Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

Instituto de Ciencias Biomédicas

Departamento de Ciencias Químico-Biológicas
Licenciatura de Biología
Laboratorio de Monera

Venus González Cabrera

183485
MCSP María Elena Chávez Delgado
17 de abril 2023

Practica 8.
Medición del crecimiento bacteriano
Resumen

Iniciamos con un conteo con el método de las
diluciones y el vaciado en placa, se colocó 1
ml de Escherichia coli en los7 tubos de ensaye,
continuamos por diluir de 1x10-3 a 1x10-8 y
fue distribuido de una forma proporcional en
las dos cajas Petri por cada tubo. Después fue
medido el crecimiento por determinación
turbidimetría, incubando 13 tubos con 0.1 ml
de E. coli y midiendo su absorbancia en
intervalos de 1 hora.
Objetivo
• Desarrollar algunas técnicas comunes
para medir el crecimiento bacteriano
en poblaciones, tanto en células vivas,
como en muertas.
• Comprender el fundamento y su
aplicación.
Introducción
En condiciones controladas, en el laboratorio,
se puede seguir la evolución del número de
células a lo largo del tiempo de un cultivo
microbiano en un sistema cerrado. Si
representamos los resultados obtenidos
obtendremos la denominada curva de
crecimiento que comprende cuatro fases: fase
de latencia o de adaptación, fase de
crecimiento exponencial o logarítmico, fase
estacionaria y fase de muerte (Arana et al.,
2011).
Estas algunas técnicas comunes para medir el
crecimiento bacteriano en poblaciones tanto
de células vivas, como en células muertas:
Conteo de células: Este es el método más
simple y directo para medir el crecimiento
bacteriano. La muestra se diluye en una serie
de diluciones, y se tiñe con colorante que
permita distinguir las células. Luego se
cuentan las células en una cámara de conteo y
se calcula la densidad celular (Prescott et al.,
1999).
Turbidimetría: Se mide la absorbancia de la
luz a través de una muestra turbia. Si la
población bacteriana es grande, la absorbancia
será mayor. La técnica es rápida y fácil, pero
la precisión depende de la uniformidad de la
población celular y del medio de cultivo
(Prescott et al., 1999).
Producción de gas: Muchas bacterias
producen gas como producto del crecimiento,
como en el caso de Escherichia coli. Se utiliza
un dispositivo (tubo de Durham) adicionado al
medio de cultivo que permita capturar el gas
producido. La presencia de gas indica
crecimiento (Prescott et al., 1999).
Método 3. Los fuimos sacando en intervalos de
una hora para posteriormente medir su
Conteo por el método de diluciones y vaciado absorbancia en el fotocolorímetro
en placa. 4. Se observaron las etapas de
crecimiento haciendo una curva con
1. Iniciamos con 7 tubos de ensaye con 9 los resultados obtenidos.
ml de agua peptonada y solución
salina isotónica, marcándolos con las Resultado
diluciones desde 1x10-2 a 1x10-8. Tabla 1. Número de unidades formadoras de
2. Marcamos 5 cajas Petri estériles con colonias en las diferentes diluciones.
las diluciones de 1x10-3 a 1x10-7 e
Dilución Caja 1 Caja 2 Promedio
hicimos una réplica por tubo. de UFC
3. Utilizando una micropipeta se colocó 1𝑥10−3 3120 2535 2826
1ml de cultivo de Escherichia coli, 1𝑥10−4 100 111 155
agitamos y comenzamos a hacer las 1𝑥10−5 8 8 8
diluciones tubo por tubo tomando 1ml 1𝑥10−6 3 4 3
de la anterior dilución y así 1𝑥10−7 2 3 2.5
sucesivamente hasta el tubo 7.
4. Agregamos 1 ml de las diluciones Figura 2. Crecimiento de colonias en dilución
correspondientes a 2 cajas Petri, en de 1x10-3 duplicado y posterior a su
total 12 cajas Petri. incubación.
5. Se le agregaron 20 ml de medio de
cultivo fundido, dejamos que se
solidificara Y posterior a ello
incubamos a una temperatura de
37.1ºC por 48 horas.
6. Para finalizar se contaron las UFC
apoyándonos de una cámara cuenta Figura 3. Crecimiento de colonias formadas
colonias. en la dilución de 1x10-4 en duplicado y
posterior a su incubación.

Figura 4. Crecimiento de colonias formadas

Figura 1. Ilustración del método de las diluciones y en la dilución de 1x10-5 en duplicado y
vaciado de placa. posterior a su incubación.

Curva de crecimiento por determinación

turbidimetría.
1. Sembramos 0.1 ml de E. coli en 13
tubos de ensaye y se marcaron de 8 am
a 8 pm.
2. Se incubaron los tubos a 37ºC.
Figura 5. Crecimiento de colonias en la
dilución 1x10-6 en duplicado y posterior a su
incubación.

Figura 6. Crecimiento de colonias en la

dilución 1x10-7 en duplicado y posterior a su
incubación.
Discusión
A lo largo de la practica observamos como en
cada hora existió un cambio de UFC y para eso
se necesita conocer la célula viable, que es
aquella célula capaz de dividirse y forma una
progenie y la manera usual para realizar un
recuento de células viables es determinando el
Tabla 2. Resultados obtenidos por número de células en la muestra, capaces de
espectrofotómetro. Cantidad de absorbancia formar colonias sobre un medio de cultivo
correspondiente a cada tubo con E. coli
sólido (agar) y esto se conoce como recuento
respecto a su tiempo de incubación.
en placa (Pedrique, 2008).
Hora Absorbancia
8 AM 0.14 Se asume que cada colonia proviene de la
9 AM 0.02 división sucesiva de una sola célula,
10 AM 0.01 conociendo el volumen sembrado y la dilución
11 AM 0.01 de la cual proviene y contando el número de
12 PM 0.02 colonias en la placa correspondiente se puede
1 PM 0.02 calcular el número de células viables en la
2 PM 0 muestra. En estos métodos se tiende a obtener
3 PM 0.51 resultados satisfactorios, para la estimación de
4 PM 0.54 las poblaciones bacterianas. Es fácil de realizar
5 PM 0.55 y se adapta a la medición de poblaciones de
6 PM 0.02 cualquier densidad (Pedrique, 2008). Sin
7 PM 0.76 embargo, las mediciones de absorbancia no
8 PM 0.83 son congruentes ya que hubo errores en el
9 PM 0.83 etiquetado y por lo tanto no existió un correcto
traslado al cuarto frío.
Gráfico 1. Grafica lineal de crecimiento Conclusión
microbiano en E. Coli, en la cual el eje x
representa tiempo de incubación de cada tubo En esta práctica se logró desarrollar algunas
y eje y representa la cantidad de absorbancia. técnicas para medir el crecimiento bacteriano
en poblaciones en las cuales se comprendió
que la reproducción de los microorganismos
no solo depende del tiempo; sino también de
las condiciones en que se encuentren, algunos
microorganismos dependerán de las
concentraciones de pH, Glucosa, % de sal, la
humedad, temperatura, etc., para obtener un
verdadero desarrollo. En la metodología de
curva de crecimiento por determinación
turbidimetría se cometieron errores a la hora te
trasladar los tubos al cuarto frio por lo que en
los resultados se observa que los resultados no
son los esperados.

Bibliografía
Arana, I., Orruño, M., & Barcina, I. (2011).
Como abordar y resolver aspectos prácticos
de microbiología. Departamento Inmunología,
Microbiología y Parasitología Universidad del
País Vasco.
https://ocw.ehu.eus/file.php/48/Tema_4._calc
ulo_de_los_parametros_que_definen_el_creci
miento_bacteriano.pdf

Prescott, L., Harley, J., Klein D. (1999).

Microbiología. Cuarta edición. McGraw-Hill
Interamericana.

Pedrique, M. (2008). Reproducción y

crecimiento microbiano. Cátedra de
Microbiología - Facultad de Farmacia.