina, aspartame (αAspartame) y acesulfame-k, cuyo uso
está permitido en 90 países. (Demiralay et al., 2006).
3.2. EDULCORANTES
Son compuestos que brindan sabor dulce a los alimentos, pueden clasificarse en
dos categorías: los que dan cuerpo o masivos y los intensificadores de dulzura.
(Abreu, 2000). Los intensificadores de dulzura son aquellos que en cantidades
diminutas incrementan el sabor dulce de los alimentos. Los edulcorantes que dan
cuerpo, son aquellos que su dulzura es menor a la sacarosa y son usados como
compuestos que brindan consistencia (Mortensen, 2006).

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1. Muestras:
- Diferentes tipos de bebidas gaseosas.

4.2. Materiales:
- Balones de aforo 1000, 500, 250, 100, 50 mL.
- Pipetas serológicas de 5 y 10 mL.
- Tubos de ensayo tapa rosca 15 mL.
- Probetas de 50 mL.
- Cápsulas de porcelana.
- Vasos de precipitación de 250 y 600 mL.
- Embudo caña corta.
- Soporte para embudos.
- Varillas de agitación.
- Espátulas

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4.3. Equipos:
- Balanza analítica.
- Estufa.
- Espectrofotómetro UV y luz visible (VIS).
- Cámara fotográfica
- Teléfono móvil (celular)

4.4. Reactivos:
- Éter etílico.
- Ácido sulfúrico al 50%.
- Hidróxido de Sodio al 50% (p/v).
- Etanol al 99%.
- Acetato de etilo.
- Agua destilada
- Estándar de Acesulfame de potasio.
- Estándar de Aspartame.

4.5. Metodología
4.5.1. Preparación de e estándares y curvas de calibración
a. Curva de calibración Acesulfame de potasio
- Disolver 0,5 g de Acesulfame de potasio en 10 mL de agua destilada.
- Aforar a 500 mL para obtener una solución madre de 1000 partes por
millón(ppm).
- Preparar soluciones de 500, 250, 100, 50, 25, 10 y 5 ppm a partir de la
soluciónmadre.
- Realizar las respectivas lecturas y se construyó la curva de calibración.

b. Curva de calibración Aspartame

- Disolver 0,5 g de Aspartame con 10 mL de etanol al 99%.
- Aforar a 500 mL obteniendo una solución madre de 1000 partes por millón
(ppm).
- Preparar soluciones de 500, 250, 100, 50, 25, 10 y 5 ppm a partir de la
soluciónmadre.
- Realizar las respectivas lecturas y se construyó la curva de calibración.

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4.5.2. Extracción y lectura de muestras
a. Extracción de Acesulfame de potasio
- Colocar 25 mL de bebida en un embudo de separación.
- Añadir 5 mL de ácido sulfúrico al 50% y dejar enfriar a temperatura
ambiente.
- Agregar dos porciones de 25 mL de éter etílico, descartar la capa
acuosa.
- Añadir a la capa etérea 5 mL de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y dejar
enfriara temperatura ambiente.
- Añadir tres porciones de etanol al 99%, descartar la capa etérea.
- Llevar el extracto a la estufa a 40°C y evaporar a sequedad.
- Disolver el residuo con 12,5 mL de agua destilada.

b. Cuantificación de Acesulfame de potasio en espectrofotómetro

ultravioleta
- Realizar un barrido colocando agua destilada en la celda de
referencia y la solución de 25 partes por millón (ppm) en la celda de
muestra.
- Determinar a una longitud de onda de 210 nm.
- Realizar las lecturas de los extractos de Acesulfame de potasio por
triplicado yanotar las lecturas correspondientes.

c. Extracción de Aspartame
- Colocar 25 mL de bebida en un embudo de separación.
- Añadir 5 mL de ácido sulfúrico al 50% y dejar enfriar a temperatura
ambiente.
- Agregar dos porciones de 25 mL de éter etílico, descartar la capa etérea.
- Añadir a la capa acuosa 5 mL de hidróxido de sodio al 50% (p/v) y dejar
enfriara temperatura ambiente.
- Añadir dos porciones de acetato de etilo, descartar la capa acuosa.
- Filtrar a través de papel filtro previamente remojado con acetato de etilo.
- Llevar el filtrado a la estufa a 40°C y evaporar a sequedad.
- Disolver el residuo on 12,5 mL de etanol al 99%.

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 d. Cuantificación de Aspartame en espectrofotómetro ultravioleta
- Realizar un barrido colocando etanol al 99% en la celda de
referencia y la solución de 25 partes por millón (ppm) en la celda de
muestra.
- Determinar a una longitud de onda de 212 nm.
- Realizar las lecturas de los extractos de Aspartame por triplicado y
anotar laslecturas correspondientes.
- Calcular la concentración de las muestras por medio de la ecuación:
� = 𝑚� + 𝑏

Donde:
y = Absorbancia de las
muestras,m = Pendiente,
x = Concentración del analito de
interés, y,b = Ordenada al origen.

V. RESULTADOS

CURVA DE CALIBRACIÓN DE ACESULFAME-K

El siguiente cuadro muestra el área y coeficiente de variación de los diez niveles de

concentración de acesulfame-k, utilizados para realizar la curva de calibración.

El tiempo promedio de elusión del acesulfame-k fue 4.75 minutos.

El nivel de precisión obtenido por el sistema HPLC Agilent 1100 al

determinar las áreas bajo la curva fue aceptable debido a los bajos %CV.
Sin embargo, en la concentración de 25 mg/Kg el %CV fue 6, lo cual
representa que los valores se desviaron 6% de la media.

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VI. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
- Las concentraciones reportadas por el HPLC en el proceso de validación fueron
sometidas a una prueba T-student, para conocer si existía diferencia estadística entre
la concentración conocida y la reportada por el HPLC. La prueba T-student (Pr > |t|
0.1079) indicó que no hay diferencia estadística entre las concentraciones conocidas
al momento de inyectar y los valores reportados por la curva de calibración. Además,
el sistema HPLC fue muy preciso al determinar las concentraciones de acesulfame-k.

VII. CONCLUSIONES
• Se desarrolló una curva de calibración con alta precisión que permite la detección
simultánea de aspartame en concentraciones de 0 a 600 mg/Kg y acesulfame-k en
concentraciones de 0 a 1000 mg/Kg por HPLC
• Las bebidas bajas en calorías recolectadas en distintos centros comerciales de
Tegucigalpa presentaron concentraciones dentro de los límites establecidos por el
Codex Alimentarius.
• Se detectaron dos bebidas de una misma marca que no reportan el uso de
acesulfame-k entre sus ingredientes
VIII. CUESTIONARIO
9.1. ¿Desde cuándo se vienen usando los edulcorantes aspartame y acesulfame
K?
El aspartame fue descubierto en 1965 y fue comercializado en 1985, desde ese
entonces se usaron estos productos.

9.2. ¿Qué efectos dañinos producen en el organismo? Indique algún trabajo de

investigaciónal respecto.
En una investigación publicada por ASATE ( Asociación de Afectados por

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 Tumores Cerebrales en España) dice que: la enfermedades que pueden causar
son; la ceguera, Cáncer, tumores cerebrales, dolores de cabeza, pérdida de la
memoria, convulsiones, pérdida de la visión, coma, TDA, lupus, fibromialgia,
distrofia muscular, Alzheimer, fatiga crónica, diabetes y depresión.

9.3. ¿Qué son los edulcorantes naturales sin calorías? Explique qué es la
stevia, la taumatina y el Lou Han Guo.

Estevia: La estevia es un edulcorante elaborado en laboratorios a partir del

extracto de una planta denominada Stevia rebaudiana, y cuyo sabor dulce
equivale a 250-300 veces el del azúcar de mesa, pero con un insignificante aporte
calórico. Su utilización como aditivo en alimentos y bebidas se aprobó en
noviembre de 2011.

taumatina : Es un edulcorante natural de bajas calorías. Se obtiene del fruto del

árbol africano llamado thaumatococcus, también se obtiene de manera genética.
Esta hasta 2500 veces mas dulce que el azúcar, y es reconocida como la
sustancia natural mas dulce del mundo.

Lou Han Guo: La planta se cultiva por su fruto, cuyo extracto es casi 300 veces
más dulce que el azúcar y se ha utilizado en China como un edulcorante natural
bajo en calorías para bebidas refrescantes, y en la medicina tradicional china para
tratar la diabetes y la obesidad

9.4. ¿Cómo futuro Ingeniero Agroindustrial, qué alternativa propondría a las

empresas que usan los edulcorantes artificiales para evitar afectar la salud
de la población?
Usar los edulcorantes naturales tales como estevia, taumatina y Lou Han guo que
son edulcorantes muy potentes los cuales reemplazarian a los edulcorantes
artificiales.