Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas 

Facultad de Ciencias de la Salud 

(BL08) Células, tejidos y bioimágenes

Semestre 2022-02

CASO 4

Alberto es un estudiante de biología que está haciendo una pasantía en un laboratorio de diagnóstico
clínico. Un bebé de sexo masculino de aproximadamente 2 meses llegó a consulta, habiendo tenido un
parto normal. Además, sus controles prenatales no indicaron ninguna anomalía en su desarrollo. Sin
embargo, luego del parto se ha visto que el bebé muestra signos que son consistentes con síndromes
provocados por alteraciones cromosómicas (trisomías 13, 18 o 21). La familia es muy reservada y no
desea que las características clínicas sean compartidas con ninguna persona que no sea el médico
tratante y, a recomendación del médico, han decidido realizar un estudio genético que les permita
descartar algún problema a nivel cromosómico.

Alberto al saber del caso, propone hacer un cariotipo a partir de células del paciente. El médico
tratante acepta la propuesta, ya que un examen de este tipo en el extranjero demoraría 2 meses o
más, y el bebé necesita un tratamiento personalizado acorde con su probable diagnóstico.

Indicaciones:

● Elaborar un informe de investigación tomando en cuenta la siguiente distribución.

1. Título del trabajo Diagnóstico y detección de anomalías

cromosómicas mediante visualización
del cariotipo en humanos .

2. ¿Cuál es el problema en este caso? Durante una consulta médica, se observó que un bebé
de aproximadamente 2 meses presentó signos
consistentes con síndromes provocados por anomalías
cromosómicas (par 13, 18 o 21).

Dado que la familia es reservada, no desea que este

tipo de información se comparta con nadie más, por lo
que el médico ha sugerido que se realice un estudio
cromosómico (cariotipo) a partir de células del
 paciente.

3. Metodología A) Procedimiento 1) Se procedió a incubar las células (fibroblastos)

para preparación a 37°C, durante 45 minutos en una incubadora
de fibroblastos. de CO2.

2) Se realizaron los cálculos respectivos para

hallar la cantidad exacta de metanol y ácido
acético glacial, saliendo como resultado 18 mL
y 16 mL respectivamente.

3) Procedimos a medir los volúmenes en una

probeta, iniciamos con 18 mL de etanol y
finalmente medimos 16 mL de ácido acético
glacial en la probeta también.

4) Se realizó la medida de 10 mL de solución

salina, reemplazando el KCl que se especifica
en el protocolo. (50 mL de PbS)

5) Se lleva a incubar a 37°C durante

aproximadamente 10 min (en este paso, lo
más importante es que las células se
encuentren a la temperatura adecuada,
independientemente del tiempo)

6) Se realizaron cálculos con cantidades de

KH2PO4 y Na2HPO4. Las cantidades iniciales
para 1000mL eran de 0.469 del primero y
0.937 del segundo. Realizamos los cálculos y
nos resultaron las siguientes cantidades: 0.023
de KH2PO4 y 0.049 de Na2HPO4

7) Disolvemos los sólidos con 50mL de agua

destilada, lo cual nos resulta el GURR Buffer.

8) Preparamos la tinción Giemsa diluida, ya que

en la primera realización del experimento lo
hicimos puro. Procedemos a hacer una
dilución de 3:1, en la cual echamos 7.5 mL de
GURR Buffer y 2.5mL de gotas de Giemsa.

9) Retiramos el flask de la incubadora y botamos

el medio celular. Luego, se enjuaga con 5 ml
de solución salina y finalmente, se desecha el
restante.

10) Se agrega 5 ml de tripsina, los cuales se dejan

reposar de 2-3 minutos en la incubadora.

11) Pasado los 2 minutos, se agrega 5ml de medio

 y luego se procede a dar golpes repetidos al
flask donde se encuentra el medio, hasta que
se observe que el medio se ponga turbio (lo
cual indica el desprendimiento celular)

12) Se agrega el contenido del flask al tubo cónico

y lo rotulamos como Fibro-M2

13) A continuación, se lleva a centrifugar el tubo

cónico por 10 minutos a 200 xg
aproximadamente unas 4 o 5 veces para luego,
enjuagar con 10ml de solución salina

14) Desechar el sobrenadante dejando sólo el

pellet

15) Pipetear tres gotas de la suspensión celular al

portaobjetos, que debe estar inclinado
aproximadamente en un ángulo de 45°,
dejando que la suspensión ruede. Se realizaron
2 muestras a 20 cm de distancia y 3 muestras a
30 cm de distancia.

B) Procedimiento 1) Aplicamos 1 gota de fijador de Carnoy a cada

de fijación y de lámina portaobjetos (estando la lámina
tinción. húmeda)

2) Dejar secar por 10 minutos

3) Aplicar tinción Giemsa hasta que cubra

completamente la laminilla.

4) Dejar secar las laminillas por 5 minutos.

5) Enjuagar los portaobjetos con agua destilada y

dejar secar al aire hasta que esté
completamente seco.

C) Procedimiento 1) Pipetear 35 ul de Permont y añadir sobre la

de visualización muestra.
del cariotipo.
2) Colocar el cubreobjetos sobre el portaobjetos.
(Podemos limpiar el exceso de Permont con
papel toalla).

3) Observar en el microscopio con el aumento

40X.

4. Resultados: Los resultados obtenidos fueron los siguientes

 cromosomas observados en la imagen:

5. Observaciones: 1) No se realizó el uso de la solución hipotónica

de KCl, sino PbS, lo cual dió como resultado
que los núcleos no se expandieron en su
totalidad. De esta forma, los cromosomas no
se pudieron apreciar durante los intentos 1, 2
y 3.

2) No hubo suficiente ácido acético glacial, lo cual

hizo que no se pudiera realizar de manera
correcta el fijador de Carnoy.

3) Las células no se lisaron correctamente,

debido a que la altura no fue la correcta y esto
no permitió hacer una correcta lisis.

4) No hubo suficiente tiempo para poder realizar

cada uno de los pasos considerando el tiempo
de espera.

6. Conclusiones En general y tomando como referencia principal la

imagen obtenida del resultado, concluimos con que
no habrían anomalías en los pares de cromosomas
mencionados en la problemática (13, 18 o 21)
respectivamente, Sin embargo, esto no implica que la
 anomalía causante de los problemas en el recién
nacido no se encuentre en otros pares de
cromosomas, del mismo modo se recomendaría la
evaluación de los resultados por parte de un
especialista en citogenética. Ya que estamos
considerando que en el experimento inicial se empleó
KCL pero al ser reemplazada la sustancia con esto
podría ser un factor determinante por el cual no salió
el experimento como se hubiera deseado.

Material que se brindará al estudiante:

- Fibroblastos del paciente en cultivo
- Reactivos para realizar las coloraciones

Objetivo:

El estudiante deberá demostrar destreza en las técnicas de preparación de células,

fijación y coloración. Deberá investigar sobre la composición normal y patogénica de
un cariotipo humano, así como su identificación a partir de un bandeo G.

0.02345→ 1er componente

0.04865 → 2do componente