LABORATORIO DE GENÉTICA

CARRERA: Ingeniería en Biotecnología ASIGNATURA: Genética

NRO. PRÁCTICA: 2 TÍTULO PRÁCTICA: Tinción y observación de cromosomas

INTEGRANTES: Nery Cajas, Jenny Coyago, Arlen Díaz, Karla Mena, Antonella Silva

OBJETIVOS.

Objetivo General: Identificar las unidades de cromosomas que existen en nuestra sangre,
utilizando la metodología de paso a paso necesaria para observarlos en el microscopio.

Objetivos específicos:

• Realizar la extracción de ADN genómico a partir de sangre.

• Reforzar los conocimientos adquiridos en clase mediante una práctica dentro del
laboratorio.
• Observar el comportamiento de los cromosomas.

INTRODUCCIÓN.

Los cromosomas son aquellas estructuras que contienen la información genética de un individuo,
pues es el ADN enrollado en un conjunto de proteínas llamadas histonas y se localizan dentro del
núcleo celular llevando a cabo los procesos de división celular constante para originar células
jóvenes y nuevas.
Dichos procesos se conocen como mitosis y meiosis.

• Mitosis (todo tipo celular): a partir de una célula madre

diploide se obtienen dos células hijas diploides en una sola
división.
• Meiosis (gametos): a partir de una célula madre diploide se
obtienen cuatro células hijas haploides en dos divisiones.

Cada especie tiene su número de cromosomas, si hablamos de la especie humana, el total de

cromosomas que tiene es 46, este número resulta de las células germinales de los progenitores
(óvulo y espermatozoide) las cuales contienen 23 pares homólogos de cromosomas. En la lectura
del cariotipo el par sexual se indica aparte, quedando 46 XX (mujer) y 46 XY (hombre).

Para este análisis se necesita obtener una muestra la cual en este caso es la sangre humana, lo
siguiente es estimular a las células para que comiencen a dividirse y una vez alcanzada la metafase
se agrega colchicina para detener la mitosis ya que en esta fase son visibles al microscopio para su
estudio.
Se debe realizar la fijación y tinción en donde hay varios métodos, pero el más utilizado es con
Giemsa o también conocido como el bandeo G donde se pueden ver bandas en un patrón que
ayudarán a la agrupación de estos y así detectar si hay alguna anomalía.

METODOLOGÍA.
 Recolectar
sangre venosa,
colocar en una
jeringa estéril.
Debe contener
previamente
anticouagulant
e (Heparina
sódica).

Colocar en un
tubo cónico,
con medio de
cultivo
suplementario
y poner 9 gotas
de la muestra
de sangre
heparinizada

Cultivar en la
estufa durante
72 horas a 37º.
Anteriormente
añadir al
mismo 100ml
de Colchicina

Centrifugar la
muestra x 5
min a 2500rpm
 Con una
pipeta
pasteur,
extraer el
sobrenadant
e. Dejar 1ml
por sobre el
precipitado
y suspender.

De la
muestra
suspendida,
introducir en
la pipeta
pasteur y
agregar 6ml
de solución
hipotónica.

El contenido
colocarlo en
un tubo con
ayuda de la
pipeta
parteur,
incubarlo x
10min a 37º

Centrifugar
x 5min a
2500rpm,
extraer
sobrenadant
ey
suspender
 De la
pipeta
pasteur
retirar el
precipitado
, añadir el
fijador
Carnoy

Por 20min
al medio
ambiente.
Someter a
centrifugac
ción.
Eliminar-
suspender
sobrenadan
te

Tres veces
añadir 3ml
del fijador.
*Nota*par
a mejorar
la
preparació
n refigerar
x 30min

Sobrenada
nte, se
debe
eliminar/
Por sobre
el
precipitado
dejar 2ml
de líquido

Gotear la
solución en
el
portaobjeto
s a una
altura de
40-50cm
TINCIÓN.

Gotear sobre la primera

placa
Altura= 30cm//6 gotas de
sangre

Realizarlo 2 veces más

Exponer a la placa, al medio

ambiente para secado.

Colocar Giemsa luego del

secado, cubrir todo. x10min

Finalmente lavar con agua

el exceso, secar y observar.
al microoscopio
RESULTADOS.

Tras la práctica de laboratorio obtuvimos los

siguientes resultados, lo cual entendemos que no salió
los resultados que esperamos ver.

En estas imágenes no se puede observar los

cromosomas no son identificables como para realizar
un cariotipo.

DISCUSIÓN.

Se intento observar los cromosomas y su comportamiento en una muestra de sangre tomada de los
compañeros de laboratorio (2 personas), de manera segura y limpia. Se realizo correctamente el
procedimiento paso a paso dado por la docente a cargo, a pesar de eso no obtuvimos imágenes
claras de los cromosomas como se esperaba, por lo que no pudimos realizar las siguientes
actividades:

• Observar los cromosomas bajo un microscopio.

• Diferenciar su forma y estructura.
• Localizar partes del cromosoma.
• Reaccionar al comportamiento de un cromosoma.
Se intentó analizar el cariotipo obtenido desde el cultivo de linfocitos de sangre periférica. Una
vez conseguidos los cromosomas de las células en cultivo, tienen que ser sometidos a un método
de bandeo.

El bandeo G (o bandeo GTG) es un método por medio del cual los cromosomas son expuestos a
la acción enzimática controlada. Al ser teñidos, muestran un patrón de bandas oscuras y claras que
posibilitan la identificación (1, 2) de presencia de alguna forma de mutación como aneuploidías
(ganancias y/o pérdidas cromosómicas) y otras aberraciones estructurales. (Laboratorios clínicos,
2017).

CONCLUSIONES.

• Se realizo una extracción de sangre de 2 estudiantes de Biotecnología, para poder realizar

una fijación para posteriormente ser observados en el microscopio.
• Se logro comprender los conceptos que fueron adquiridos en clase, ya que dentro de la
práctica de laboratorio se hizo uso de todos los conocimientos para agilizar el trabajo.
• Al observar los cromosomas podemos decir que al no tener imágenes tan claras, fue difícil
interpretar los resultados, sin embargo, podemos concluir que se logró observar el material
cromosómico.

REFERENCIAS.

Laboratorios clínicos. (27 de Septiembre de 2017). Cibic. Obtenido de Citogenética: Cariotipo de

Alta Resolución: https://www.cibic.com.ar/laboratorios-bioquimicos/citogenetica-
cariotipo-de-alta-
resolucion/#:~:text=El%20bandeo%20G%20(o%20bandeo,identificaci%C3%B3n%20(1
%2C%202).

Martínez-Fernández, M., Sánchez-Izquierdo, M., & Martínez-Frías, M. (noviembre de 2015).

Resumen de la evolución de las técnicas de citogenética y genética molecular para la
identificación de las alteraciones genéticas del desarrollo embrionario. Recuperado el 06
de mayo de 2022, de elservier: https://www.elsevier.es/es-revista-medicina-familia-
semergen-40-articulo-resumen-evolucion-tecnicas-citogenetica-genetica-
S1138359310003199#:~:text=Tipos%20de%20tinciones%20de%20los,ciertos%20tipos
%20de%20alteraciones%20cromos%C3%B3micas.