2018 - Capítulo 1.

Soluciones Silvina Aguirre

CAPÍTULO 1

SOLUCIONES. IMPORTANCIA BIOLÓGICA. CONCENTRACIÓN. MÉTODOS

CUANTITATIVOS PARA SU DETERMINACIÓN

Una solución es una mezcla homogénea de una o más especies químicas que no
reaccionan entre sí; cuyos componentes se encuentran en proporción que varía entre
ciertos límites.

También es importante mencionar a las emulsiones y a las suspensiones, ya

que en cierto punto, ambas son tratadas igual que las soluciones. Se tratan de
dispersiones finas, es decir que son sistemas heterogéneos en los cuales la fase dispersa
no es visible a simple vista, sino al microscopio. En la emulsión la fase dispersa y la fase
dispersante son líquidas, por ejemplo la leche materna. Si la fase dispersa es sólida y la
fase dispersante es líquida hablamos de una suspensión.
Toda solución está formada por una fase dispersa llamada soluto y un medio
dispersante denominado solvente. También se define solvente a la sustancia que se
encuentra en mayor proporción en la solución. Otro criterio consiste en llamar solvente al
componente cuyo estado de agregación coincide con el de la solución formada. El
solvente por excelencia o solvente universal es el agua, aún cuando esté presente en
proporciones relativamente pequeñas (por ejemplo en el H 2SO4 al 95 % m/v, el agua es
el solvente aunque esté en menor proporción). Una solución puede estar formada por
uno o más solutos y uno o más solventes. Tanto el soluto como el solvente pueden
presentarse en cualquier estado de agregación, es decir que el soluto puede ser un gas,
un líquido o un sólido, y el solvente también puede ser también un gas, un líquido o un
sólido.
Para expresar la composición de una solución en forma cuantitativa o la proporción
en que se encuentra cada soluto, se utiliza el término concentración, la cual define la
relación que existe entre la cantidad de soluto y la cantidad de solvente o de solución. En
química, las concentraciones generalmente están expresadas utilizando unidades
químicas como el mol y equivalente gramos, a partir de las cuales las concentraciones
pueden expresarse en normalidad (N), molaridad (M) o molalidad (m). También se
utilizan las expresiones de concentración porcentuales (m/m, m/V y V/V).

Las soluciones en los seres vivos

Desde el punto de vista biológico, el agua es un componente esencial de todo ser
vivo, siendo el solvente en el que están disueltas la mayoría de las sustancias del
organismo (glucosa, proteínas, sodio, colesterol, etc). Es así que en los seres vivos, las
soluciones cumplen un papel fundamental, ya que dentro y fuera de las células las
sustancias están disueltas en el agua, formando soluciones. Estas soluciones deben estar
formadas por una determinada proporción de cada uno de los solutos con respecto al
solvente (el agua). Es decir, que las soluciones biológicas deben tener una cierta
concentración de cada uno de los solutos que tiene disueltos. Se define así un valor de
referencia (VR), antes denominado “valor normal”, para cada soluto, que en general es
un rango considerado como normal para una sustancia dada. Este valor se establece
después de conocer la distribución de las cifras en poblaciones de referencia.

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La sangre está constituida por elementos formes (glóbulos rojos, glóbulos

blancos y plaquetas) y una parte líquida denominada plasma, que consiste en una
solución acuosa con una gran cantidad de solutos disueltos. El plasma es una de las
principales soluciones del organismo.
Otras soluciones cuyo estudio es fundamental para el médico son el líquido
cefalorraquídeo (LCR) y la orina que se estudiarán más adelante. Desde el punto de
vista bioquímico y médico es fundamental conocer la concentración de las sustancias
disueltas en estos líquidos biológicos, para compararla con su respectivo valor de
referencia, lo que permitirá valorar el estado de salud o enfermedad del paciente.
En general, la concentración de los solutos que se encuentran disueltos en el
plasma sanguíneo lleva el sufijo emia, la de las sustancias que se encuentran disueltas
en el líquido cefalorraquídeo llevan el sufijo raquia, y la de las que se hallan en la orina
presentan el sufijo uria. Así, por ejemplo se habla de protidemia, glucemia,
colesterolemia, etc, para indicar que se trata de las concentraciones de proteínas,
glucosa y colesterol respectivamente, presentes en la sangre; y se denomina
glucorraquia, proteinorraquia, glucosuria o proteinuria a la concentración de glucosa y
proteínas en el LCR y orina respectivamente.

Las soluciones en medicina

Los médicos, en su práctica profesional diaria, deben calcular, manejar e

interpretar las concentraciones de diferentes solutos. Generalmente estas
concentraciones están expresadas en %, en mEq/L o teniendo en cuenta la masa del
soluto en relación a algún volumen de la solución, como por ejemplo: g/L, g/dL, mg/dL,
etc.

El médico se enfrenta también cotidianamente a un gran número de sustancias

químicas que interactúan con el organismo siendo utilizadas en el diagnóstico,
prevención y tratamiento de una enfermedad para el alivio de sus síntomas. Estas
sustancias se denominan fármacos. Estos fármacos generalmente no se administran al
paciente en forma pura, sino que a muchos de ellos se lo hace en forma de solución.
También, muchas veces los fármacos se presentan comercialmente en forma de
suspensión o de emulsión, las cuales, una vez realizada la homogenización, son tratadas
igual que las soluciones para realizar los cálculos referidos a concentración.

Métodos cuantitativos empleados en líquidos biológicos

Hay diferentes métodos que permiten determinar la concentración de un

determinado soluto presente en una solución. En el área de análisis clínicos, estos
métodos tienen un rol fundamental, ya que permiten conocer la concentración de
diferentes metabolitos presentes en los líquidos biológicos, siendo la sangre uno de los
líquidos biológicos más utilizado para valorar el estado de un paciente. En este capítulo
estudiaremos los métodos más comunes empleados en un laboratorio bioquímico.

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Técnicas espectrales

Se basan en la interacción de la luz con la materia. Entre estas técnicas se

encuentran la espectrofotometría.
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas del soluto
absorben las radiaciones electromagnéticas de la zona ultravioleta o visible del espectro
(dependiendo de la estructura de las moléculas) y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende directamente de la concentración del soluto absorbente.
Considerando que la luz viaja en forma de onda, se define a la longitud de onda
de la luz (λ) (lamda) como la distancia entre dos crestas consecutivas (Fig. 1), y se
recomienda expresarla en nanómetros (nm).
Recordar que: 1 nm = 1 mµ (milimicra) = 10-9 m

Figura 1. Representación
esquemática de la propagación
de una onda.


Dirección de
propagación
de la onda

La espectrofotometría ultravioleta-visible utiliza haces de radiación del espectro

electromagnético, en el rango UV de 180 a 380 nm, y en el de la luz visible de 380 a 780
nm (Fig. 2). La luz visible está conformada por radiaciones de longitudes de ondas que
están asociadas a diferentes colores.

Figura 2. Espectro
electromagnético.

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Cada sustancia tiene su espectro de absorción característico. Esto significa que

las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
intensidad con la que se absorben dependen de la estructura atómica; por lo que la
espectrofotometría constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas. El espectro de absorción de una sustancia es una
representación gráfica que indica la cantidad de luz absorbida (Absorbancia) a diferentes
valores de λ (Fig. 3). A partir de este espectro se obtendrá el valor de λ al que el
compuesto presenta la mayor absorbancia (λ óptimo). Dicha λ se utilizará para hacer
determinaciones cuantitativas del compuesto.

Figura 3. Espectro de
absorción de los
principales pigmentos de
una Cyanobacteria
Absorbancia

(bacteria fotosintética).

Para hacer este tipo de medidas se emplea un aparato llamado

espectrofotómetro, el cual posee una fuente de energía electromagnética (lámpara), y
un dispositivo (monocromador) que permite seleccionar y transmitir radiación de una
determinada λ que será la que atravesará a la solución que contiene el soluto a analizar.
Esta solución es colocada en un recipiente denominado cubeta. A partir del espectro de
absorción de la sustancia en estudio, para realizar la cuantificación de la sustancia se
seleccionará la longitud de onda de la luz óptima (λ óptimo) y se medirá la cantidad de
luz absorbida por la misma.
Cuando un haz de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide
perpendicularmente sobre una solución de un compuesto químico que absorbe luz, el
compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el resto
(It), de forma que se cumple: Io = Ia + It. De esta manera, en esta técnica se puede
medir la cantidad de luz absorbida (Absorbancia) o la cantidad de luz transmitida
(Transmitancia) en función de la longitud de onda utilizada. En análisis clínicos se
utiliza la medición de absorbancia (Fig. 4).

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Cubeta

Detector
Luz blanca Io It
0.245
Luz mono Ia
cromática Dispositivo de lectura
Monocromador (Absorbancia o Transmitancia)
Fuente
de luz (Prisma)

Selector de λ

Figura 4. Esquema del fundamento del espectrofotómetro, y la relación entre las intensidades
de la luz incidente (Io), absorbida (Ia) y transmitida (It).

La región UV es una región de energía muy alta. La radiación UV puede provocar

afecciones oculares así como daños en la piel (irritaciones, cáncer, quemaduras). Los
compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces peptídicos, sistemas
aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos (átomos diferentes al carbono
presentes en compuestos orgánicos heterocíclicos, siendo más comunes los
heteroátomos de nitrógeno, oxígeno y azufre), tienen su máxima absorbancia en la
región UV, por lo que ésta es muy importante para la determinación cualitativa y
cuantitativa de compuestos orgánicos. La fuente de radiación ultravioleta es una lámpara
de deuterio.

Generalmente, en análisis clínicos se utiliza la espectrofotometría en la región

visible que tiene como fuente de luz una lámpara de tungsteno, que emite radiaciones
del rango visible. Hay que tener en cuenta que para que la materia absorba radiación de
la zona visible del espectro electromagnético es condición que la sustancia sea coloreada.
Muchas sustancias tienen color propio, en cambio hay otras que son incoloras. Las
sustancias incoloras pueden convertirse en productos finales coloreados mediante
determinadas reacciones químicas.
El color de una solución corresponde a las longitudes de onda de la luz que
transmite, no que absorbe. El color que absorbe es el complementario del color que
transmite. Así por ejemplo, una solución que absorbe radiaciones de longitudes de onda
entre los 580 nm y los 595 nm (zona de radiaciones amarillas), absorbe luz de color
amarillo, y se refleja el color azul, por lo tanto, a la solución se la verá de color azul. Del
mismo modo, una solución que absorbe radiaciones entre los 490 nm y los 580 nm (zona
de radiaciones de color verde), absorbe luz de verde, se refleja el color rojo y se la verá
de color rojo.

Ley de Lambert –Beer

En base a todo lo expuesto anteriormente se puede enunciar la ley que rige a la

espectrofotometría, Ley de Lambert –Beer, que dice:

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“Cuando un haz de luz monocromática atraviesa una solución homogénea, la

absorbancia es proporcional a la concentración de las moléculas absorbentes y
al espesor de la solución atravesada”.

Como los espectrofotómetros utilizan cubetas que tienen forma y espesor

constante, el espesor de la solución atravesada deja de ser una variable a considerar.

La Ley de Lambert-Beer establece que la concentración de una solución es

directamente proporcional a la cantidad de energía radiante absorbida o inversamente
proporcional a la energía radiante transmitida. De este modo se puede relacionar
soluciones de concentraciones desconocidas con una solución de concentración conocida
a la que se la llama solución testigo o solución estándar. Matemáticamente este
concepto se plasma en la siguiente expresión:

A1 C1 C1: concentración de una solución desconocida

A2
= C2 C2: concentración de una solución estándar
A1: absorbancia de una solución de concentración desconocida
C1 A1 . C2 A2: absorbancia de una solución estándar
=
A2

El cociente C2/A2 es constante y se lo llama factor colorimétrico. Para

determinar la concentración de una solución desconocida se multiplica su absorbancia
por este factor colorimétrico.
En la espectrofotometría se utiliza una solución que se denomina blanco de
reactivo. La misma contiene todos los reactivos utilizados menos la sustancia que se
desea medir y se trata de la misma manera que la solución que contiene la sustancia
problema que se desea medir. Se utiliza para descontar el color propio de los reactivos y
considerar sólo la absorción del compuesto de interés.

Curvas de calibración
Se trata de una curva de referencia, construida con cantidades conocidas de una
sustancia, que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia presente en una
muestra incógnita. Es un método empleado para medir la concentración de una sustancia
en una muestra por comparación con una serie de diluciones de la misma sustancia, de
concentración conocida. Hay una relación lineal directa entre absorbancia y
concentración.
Para obtener la curva de calibración de un compuesto, se preparan soluciones de
diferentes concentraciones del mismo (Fig. 5), determinándose para cada una de ellas el
valor de absorbancia a λ óptima para dicho compuesto. Estos valores de absorbancia se
representan en el eje de la ordenada (eje de y) y los de concentración en el eje de la
abscisa (eje de x) (Fig. 6). Se observará que, a bajas concentraciones, el aumento de
concentración se corresponde con un incremento lineal en la absorbancia (zona de
cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A concentraciones altas la linealidad se pierde
y se observa que la línea se aplana, por lo que las medidas son poco fiables.

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Las curvas de calibración se utilizan para:

 Determinar la validez de los datos (verificar si se encuentran en el intervalo que se
cumple la ley de Lambert-Beer).
 Controlar el funcionamiento del instrumento de medición.
 Calcular la concentración de una solución desconocida interpolando su absorbancia
en la curva de calibración (Figura 6).

A-

Proteínas 0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Concentración

(mg/mL) desconocida

B-

Absorbancia 0 0,101 0,202 0,406 0,611 0,760 0,820 0,302

Figura 5. Preparación de una curva de calibración para la determinación de proteínas.

A- Soluciones de proteínas de diferentes concentraciones conocidas y una solución de
concentración desconocida. B- Luego, se toma una determinada cantidad de cada
solución y se le adicionan los reactivos correspondientes, según el método utilizado,
para que reaccionen y convertir a las proteínas en un producto coloreado. Luego se
mide la absorbancia de cada uno de los tubos.

Figura 6. Curva de calibración

realizada con la absorbancia
obtenida de cada uno de los tubos
del gradiente de proteínas.
Interpolación de la absorbancia de
la muestra de concentración
desconocida ( ).

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Desviaciones de la Ley de Lambert-Beer

La mayoría de las soluciones obedecen a la Ley de Lambert-Beer, pero se debe
tener en cuenta que la concentración (C) y la absorbancia (A) son directamente
proporcionales sólo en un intervalo específico de concentraciones. Algunas condiciones
alteran la linealidad de esta curva produciendo desviaciones, las cuales serán positivas
(si la absorbancia medida es mayor que la real) o negativas (si la absorbancia medida es
menor que la real) (Fig. 7). Esto lleva a que no se obtengan relaciones lineales entre la
absorbancia y la concentración, debido a factores instrumentales y químicos, tales como:

1) Polimerización de la sustancia a medir, cuando monómero y polímero tienen

diferentes valores de absorbancia.
2) Las muestras son muy concentradas.
3) La luz incidente no es monocromática.
4) La absorbancia del solvente es significativa respecto a la del soluto.
5) La luz es transmitida por otros mecanismos como por ejemplo la luz errática (llega
al detector sin pasar por el camino óptico del instrumento).
6) Los lados de la cubeta no son paralelos o están sucias.
7) Lámparas en mal estado.

Figura 7. Desviaciones de la Ley

de Lambert-Beer positivas (---) y
Absorbancia

negativas (---).

+ si la Abs  que la real.

- si la Abs  que la real.

Concentración

Química seca
El método de análisis denominado “química seca”, llamado así porque se
emplean reactivos secos, se basa en que los componentes de la reacción necesarios para
el análisis (indicadores, enzimas y reactivos) son impregnados, por pretratamiento y
secado de las respectivas soluciones, en papel de filtro que a su vez es fijado sobre una
tira de material sintético constituyendo lo que se denomina “tiras reactivas” o “slides”.
Luego, un volumen de 5 a 10µL de suero, plasma, líquido cefalorraquídeo u orina se
aplica al “slide” donde se produce una reacción que permite la detección y cuantificación
de la sustancia en estudio.
Durante el cursado de la materia algunas sustancias se determinarán por química
seca mediante el uso de slide o tiras reactivas:

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- Análisis de orina
- Prueba de embarazo comercial para la detección de la gonadotrofina coriónica humana
(hCG)
- Trop T test para la detección de la troponina T isoforma cardíaca (cTnT), lo que
confirma diagnóstico de Infarto Agudo de Miocardio.
Laboratorios bioquímicos de alta complejidad cuentan con analizadores
automatizados que utilizan la tecnología de química seca para determinar la
concentración de distintas sustancias como colesterol, glucemia, urea, ácido úrico, etc.
Estos aparatos presentan numerosas ventajas, como por ejemplo: contienen un alto
menú de pruebas; los resultados se obtienen de una manera rápida, exacta y confiable;
aumento de la eficiencia y de la productividad del laboratorio; etc.

Bibliografía

 Henry J. B. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 9° Edición. 1993.

 Díaz N. A., Bárcena Ruiz J. A., Fernández Reyes E., Galván Cejudo A., Jorrín Novo
J., Peinado J., Meléndez-Valdés F. T. y Túnez Fiñana I. Espectrofometría:
Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas.http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR
 Brunatti C.y Martín A. M. Introducción a la Espectroscopía de Absorción Molecular
Ultravioleta, Visible e Infrarrojo Cercano.
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
 Chang Raymond. Química. Ed. Mc. Graw-Hill. 1992.
 Kaplan Pesce. Química Clínica. Teoría, análisis y correlación. Ed. Panamericana.
1992.
 Alegría M., Bosack A., dal Fávero M. A., Franco R., Jaul M. B. y Rossi R. A..
Química I. Ed. Santillana. 1998.
 Aldabe S., Bonazzola C., Aramendía P., Lacreu L. Química 2. Química en acción. Ed
Colihue. 2004.
 Yadir Alvarado G.(Química seca. 2014). https://prezi.com/mjiqek13xjls/quimica-
seca/
Problemas de soluciones de aplicación médica:

1- El ibuprofeno es un fármaco con acción antiinflamatoria, antipirética y analgésica

ampliamente utilizado. Una de sus maneras de presentación es en forma de jarabe para
uso pediátrico y puede adquirirse en una concentración al 4% m/v. Si la temperatura
axilar es menor a 39 °C la dosis recomendada es 5 mg de ibuprofeno/kg/dosis cada 6 a 8
h. Calcule el volumen que debe administrarse en cada dosis a un niño de 20 kg. (2,5
mL)

2- La solución fisiológica o suero fisiológico es una solución acuosa de NaCl al 0,9 %

m/v. Tiene la particularidad de ser una solución isotónica en la sangre, por lo que se la
emplea como sustituto de la sangre cuando disminuye drásticamente la volemia y como

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medio para el suministro de diversas sustancias (por ejemplo, inyectables). Su

composición bioquímica es cloruro sódico (NaCl) al 0.9%. Determine la masa de NaCl,
expresada en gramos, que se necesita para preparar 2 litros de solución fisiológica. (18
g)

3- La amoxicilina es un antibiótico que se utiliza para tratamiento de las infecciones

ocasionadas por gérmenes sensibles. A un niño se le administra una dosis de 2,5 mL,
cada 8 horas, de una suspensión de amoxicilina cuya concentración es 100 mg/ml.
Determine la masa de amoxicilina, expresada en miligramos, que ha recibido el niño en
el término de 24 horas. (750 mg)

4- Es necesario administrar a un niño 375 mg de un antibiótico llamado ampicilina. El

vial de ampicilina contiene 2 mL de solución con 500 mg de ampicilina. Determine el
volumen de solución de ampicilina que se le debe inyectar al niño para que reciba la
dosis necesaria del antibiótico. (1,5 mL)

5- Los sueros fisiológicos con dextrosa (glucosa) se utilizan como solución intravenosa
para proporcionar agua y calorías a los pacientes enfermos. Su composición es la
siguiente: dextrosa al 5 % m/V y cloruro de Sodio 0.9 % m/V en agua. Un paciente
internado recibió por vía intravenosa 2 bolsas de 1 litro cada una de esta solución.
Determine la masa de NaCl y de dextrosa recibida por el paciente. (100 g de dextrosa
y 18 g de NaCl)

6- La betametasona es un corticoide utilizado para el tratamiento de afecciones

inflamatorias alérgicas y reumáticas. La presentación en gotas orales informa que en su
composición contiene 60 mg de Betametasona cada 100 mL de solución. Considerando
que una gota equivale a 0,05 mL, determine la masa de Betametosona contenida en una
gota de este medicamento. (0,03 mg)

7- La “leche de magnesia” es un medicamento laxante que contiene hidróxido de

magnesio al 8,5 % m/v y la dosis diaria necesaria para un adulto es 4 cucharadas
soperas. Determine la masa, expresada en gramos, de hidróxido de magnesio presente
en la dosis diaria de “leche de magnesia”. Considere que una cucharada sopera equivale
a 15 mL. (5,1 g)

8- La proteinuria de un paciente es 140 mg/24 hs. Determine la concentración de

proteínas en orina, expresada en mg/L, sabiendo que el volumen de orina recolectado en
las 24 horas fue de 1.600 mL. (87,5 mg/L)

9- Mediante el uso de tiras reactivas para el análisis de orina, se determinó que un

paciente presenta una concentración de proteína en la orina de 8,5 g/L. El volumen
recolectado por el paciente fue 900 mL en 24 horas. Determine la proteinuria del
paciente, expresada en mg de proteínas/24 horas. (7.650 mg/24 hs)

10- Un paciente presenta una glucemia igual a 95 mg/dL. Considerando que el paciente
tiene una volemia (volumen de sangre) igual a 5,2 litros, determine la masa total de
glucosa, expresada en gramos, presente la sangre del paciente. (4,94 g)

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TRABAJO PRÁCTICO N° 1

EXPRESIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE SOLUCIONES DE IMPORTANCIA

MÉDICA. ESPECTROFOTOMETRÍA

Objetivos
 Reconocer y manejar el material de vidrio de uso corriente en el laboratorio.
 Resolver problemas para la preparación de soluciones de importancia médica.
 Comprender los fundamentos teóricos y el manejo del espectrofotómetro.

Temario
Reconocimiento del material de laboratorio. Expresión de soluciones de uso frecuente en
medicina. Soluciones. Técnicas espectrales: espectrofotómetro. Principios de la
fotometría. Ley de Lambert- Beer. Pasos a seguir para cuantificar una sustancia.

Laboratorio: reconocer y manejar el material de vidrio de uso corriente. Determinar la

longitud de onda optima () de una solución de azul de metileno. Realizar una curva de
calibración.

Materiales de uso frecuente en el laboratorio

Probetas graduadas

Son recipientes cilíndricos, graduados, de vidrio grueso, boca ancha,

abierta y con pico, capaces de medir distintos volúmenes. Son útiles
para mediciones aproximadas.

Matraz
Un matraz aforado es un recipiente de fondo plano y con forma de pera, que tiene un
cuello largo y angosto. En el cuello se observa una línea fina grabada,
denominada aforo, que indica el nivel de líquido necesario para alcanzar
el volumen indicado en el matraz, a una temperatura definida. Cuando
se lleva a volumen, el borde inferior del menisco, debe ser tangente al
aforo.
Este tipo de material, se usa para preparar soluciones exactas.
Los tamaños de matraces aforados que se usan más comúnmente son
de l0 mL, 25 mL, 50 ml, 250 mL y l000 mL.

Pipeta graduada
Son tubos estrechos subdivididos que se emplean para medir cantidades variables de
líquido. El orificio de una pipeta debe ser de un tamaño tal que la salida del líquido no se

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2018 - Capítulo 1. Soluciones Silvina Aguirre

produzca demasiado rápida, para disminuir el error de medición. Se usan habitualmente

pipetas de: 1, 2, 5 y l0 mL.
En la parte superior tienen unas bandas de colores que las distinguen. Ej. Las de 5 mL
tienen una banda de color azul, las de 10 mL son naranjas, etc.
Las pipetas se usaran mucho durante todo el año, por lo que
haremos aclaraciones con respecto a las mismas. Es muy
importante saber elegir adecuadamente la pipeta que se deberá
usar para un determinado ensayo, por lo tanto, hay que tener en
cuenta la graduación y el menor volumen a medir de cada pipeta.
Observe las pipetas que le muestre su ayudante e intente
ubicarlas en la clasificación siguiente:

Capacidad Graduación Menor volumen a medir

(mL) (mL)
10 1/10 0,1
5 1/10 0,1
2 1/10 0,1
1 1/10 0,1

NOTA: en ningún caso se debe pipetear con la boca. Usar siempre pro pipetas:

Micropipetas

La micropipeta es un instrumento para medir pequeños volúmenes de líquidos. Pueden

medir un volumen único o volúmenes variables que oscilan entre 1 y 1000 μL. Se
emplean puntas desechables o tips, de plástico que se insertan en el extremo de la
micropipeta. Existen varios tipos de puntas; las más usadas son las amarillas, para
pipetear volúmenes pequeños (hasta 200 μL) y las azules, para pipetear volúmenes
grandes (hasta 1000 μL).

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Espectrofotometría

1) Determinación de la longitud de onda optima () de una solución

coloreada

 Poner la primera longitud de onda ().

 Colocar agua destilada en una cubeta y llevar a cero el espectrofotómetro.
 Colocar una solución de azul de metileno en otra cubeta y medir la absorbancia
(A).
 Cambiar la  según los valores indicados en la tabla, “llevando a cero” el aparato
con agua destilada cada vez, antes de leer la A de la solución coloreada.
 Anotar los valores de A obtenidos en la siguiente tabla:

 Absorbancia (A)
450 nm
500 nm
550 nm
600 nm
650 nm

 Graficar A en función de .

RESULTADO: La  óptima será aquella en la que la solución presente mayor absorción

(mayor valor de A).

2) Curva de calibración: variación de la absorbancia en función de la

concentración
 Se dispone de 5 tubos de hemólisis, cada uno con concentraciones crecientes de
de azul de metileno.
 Leer A en el espectrofotómetro y anotar los valores obtenidos en la siguiente
tabla:

N° de Tubo Absorbancia (A)

1
2
3
4
5

 Graficar A en función de la concentración del colorante (número de tubo) y

verificar el cumplimiento de la ley de Lambert- Beer.

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