Capítulo 10 Hemoglobina Y Bilirrubina: Figura 1. Grupo Hemo

2018 - Capítulo 10.
Hemoglobina y bilirrubina Laura Aguirre
CAPÍTULO 10
HEMOGLOBINA Y BILIRRUBINA
Este capítulo abarca el estudio de una molécula muy importante para el

organismo, la hemoglobina, así como el metabolismo de su grupo prostético (el hemo)
y del hierro que lo integra.
La hemoglobina es la principal proteína del glóbulo rojo. Normalmente casi toda
la hemoglobina de la sangre se encuentra dentro de los glóbulos rojos. Su principal
función es la de transportar oxígeno desde los pulmones hacia los tejidos, aunque
también ejerce una función importante en el transporte de CO2 desde los tejidos a
los pulmones. El 15% del CO2 transportado en la sangre se une a la hemoglobina, el
resto difunde al interior del glóbulo rojo, en donde por medio de la anhidrasa
carbónica se transforma en H2CO3.
En cuanto a la estructura, la hemoglobina es una proteína conjugada y como
tal está formada por una parte proteica (4 cadenas de globina) y otra no proteica o
grupo prostético (4 grupos hemo).
Grupo Prostético. El grupo prostético de la hemoglobina es el hem o hemo. Es un

derivado de las porfirinas y es el responsable del color rojo de la hemoglobina
(pórfiro: roca de color rojo). Presenta una estructura plana, ya que todos los átomos
que constituyen el hemo están ubicados en el mismo plano. En el centro del anillo
formado por cuatro pirroles se encuentra un átomo de Fe++ en estado ferroso, el cual
posee 6 valencias coordinadas, 4 de las cuales están ocupadas por los N de los
pirroles, la quinta valencia une el hierro con la globina y la sexta valencia está
disponible para una combinación reversible con el O2 (Fig. 1).
Figura 1. Grupo Hemo
Grupo Proteico. El grupo proteico de la hemoglobina está formado por cuatro

cadenas polipeptídicas de globina. Existen varios tipos de cadenas globínicas: alfa,
beta, gamma, delta, que difieren entre sí en su estructura primaria. La cadena alfa
posee 141 aminoácidos y las cadenas beta, gamma y delta, poseen cada una 146
aminoácidos.
La molécula de hemoglobina se forma por la unión de cuatro de estas cadenas,

iguales de a pares. Esto da lugar a las distintas variedades de hemoglobinas que
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2018 - Capítulo 10. Hemoglobina y bilirrubina Laura Aguirre
veremos más adelante. Por tener más de una cadena polipeptídica, la molécula de
hemoglobina posee estructura proteica cuaternaria. Ejemplo: dos cadenas alfa y dos
cadenas beta (2  2) dan lugar a la denominada hemoglobina principal (Fig. 2).
Figura 2. Hemoglobina Principal
La unión de un grupo hemo a una cadena polipeptídica de globina forma un

monómero. La unión de cuatro monómeros forman una molécula de hemoglobina
(tetrámero). Recordemos que el O2 se une al Fe++ del hemo, por lo tanto, una
molécula de hemoglobina puede unirse reversiblemente a cuatro moléculas de
oxígeno para formar oxihemoglobina.
La hemoglobina se oxigena, no se oxida, ya que el Fe++ (hierro ferroso) no
cambia su estado de oxidación a Fe+++ (hierro férrico), sino que permanece como
Fe++.
1 hem + 1 cadena de globina = 1 monómero de hemoglobina
4 monómeros = 1 molécula de desoxihemoglobina
1 desoxihemoglobina + 4 O2 = 1 molécula de oxihemoglobina
Esquema de un monómero de oxihemoglobina:
Globina
l
− Fe+2 −
l
O2
150
Esquema de una molécula de hemoglobina principal (2  2):
Biosíntesis del grupo HEMO
El adulto normal produce alrededor de 300 mg de hemo por día para atender las
necesidades de renovación de hemoproteinas en el organismo. Ochenta y cinco por
ciento o más de la síntesis se realiza en las células precursoras de eritrocitos de la
medula ósea y el resto en otros tejidos, principalmente hepático.
La biosíntesis se realiza en cuatro etapas principales:

1) Síntesis del ácido -aminolevulínico
2) Formación de porfobilinógeno
3) Síntesis de porfirina
4) Adición de un átomo de Fe++
1) En esta etapa se utiliza succinil-CoA que proviene del ciclo del ácido cítrico,
generado en la etapa de descarbolixación de –cetoglutarato. La glicina procede del
fondo común de aminoácidos libres. La reacción es catalizada por la enzima
mitocondrial -aminolevulinato sintasa dependiente de piridoxal fosfato y Mg++. Es
el principal sitio de control de la síntesis de porfirina. El hemo, hemoglobina y otras
hemoproteínas actúan como inhibidores. La hipoxia, la eritropoyetina y hormonas
esteroideas actúan en cambio induciendo la síntesis de la sintasa.
2) Se realiza en el citosol por medio de la porfobilinógeno sintasa. Esta enzima es
sensible a metales pesados (plomo) y el hemo también la inhibe. Dos moléculas de
ácido -aminolevulinico reaccionan con pérdida de agua. Se forma el porfobilinógeno
que contiene el pirrol.
3) En esta etapa cuatro moléculas de porfobilinógeno forman el anillo tetrapirrólico de
uroporfirinógeno.
4) La etapa final es la incorporación de Fe++ a la protoporfirina para formar hemo. La
reacción es catalizada por la ferroquelatasa o hemo sintasa de localización
mitocondrial (Fig. 3).
151
Figura 3. Síntesis del grupo Hemo. Están marcadas con números las cuatro etapas. En
círculos rosados se muestran los puentes metilénico y meteno
152
La hemoglobina y sus derivados
Los derivados de la hemoglobina surgen en general, de un cambio de estado de

oxidación del Fe++ o del tipo de gas que transporta.
Desoxihemoglobina: cuando el O2 se desprende de la oxihemoglobina, ésta se

transforma en un derivado desoxigenado.
Metahemoglobina: molécula resultante de la oxidación del hierro ferroso (Fe++)

del hemo, a hierro férrico (Fe+++), incapaz de transportar O2. Es de color oscuro y le
confiere a la piel una coloración morena.
Oxihemoglobina: cuando el O2 se fija al Fe++ del hemo, se forma la oxihemoglobina.

La afinidad de la hemoglobina por el O2 es afectada por muchos factores, entre ellos
por la concentración de 2,3 difosfoglicerato el cual disminuye la afinidad de la
hemoglobina por el oxígeno permitiendo así que éste se libere de la hemoglobina y
pueda llegar a las distintas células.
Carboxihemoglobina: cuando el monóxido de carbono (CO) se une al Fe++ del hemo
se forma la carboxihemoglobina. El O2 y el CO compiten entre sí por el mismo sitio de
unión a la hemoglobina. La afinidad de la hemoglobina por el CO es mucho mayor que
por el O2, por lo tanto el CO desplaza el O2 de la hemoglobina para formar un
complejo más estable, reduciendo la capacidad transportadora de oxígeno de la
sangre. Por ello el CO es un gas tóxico para los seres humanos; dicho gas se forma
por la combustión incompleta de materia orgánica: carbón, gas, nafta, cigarrillos, etc.
153
Carbaminohemoglobina o carbohemoglobina: cuando el dióxido de carbono (CO2)

se une a los grupos aminos terminales de las cadenas de globinas de la
desoxihemoglobina se forma la carbaminohemoglobina.
Hemoglobina glicosilada HbA1c: se forma por glicosilación de la hemoglobina. La

glucosa reacciona con la hemoglobina uniéndose al grupo amino (NH2) terminal de la
cadena de globina. El proceso es irreversible y no enzimático. La hemoglobina
glicosilada tiene varias fracciones y, de ellas, la más estable, la que tiene una unión
con la glucosa más específica es la fracción HbA1C La determinación de la
concentración en plasma de hemoglobina glicosilada tiene gran utilidad en el control
del paciente con diabetes mellitus (Fig. 4).
globina globina
l l
−Fe+2 − Fe+3
Desoxihemoglobina Metahemoglobina
globina globina
l l
− Fe+2 − − Fe+2 −
l l
O2 CO
Oxihemoglobina Carboxihemoglobina
globina – CO2 globina – glúcido

l l
− Fe+2 − − Fe+2 −
Carbaminohemoglobina Hemoglobina glicosilada
Figura 4. Diagrama esquemático de los derivados de hemoglobina.
Variedades normales de hemoglobina
Los diferentes tipos o variedades de hemoglobina difieren en la estructura

primaria de las cadenas de globinas. La estructura del hemo es siempre la misma.
El embrión humano posee hemoglobina embrionaria que es una combinación de 4

variedades de hemoglobinas: Gower 1 formada por dos subunidades zeta (ζ) y dos
épsilon (ε); Gower 2 por dos alfa y dos épsilon (α2ε2), Portland por dos zeta y dos
gamma (ζ2γ2) y hemoglobina fetal por dos alfa y dos gamma (α2γ2). Las dos primeras
no son detectables después de los primeros meses de gestación, mientras que la
hemoglobina Portland puede persistir en escasa cantidad en la vida fetal.
En el feto, la eritropoyesis (formación de glóbulos rojos) se produce
fundamentalmente en el hígado, órgano que produce hemoglobina fetal. Esta
hemoglobina, tiene mayor afinidad por el oxígeno que la hemoglobina adulta, razón
por la cual se produce el intercambio de oxígeno entre la sangre de la madre y la del
154
hijo. La hemoglobina fetal es la predominante en el feto en los últimos meses de vida

intrauterina, en el adulto, quedan algunas células productoras de pequeñas cantidades
de esta hemoglobina las que reciben el nombre de nidos eritropoyéticos.
En el recién nacido un 80 % de la hemoglobina total corresponde a
hemoglobina fetal. Este porcentaje va disminuyendo con el tiempo y alcanza los
valores del adulto entre los 6 y 9 meses de vida.
En un adulto normal, se pueden observar tres tipos de hemoglobina como se
indica en el siguiente cuadro (Fig. 5):
Figura 5. Variedades de Hemoglobinas en un adulto normal
En el laboratorio, las distintas variedades de hemoglobina se pueden separar

mediante electroforesis, ya que la diferente estructura primaria de las cadenas de
globina, le confiere movilidades electroforéticas diferentes.
Valores de referencia de hemoglobinemia
Los valores medios de hemoglobinemia son de 14 a 16 g/dL. Esta concentración

no es fija, por el contrario sufre variaciones fisiológicas, es decir normales, de acuerdo
a: la edad, el sexo, el grado de hidratación y la altitud.
Variaciones Fisiológicas
 Edad: el recién nacido posee una elevada concentración de hemoglobina en su

sangre. Los valores oscilan entre 18 y 20 g/dL, descienden rápidamente durante el
primer año de vida y luego aumentan en forma gradual hasta alcanzar el nivel
adulto alrededor de los 14 años.
 Sexo: las diferencias en los niveles de hemoglobinemia de acuerdo al sexo

aparecen en la pubertad y disminuyen gradualmente hasta desaparecer en la edad
avanzada. Los andrógenos son el factor responsable de los niveles superiores
detectados en los hombres. El valor para hombres adultos oscila entre 14 y 18
g/dL, con un promedio de 16 g/dL, mientras que para mujeres adultas es de 12 y
16 g/dL, con un promedio de 14 g/dL.
155
 Grado de hidratación: la disminución del grado de hidratación de un paciente,

puede provocar un aumento aparente en la concentración de hemoglobina en
sangre.
 Altura sobre el nivel del mar: la presión atmosférica y la presión de O2

disminuyen progresivamente al incrementarse la altura sobre el nivel del mar. Los
efectos de la falta de O2 provocan la estimulación de la producción de
hemoglobina. Aquellos individuos que habitan zonas donde la presión de O2 es baja,
tienen mayor nivel de hemoglobinemia que los individuos que viven en zonas a
nivel del mar.
Factores eritropoyéticos
La biosíntesis de Hemoglobina depende de una serie de factores que pueden

clasificarse en endógenos y exógenos.
a) Endógenos: pueden ser a su vez hormonales (eritropoyetina, andrógenos) y no

hormonales (factor intrínseco de Castle).
La Eritropoyetina (EPO) es una hormona glucoproteica cuya función principal
es incrementar la división y maduración de precursores de los glóbulos rojos de la
sangre. Es sintetizada principalmente por el riñón (90%) y el resto por el hígado,
aunque también —sobre todo en fetos— en cerebro y útero. La hormona es muy
sensible a los cambios en la disponibilidad de oxígeno en los tejidos, su síntesis y
secreción son estimuladas por la disminución de la tensión de oxígeno en los tejidos.
El principal efecto de la eritropoyetina es prevenir la apoptosis (principal forma de
muerte celular programada) en los precursores eritroides permitiendo así su
proliferación.
Se ha observado un efecto neuroprotector de la eritropoyetina a nivel del
Sistema Nervioso Central (SNC), previniendo la muerte de las neuronas ante el
estímulo hipóxico o del glutamato. También se ha encontrado que la Eritropoyetina
tiene acción sobre los vasos sanguíneos, estimulando la angiogénesis.
Los Andrógenos como la testosterona estimulan la formación de eritropoyetina
y por ende la eritropoyesis, este es el fundamento de la mayor concentración de
hemoglobina en el hombre adulto respecto a la mujer.
El factor intrínseco desempeña un rol primordial en la absorción intestinal de
vitamina B12, necesaria para la eritropoyesis. La deficiencia de vitamina B12 rara vez
es resultado de la ausencia de vitamina en la dieta. Es mucho más frecuente
encontrar deficiencias en pacientes que no absorben la vitamina en el intestino, lo que
ocasiona anemia perniciosa. Lo más frecuente es que la enfermedad sea el resultado
de la destrucción autoinmune de las células parietales del estómago encargadas de la
síntesis de la glicoproteína denominada factor intrínseco. La falta de factor intrínseco
impide la absorción de vitamina B12 o cianocobalamina ocasionando la anemia
perniciosa.
b) Exógenos: entre ellos se incluye la concentración de oxígeno ambiental, aporte

dietarios de aminoácidos esenciales, de vitaminas (ácido fólico, vitamina B12,
vitamina B6, vitamina C) y minerales como el hierro, cobalto.
La disminución de la concentración de oxígeno que ocurre a grandes alturas,
induce el aumento de concentración de eritropoyetina y por ende la mayor liberación a
la circulación sanguínea de glóbulos rojos maduros.
Para la síntesis de la porción proteica de la hemoglobina es necesario un aporte
dietario adecuado de aminoácidos esenciales y un aporte importante de glicina
para la síntesis de Hemo ya que sus precursores son la glicina y el succinil CoA que
156
proviene del ciclo de Krebs.

Un resultado primario de la deficiencia de ácido fólico es la anemia aplásica,
ocasionada por la disminución en la síntesis de purinas y timina, lo cual da lugar a la
incapacidad de las células para sintetizar ADN, por lo que no pueden dividirse, el ácido
fólico es entonces necesario para la normal eritropoyesis.
La vitamina B6 es coenzima de la sintetasa del ácido δ amino - levulínico
molécula clave de la síntesis del hemo, que se origina por la condensación de la
glicina con el succinil CoA.
La vitamina C participa en la absorción de hierro a nivel intestinal,
incrementando su absorción.
El hierro (Fe) es un elemento esencial de la molécula de hemoglobina por lo
que cualquier disminución del aporte de este elemento por debajo de los
requerimientos mínimos podría causar una reducción en la síntesis de hemoglobina.
El Cobalto (Co) estimula la producción de eritropoyetina y forma parte de la
vitamina B12. Sólo los microorganismos pueden utilizarlo para integrarlo a la molécula
de cianocobalamina.
CATABOLISMO DEL HEM
Formación de bilirrubina en el sistema fagocítico mononuclear
El proceso de destrucción de los glóbulos rojos que poseen entre 90 y 120 días
de vida, se realiza en el sistema fagocítico mononuclear (SFM), antes llamado sistema
retículo endotelial (SRE), conjunto de células fagocíticas que se encuentran
diseminadas en bazo, hígado, médula ósea y nódulos linfáticos.
La hemoglobina, pigmento rojo de los glóbulos rojos, es degradada
separándose sus fracciones prostética y proteica.
La fracción proteica, es hidrolizada hasta sus aminoácidos constitutivos. Estos
retornan al pool de aminoácidos del plasma de donde pueden volver a ser utilizados.
El grupo prostético hemo es despojado del hierro, el cual puede almacenarse en
hígado como ferritina hasta el momento en que sea requerido nuevamente.
El núcleo tetrapirrólico que queda luego de separarse el hierro, no posee valor
biológico para el organismo y es degradado (Fig. 6) por el sistema multienzimático
hemo-oxigenasa (E1) a biliverdina, compuesto de color verde y luego a bilirrubina,
molécula de color amarillo – naranja, por la enzima biliverdina reductasa (E2). La
bilirrubina se excreta por bilis, constituyendo el principal pigmento biliar.
157
E1
E2
Figura 6. Catabolismo de la Hemoglobina
La bilirrubina, debido a la gran cantidad de dobles enlaces conjugados que

posee, es coloreada y es la responsable del color amarillento del plasma.
Transporte de bilirrubina al hígado
La bilirrubina es soluble en lípidos y esta propiedad le permite atravesar las

membranas celulares. Una vez dentro de la célula, altera su metabolismo, por esto es
considerada una sustancia tóxica. También es insoluble en agua, por lo tanto para
ser trasladada por el plasma desde su lugar de origen, el SFM, hasta el hígado,
necesita un transportador. Este transportador es la albúmina. Los valores normales en
sangre de esta bilirrubina insoluble en agua, oscilan entre 0,2 – 0,8 mg %.
La bilirrubina indirecta se une a la albúmina formando un complejo
macromolecular, que no puede atravesar las membranas celulares, pero sí puede ser
captada por los hepatocitos mediante receptores específicos. Debido a su gran
tamaño, la bilirrubina unida a la albúmina, no puede filtrar por el riñón.
Conjugación de la bilirrubina
Al llegar al hígado, la bilirrubina se desprende de la albúmina, ingresando al

hepatocito por difusión facilitada. Dentro del citoplasma, que es un medio acuoso,
necesita proteínas que la transporten. Estas proteínas se llaman Y y Z. La proteína Y,
también llamada ligandina, tiene mayor afinidad por la bilirrubina que la Z.
En el retículo endoplásmico liso del hepatocito la bilirrubina es conjugada con
ácido glucurónico, formándose diglucuronato de bilirrubina o bilirrubina directa
(Fig. 7). Este cambio la convierte en una molécula hidrosoluble, apta para ser
excretada con la bilis al intestino delgado. Normalmente se encuentra muy poca
cantidad de esta bilirrubina en plasma: 0,0 – 0,2 mg %.
158
Figura 7. Diglucuronato de bilirrubina o bilirrubina conjugada.
Reducción intestinal
En el intestino, el diglucuronato de bilirrubina es hidrolizado en ácido

glucurónico y bilirrubina. Esta última es reducida por acción de las bacterias de la flora
intestinal a una serie de sustancias llamadas en su conjunto bilinógenos, los cuales
se oxidan a estercobilina, pigmento pardo que contribuye a la coloración normal de
las heces.
Pigmentos urinarios
Parte del estercobilinógeno del intestino es reabsorbido por el sistema porta y a

través de la sangre llega al riñón donde es filtrado. En la orina, el urobilinógeno se
transforma en su producto oxidado, la urobilina. Normalmente sólo hay indicios de
urobilinógeno en orina (Fig. 8).
Figura 8. Esquema de la ruta catabólica del Hemo.
159
Metabolismo del hierro

Absorción, transporte, reciclado y almacenamiento
El metabolismo del hierro incluye una serie de importantes procesos, como la
regulación de la absorción del hierro intestinal, el transporte de hierro a las células, el
almacenamiento del hierro, la incorporación de hierro a las proteínas y el reciclado del
hierro tras la degradación de los eritrocitos. En condiciones normales, al no haber un
mecanismo de excreción de hierro regulada, la homeostasis del hierro se controla
estrictamente a nivel de absorción intestinal.
El contenido medio de hierro en el organismo es de 3-4 g, distribuido en eritrocitos,
macrófagos del SFM, hígado, médula ósea, músculos y otros tejidos. Debe existir una
excelente coordinación entre los tejidos involucrados para asegurar que los
requerimientos sean satisfechos y que no se produzca sobrecarga o almacenamiento
excesivo del metal. Casi todo el hierro liberado por la descomposición de la
hemoglobina (Hb) de los eritrocitos senescentes, alrededor de 20-25 mg/día, se
reutiliza, y sólo se pierden 1-2 mg de hierro al día, que deben reponerse en la
alimentación (Fig. 9).
Figura 9. Recambio del hierro en el organismo.
160
CAPTACIÓN DEL HIERRO

Captación de hierro de la dieta
Una dieta equilibrada normal contiene una ingesta diaria de 10-15 mg de hierro
total/día, de los cuales se absorben 1-2 mg. Pese a que sólo se absorbe una pequeña
proporción del hierro de la alimentación, una alimentación equilibrada proporcionará
suficiente hierro al organismo en circunstancias normales. El incremento de las
demandas de hierro lleva a un aumento de la absorción.
El hierro puede clasificarse como hierro hemo y no hemo. El hierro hemo (Fe++),
que se encuentra en alimentos de origen animal, muestra una alta biodisponibilidad y,
pese a que normalmente sólo representa una pequeña fracción del contenido de hierro
total en los alimentos, contribuye a una cantidad considerable del hierro absorbido.
Hasta el 20-30% del hierro hemo de la alimentación se absorbe y su captación no se
ve afectada por otros componentes de la alimentación. El hierro no hemo (Fe+++)
está disponible en cantidades variables en todos los alimentos de origen vegetal y
constituye la mayor parte del hierro de la alimentación (con frecuencia más del 90
%). Su biodisponibilidad se ve fuertemente afectada por la presencia de factores de
inhibición o potenciación. Los fitatos (p.ej., salvado y semillas), oxalatos (p.ej., fruta y
verduras), polifenoles (p.ej., té), calcio, diferentes proteínas lácteas, huevo, soja y
ciertos fármacos (p.ej., inhibidores de la bomba de protones) inhiben la absorción del
hierro no hemo, mientras que el tejido muscular (p.ej. carne, pescado, aves) y la
vitamina C tienen un efecto potenciador.
Absorción duodenal de hierro

La absorción del hierro se produce predominantemente en el duodeno y en la parte
superior del yeyuno. El hierro hemo atraviesa la membrana apical de los enterocitos
gracias a la proteína transportadora de hemo I, que lo transfiere intacto al
citoplasma. El Fe+++ se reduce a Fe++ por una ferrireductasa, Dcytb (citocromo
duodenal b) antes de ser captado por la proteína de membrana DMT1 (transportador
metálico divalente 1). Una vez en los enterocitos, tanto el hierro procedente de
hemoproteínas como el no hemínico pasan a integrar el pool de Fe, con tres destinos
posibles: a) transferencia a la membrana basolateral y a la circulación, b)
almacenamiento, c) utilización en la síntesis de moléculas con hierro. a) El hierro
puede exportarse al plasma a través de la proteína de membrana ferroportina. La
exportación de Fe++ va acompañada de su oxidación inmediata por la hefestina o la
ceruloplasmina. El Fe+++ se une entonces a la transferrina y se transporta por la
circulación a las células para su utilización. b) Puede almacenarse en la proteína de
almacenamiento ferritina, dependiendo de las necesidades de hierro del organismo
en ese momento. El hierro almacenado en forma de ferritina en los enterocitos
terminará perdiéndose cuando las células se desprendan en la punta de las
vellosidades (Fig. 10).
161
Figura 10. Mecanismo de absorción del hierro hemo y no hemo por los enterocitos en el
duodeno.
Transporte del hierro y captación celular

Aproximadamente 3-4 mg del hierro del organismo se unen a la transferrina sérica, la
proteína de transporte de hierro endógeno que lleva el hierro de los lugares donantes,
es decir, el intestino y los macrófagos, a las células receptoras como los eritroblastos.
En condiciones fisiológicas, sólo aproximadamente una tercera parte de la capacidad
de unión al hierro de la transferrina está saturada con hierro. La transferrina tiene dos
lugares de unión de alta afinidad por el Fe+++; por tanto, la transferrina se encuentra
en forma de apotransferrina (no unida al hierro), transferrina mono (con el hierro
unido a uno de los dos lugares de unión) o diférrica (holotransferrina, con ambos
lugares de unión ocupados).
El ingreso de hierro a las células está regulado por la expresión de los receptores de la
transferrina en su superficie. Todas las células, excepto los glóbulos rojos maduros,
pueden expresar receptores de transferrina, con una alta afinidad por la transferrina
diférrica. El complejo de transferrina diférrica/receptor de la transferrina se internaliza
por endocitosis y la disociación de hierro está inducida por el entorno ácido y reductor
en el endosoma. El hierro (en forma de Fe++) se exporta entonces del endosoma al
citosol a través del transportador metálico divalente 1 (DMT1). Por último, el
complejo de apotransferrina/receptor de la transferrina se dirige a la superficie donde
se libera la apotransferrina debido a la afinidad significativamente menor del receptor
por la apotransferrina que por la transferrina diférrica.
Las células pueden captar hierro por vías distintas del receptor de transferrina. Una de
ellas es el ingreso directo de hemoglobina o hemo desde el plasma. Normalmente
existe cierto grado de lisis de eritrocitos con liberación de una pequeña cantidad de
hemoglobina al torrente circulatorio. La hemoglobina se fija a la Haptoglobina y el
162
grupo hemo a la Hemopexina. Ingresando ambas proteínas por transportadores

específicos.
RECICLADO DEL HIERRO

Eritropoyesis
En condiciones fisiológicas normales se requieren alrededor de 20-25 mg de hierro al
día para la eritropoyesis. La mayoría del hierro necesario se deriva de la Hb
degradada de los eritrocitos senescentes fagocitados. Los lugares principales de
eritropoyesis en adultos son las islas de eritroblastos en la médula ósea. Estas islas
también se observan en la pulpa roja del bazo, el lugar secundario de eritropoyesis.
El principal regulador de la eritropoyesis es la eritropoyetina (EPO), hormona
producida en los riñones que, aparte de otros factores como las interleucinas,
estimula la transformación de las células madre mieloides en células eritroides
precursoras. La síntesis de EPO aumenta en respuesta a la hipoxia de los tejidos
(concentración de oxígeno anormalmente baja).
ALMACENAMIENTO DEL HIERRO Y SU UTILIZACIÓN

En las personas sanas, alrededor del 25% del hierro total del organismo (800-1.000
mg) representa el hierro de los depósitos, principalmente en forma de ferritina en el
hígado, bazo y músculo esquelético. La ferritina está presente en casi todos los tipos
de células. Como tal, la ferritina sérica es un indicador de los depósitos de hierro. La
ferritina es una proteína citosólica formada por 24 cadenas polipeptídicas dispuestas
circularmente alrededor de un núcleo de Fe+++-oxihidróxidofosfato polinuclear. El
hierro secuestrado es una forma no tóxica y está disponible de forma inmediata para
satisfacer las necesidades de las células.
Otra proteína de almacenamiento, la hemosiderina, parece derivarse de la ferritina.
Su estructura todavía no se ha definido bien y la disponibilidad del hierro es menor
que la de ferritina. En condiciones fisiológicas, la ferritina es la principal proteína de
almacenamiento de hierro, mientras que la hemosiderina se acumula sólo en
pequeñas cantidades en el bazo y las células del SFM. En condiciones de sobrecarga
de hierro, especialmente hemocromatosis hereditaria y talasemia, la proporción de
hierro almacenado en forma de hemosiderina aumenta.
HOMEOSTASIS DEL HIERRO

La homeostasis del hierro depende de los niveles sistémicos e intracelulares de
hierro. El suministro de hierro sistémico y la homeostasis se basa en el hierro
plasmático, que debe mantenerse a niveles suficientes para estar disponible para su
uso (p.ej., para eritropoyesis). A nivel sistémico, se mantiene el equilibrio a través de
la regulación de la captación de hierro del aparato intestinal, el reciclado de hierro de
los macrófagos y el intercambio con los depósitos de hierro en el hígado. El principal
regulador de estos mecanismos es la hormona hepcidina, que ejerce su función
desencadenando la degradación de la proteína de exportación de hierro ferroportina.
Homeostasis sistémica del hierro: hepcidina

La hepcidina se considera actualmente el principal regulador del equilibrio del hierro
sistémico, que incluye la absorción de hierro intestinal y el reciclado del hierro en el
SFM.
La forma bioactiva es una proteína de 25 aminoácidos que se produce principalmente
en el hígado. La hepcidina actúa uniéndose a la ferroportina, desencadenando su
internalización y posterior degradación lisosómica. Puesto que la ferroportina es la
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proteína conocida que exporta el hierro celular, la hepcidina provoca el atrapamiento

de hierro en los enterocitos así como en los macrófagos y hepatocitos.
Figura 11. La hepcidina provoca la degradación de ferroportina y por tanto evita la

exportación de hierro de los enterocitos y macrófagos a la circulación.
La expresión de hepcidina en respuesta a la disponibilidad de hierro está regulada por

los niveles de transferrina diférrica. Las concentraciones elevadas de transferrina
diférrica (reflejo de niveles elevados de hierro) aumentan la expresión de la hepcidina
y, por tanto, reducen la captación de hierro (Fig. 11).
La eritropoyesis requiere cantidades considerables de hierro y, por tanto, la inhibición
de la expresión de la hepcidina por la actividad eritropoyética desempeña un papel
fisiológico fundamental.
ALTERACIONES EN LA CONCENTRACIÓN DEL HIERRO

Deficiencia de hierro
La deficiencia de hierro es la causa más común de anemia. Las situaciones que
llevan a una deficiencia de hierro pueden ser varias:
 Disminución de los aportes: por dieta inadecuada y absorción alterada

(malabsorción).
 Recién nacidos prematuros: nacen sin reserva de hierro.
 Incremento en la pérdida: por sangrado de origen gastrointestinal y sangrado
uterino. Ciertas enfermedades parasitarias producen pérdidas de sangre por vía
intestinal con la subsiguiente disminución del hierro.
La deficiencia de hierro es un proceso silente que se manifiesta cuando se altera la
164
síntesis de hemoglobina y la función del transporte de oxígeno resulta comprometida.

Existe una depleción gradual de los depósitos.
Sobrecarga de hierro
Se clasifica según su etiología en:
1. PRIMARIAS: Enfermedades de origen genético como hemocromatosis
hereditaria, enfermedad por ferroportina, atransferrinemia.
La Hemocromatosis Hereditaria es una patología de herencia autosómica
recesiva, cuyo gen afectado es el que codifica una proteína que participa en una vía
de señalización cuyo fin es aumentar la síntesis de hepcidina como respuesta a niveles
elevados de hierro circulante. Por lo tanto habrá un aumento de la absorción del
hierro dietario con una elevación crónica de los depósitos, que conduce a la
sobrecarga hepática de hierro seguida por el progresivo depósito y daño en otros
órganos como el corazón y el páncreas.
2. SECUNDARIAS: Hemoglobinopatías y patologías inflamatorias.

Por ejemplo las talasemias son alteraciones hematológicas que llevan a
transfusiones a repetición lo que ocasiona la sobrecarga de Fe.
Pruebas de laboratorio y metabolismo del hierro

Actualmente no existe ninguna prueba de laboratorio que por sí sola pueda
caracterizar adecuadamente el estado del hierro de un individuo. Algunas de las
pruebas más frecuentemente usadas son las siguientes (Tabla 1):
Tabla 1. Pruebas de laboratorio utilizadas para la determinación del estado del hierro en el
organismo
Valores de Referencia
Hemoglobinemia 14 - 16 g/dL
Hierro sérico (ferremia) 50 - 150 μg/dL
Transferrina sérica 0.21 - 0.36 g/dL
Se dan valores promedios de hemoglobinemia, aunque hemos visto que varían

ampliamente con una serie de factores, entre ellos la edad y el sexo.
El hierro sérico se encuentra unido a su proteína transportadora, la transferrina. El
hierro libre es extremadamente tóxico para nuestro organismo, razón por la cual no
poseemos prácticamente ninguna cantidad de él.
La transferrina sérica puede fijar hasta 300 μg de hierro/dL. El total de la
transferrina en suero (ligada al hierro o libre) representa la cantidad máxima de hierro
que puede ser fijada y se denomina capacidad total de fijación de hierro (CTFH).
Normalmente sólo un 30 % de la totalidad de la transferrina se encuentra unida al
hierro, el resto se encuentra libre para poder fijar un eventual aporte de hierro y se la
designa como capacidad latente de fijación de hierro (CLFH). Este valor
representa la capacidad de fijación de hierro por la transferrina no saturada. Su valor
se obtiene restando el hierro del suero (ferremia), de la CTFH.
165
CLFH = CTFH - Ferremia
30% 70%
Transferrina unida Transferrina libre
a hierro (CLFH)
(ferremia)
100 %
(CTFH)
La capacidad total está elevada en el embarazo y en deficiencias crónicas de hierro;

disminuye en la insuficiencia de hígado (órgano que sintetiza transferrina) y en la
malnutrición proteica.
Las determinaciones de ferremia y CTFH permiten conocer el porcentaje de

saturación de la transferrina o índice de saturación de la transferrina:
Total de la transferrina en suero (CTFH) ----- 100 %

Transferrina saturada con hierro (ferremia) ----- x = ferremia . 100
CTFH
% de saturación de transferrina
Este valor refleja el hierro almacenado en nuestro organismo y es útil para

diferenciar las causas más frecuentes de disminución de hierro sérico.
Bibliografía:
- Blanco, Blanco. Química Biológica. Ed. El Ateneo. 10 Edición 2016

- Montgomery R. y col. “Bioquímica, Casos y Texto”. Editorial Mosby Year Book. 6º
Edición, 1998
- Stryer, L. “Bioquímica”. Editorial Reverté, SA. 4º Edición, 1995
- Forrelat Barrios M. y col. Metabolismo del Fe. Artículos de Revisión. Rev.Cubana de
Hematol Inmunol Hemoter. 2000. 149,(3) 149-160
-www.cardioteca.com
166
PRÁCTICO Nº 10
HEMOGLOBINA Y BILIRRUBINA
Objetivos
 Reconocer las estructuras químicas de la hemoglobina
 Diferenciar las variedades normales de hemoglobina y sus derivados
 Comprender la ruta del catabolismo del hem
 Conocer el origen, absorción y destino del hierro en nuestro organismo
 Interpretar las pruebas de laboratorio utilizadas para el estudio del metabolismo
del hierro
 Conocer las pruebas de laboratorio utilizadas para determinar bilirrubinemia.
Temario
Hemoglobina y bilirrubina: estructura de la hemoglobina. La hemoglobina y sus
derivados. Variedades normales de hemoglobina. Valores normales de
hemoglobinemia. Variaciones fisiológicas. Catabolismo del hem: bilirrubina.
Metabolismo del hierro.
Laboratorio: Determinación de bilirrubina en sangre
Bilirrubinemia
En 1913, Van den Bergh distinguió dos formas de bilirrubina mediante una reacción
colorimétrica con ácido sulfanílico diazotado. Una de esas formas recibió el nombre de
bilirrubina directa pues reacciona en forma directa con el diazorreactivo. La otra sólo
reacciona después de agregar alcohol a la mezcla; se la designó bilirrubina indirecta.
La bilirrubina directa es glucurónido de bilirrubina, es decir, el producto soluble en
agua formado durante el pasaje del pigmento por la célula hepática. La bilirrubina
indirecta, en cambio, corresponde al pigmento formado en el SFM, aún no conjugado
con ácido glucurónico; es insoluble en agua y necesita solubilizarse en otro reactivo,
llamado desarrollador (metanol o benzoato de cafeína) donde también es soluble el
reactivo para poder reaccionar con él.
En el medio creado por el desarrollador reacciona no sólo la bilirrubina unida a la
albúmina (BI) sino también la unida al ácido glucurónico (BD), es decir, reacciona la
totalidad de la bilirrubina. A esta fracción se la denomina bilirrubina total (BT).
La diferencia entre la BT y la BD corresponde a la BI.
Fundamento:
Ácido + nitrito de HCl Cloruro + NaCl + 2 H20

sulfanílico sodio de diazonio
Cloruro de + bilirrubina 2 azobilirrubina

diazonio
Muestra: Se usa suero o plasma heparinizado. Hemólisis moderadas o intensas

producen valores de bilirrubina falsamente disminuidos. La acción de la luz es capaz
de destruir en una hora hasta un 50% de la bilirrubina presente. Por tal motivo se
167
debe proteger cuidadosamente de la luz y realizar determinaciones con luz tenue.
Reactivos
 Desarrollador: solución acuosa de benzoato de cafeína 0,13 M, tamponada y
estabilizada.
 Nitrito de sodio: solución 0,07 M
 Reactivo sulfanílico: solución de ác. sulfanílico 29 mM y clorhídrico 0,17 M.
 Preparación de diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar una
parte de nitrito de sodio con 21 parte de reactivo sulfanílico.
Técnica
Blanco BD BT
Muestra 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL
Agua 1,25 mL 1,25 mL ---
Desarrollador --- --- 1,25 mL
Rtvo sulfanílico 0,1 mL --- ---
Diazorreactivo --- 0,1 mL 0,1 mL
Mezclar inmediatamente por inversión. Luego de 5 minutos, leer a 520- 550 nm,
llevando a cero el aparato con agua destilada. El color es estable por dos horas.
Cálculos:
AB: absorbancia del tubo blanco
ABD: absorbancia del tubo BD
ABT: absorbancia del tubo BT
Bilirrubina total mg% = (ABT – AB) x factor

Bilirrubina directa mg% = (ABD – AB) x factor
Bilirrubina indirecta = Bilirrubina total – bilirrubina directa
El factor se obtiene realizando una curva de calibración.
Valores de referencia:
Bilirrubina Total 0,2 – 1,0 mg/dL
Bilirrubina Directa 0,0 – 0,2 mg/dL
Bilirrubina indirecta 0,2 – 0,8 mg/dL
168

Capítulo 10 Hemoglobina Y Bilirrubina: Figura 1. Grupo Hemo

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Capítulo 10 Hemoglobina Y Bilirrubina: Figura 1. Grupo Hemo

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2018 - Capítulo 10.

Hemoglobina y bilirrubina Laura Aguirre

Este capítulo abarca el estudio de una molécula muy importante para el

Grupo Prostético. El grupo prostético de la hemoglobina es el hem o hemo. Es un

Figura 1. Grupo Hemo

Grupo Proteico. El grupo proteico de la hemoglobina está formado por cuatro

La molécula de hemoglobina se forma por la unión de cuatro de estas cadenas,

Figura 2. Hemoglobina Principal

La unión de un grupo hemo a una cadena polipeptídica de globina forma un

1 hem + 1 cadena de globina = 1 monómero de hemoglobina

4 monómeros = 1 molécula de desoxihemoglobina

1 desoxihemoglobina + 4 O2 = 1 molécula de oxihemoglobina

Esquema de un monómero de oxihemoglobina:

Esquema de una molécula de hemoglobina principal (2  2):

Biosíntesis del grupo HEMO

La biosíntesis se realiza en cuatro etapas principales:

La hemoglobina y sus derivados

Los derivados de la hemoglobina surgen en general, de un cambio de estado de

Desoxihemoglobina: cuando el O2 se desprende de la oxihemoglobina, ésta se

Metahemoglobina: molécula resultante de la oxidación del hierro ferroso (Fe++)

Oxihemoglobina: cuando el O2 se fija al Fe++ del hemo, se forma la oxihemoglobina.

Carbaminohemoglobina o carbohemoglobina: cuando el dióxido de carbono (CO2)

Hemoglobina glicosilada HbA1c: se forma por glicosilación de la hemoglobina. La

globina – CO2 globina – glúcido

Carbaminohemoglobina Hemoglobina glicosilada

Figura 4. Diagrama esquemático de los derivados de hemoglobina.

Variedades normales de hemoglobina

Los diferentes tipos o variedades de hemoglobina difieren en la estructura

El embrión humano posee hemoglobina embrionaria que es una combinación de 4

hijo. La hemoglobina fetal es la predominante en el feto en los últimos meses de vida

Figura 5. Variedades de Hemoglobinas en un adulto normal

En el laboratorio, las distintas variedades de hemoglobina se pueden separar

Valores de referencia de hemoglobinemia

Los valores medios de hemoglobinemia son de 14 a 16 g/dL. Esta concentración

 Edad: el recién nacido posee una elevada concentración de hemoglobina en su

 Sexo: las diferencias en los niveles de hemoglobinemia de acuerdo al sexo

 Grado de hidratación: la disminución del grado de hidratación de un paciente,

 Altura sobre el nivel del mar: la presión atmosférica y la presión de O2

La biosíntesis de Hemoglobina depende de una serie de factores que pueden

a) Endógenos: pueden ser a su vez hormonales (eritropoyetina, andrógenos) y no

b) Exógenos: entre ellos se incluye la concentración de oxígeno ambiental, aporte

proviene del ciclo de Krebs.

CATABOLISMO DEL HEM

Formación de bilirrubina en el sistema fagocítico mononuclear

Figura 6. Catabolismo de la Hemoglobina

La bilirrubina, debido a la gran cantidad de dobles enlaces conjugados que

Transporte de bilirrubina al hígado

La bilirrubina es soluble en lípidos y esta propiedad le permite atravesar las

Al llegar al hígado, la bilirrubina se desprende de la albúmina, ingresando al

Figura 7. Diglucuronato de bilirrubina o bilirrubina conjugada.

En el intestino, el diglucuronato de bilirrubina es hidrolizado en ácido

Parte del estercobilinógeno del intestino es reabsorbido por el sistema porta y a

Figura 8. Esquema de la ruta catabólica del Hemo.

Metabolismo del hierro

Figura 9. Recambio del hierro en el organismo.

CAPTACIÓN DEL HIERRO

Absorción duodenal de hierro

Transporte del hierro y captación celular

grupo hemo a la Hemopexina. Ingresando ambas proteínas por transportadores

RECICLADO DEL HIERRO

ALMACENAMIENTO DEL HIERRO Y SU UTILIZACIÓN

HOMEOSTASIS DEL HIERRO