TP Enzimas

HUMANA
CA
BIO UÍMI
- F
QB II
MED -
Q
CÁTEDRA 1
UB
.
A - DPTO
SEMINARIO
ENZIMAS
EJERCITACIÓN
MATERIA: QUÍMICA BIOLÓGICA II

CÁTEDRA 1
DPTO. BIOQUÍMICA HUMANA - FMED - UBA
CICLO LECTIVO 2022
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA
CÁTEDRA 1 - QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2022
ENZIMAS
EJERCITACIÓN
1. ¿Qué es una enzima? ¿Cuál es su función?
2. ¿Qué significa que una enzima es un catalizador biológico?
3. ¿Cuál es la estructura química de las enzimas? ¿Qué es el sitio activo de una enzima? ¿Por
qué tres aminoácidos que forman parte del sitio activo pueden estar alejados en la estructura
primaria?
4. Explique a qué se denomina apoenzima, holoenzima, coenzima, cofactor y grupo prostético.
5. Explique y ejemplifique qué son las isoenzimas.
6. ¿De qué depende la especificidad de las enzimas?
7. Para la reacción Sustrato →Producto se aplica el siguiente gráfico.
Calcule:
a) El G para la reacción de Sustrato → Producto, indicando si se producirá

espontáneamente esta reacción en el sentido en el que está escrita.
b) La energía de activación (Ea) en presencia y ausencia de enzima, indicando qué curva

corresponde a cada caso.
8. Defina actividad de una enzima. ¿Cómo se determina? ¿Qué son las Unidades
Internacionales (UI)?
9. ¿Cómo se hace para determinar la concentración de una determinada enzima en una muestra
de extracto tisular o de algún líquido biológico?
1
10. ¿Qué información brinda la actividad total y la actividad específica?
11. 20 l de un homogenato de tejido hepático (250 g de proteínas) catalizan la formación de

56,7 moles de glu-6P en 15 minutos de incubación en las condiciones óptimas para la
determinación de la actividad de glucoquinasa.
a) ¿Cuántas UI de enzimas habrá en dicha preparación?

b) ¿Cuántas por ml de homogenato?
c) ¿Cuál será la actividad específica de dicha preparación?
d) ¿Cómo esperaría que fuera este último valor con respecto al de la enzima pura?
e) ¿Cuál es el valor de actividad enzimática expresado en Katales?
12. Un extracto formado por 94 g de proteínas totales contiene una enzima (no purificada) que
cataliza la transformación de 480 μmoles de sustrato en producto en 30 segundos. Luego de
varios pasos de purificación, se obtuvieron 27 mg de proteínas totales, capaces de transformar
220 μmoles de sustrato en 30 segundos.
a) calcule la actividad (en unidades internacionales) y la actividad específica de las

preparaciones antes y después de la purificación.
b) ¿Cómo varían la actividad y la actividad específica en el proceso de purificación?
Justifique.
Recuerde:
Actividad enzimática:
Unidad Internacional Cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 μmol/ min
Katal Cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 mol/ seg
Actividad Específica AE = UI/ mg proteínas
13. ¿Cuáles son los factores que modifican la actividad enzimática?
14. Explique cuál es la influencia de las variaciones de temperatura sobre las velocidades de
reacción enzimática.
a) Dibuje un gráfico de la velocidad de reacción en función de la temperatura explicando qué

pasa a baja temperatura y alta temperatura.
b) ¿Qué es la temperatura óptima?
15. Discuta cómo afectan los cambios de pH a la actividad enzimática. ¿Cuál es el mecanismo
por el cual los cambios de pH afectan a la actividad enzimática?
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16. En el siguiente gráfico, se muestran los pH óptimos de tres enzimas ¿Qué puede decir al
respecto?
17. En el estudio de una enzima se midió la concentración del compuesto producido (producto) a
lo largo del tiempo. Se obtuvo el siguiente gráfico.
Proponga un diseño experimental para la obtención de este gráfico.
Indique:
a) ¿Qué parámetros se miden y cómo?
b) ¿Qué parámetros se mantienen constantes durante la determinación?
c) ¿Cómo se obtiene la velocidad de la reacción a un tiempo dado?
d) Compare la velocidad de la reacción a t1 y t2.
e) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico de concentración de producto

en función del tiempo de reacción?
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f) Grafique los resultados obtenidos si se realizara la medición de la concentración del

compuesto producido (producto) a lo largo del tiempo:
i) con diferente [Enzima]
ii) con diferente [S] inicial
g) Realice un gráfico que muestre cómo varía la velocidad de reacción en función del tiempo.
18. a) Explique qué información proporciona el siguiente gráfico.
b) ¿Cómo procedería experimentalmente para construir dicho gráfico?

c) ¿A qué se denomina una enzima michaeliana?
d) ¿Cuáles son los parámetros cinéticos de una enzima michaeliana?
e) Señale en el gráfico Km y Vmáx.
f) Dibujar en el mismo gráfico la curva que se obtiene con una concentración mayor de enzima.
En este caso ¿cómo se modifican el Km y la Vmáx?
g) ¿Cómo es la velocidad en un ensayo enzimático en el cual la concentración de sustrato es
mucho mayor que el Km?
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19. En un estudio experimental de una enzima se obtuvieron los siguientes resultados.
Tiempo [producto]
(minutos) (mM)
0 0
5 19,5
10 39
15 58,5
20 78
30 105
50 150
70 182
90 207
a) Calcule el valor de la velocidad inicial (V o).

b) Justifique hasta qué intervalo de tiempo es posible calcular la V o.
20. La hidrólisis de la sacarosa, catalizada por la sacarasa:

Sacarosa + H2O Glucosa + Fructosa
Se obtienen los siguientes datos.
Tiempo [producto]
(segundos) (mM)
0 0,050
20 0,195
40 0,342
60 0,488
90 0,659
130 0,770
180 0,871
360 0,991
Utilizando la tabla, grafique la concentración de producto en función del tiempo y

a) Calcule la velocidad inicial (Vo).
b) Indique hasta qué intervalo de tiempo es posible calcular la V o.
c) ¿Cómo varía la velocidad en función del tiempo?
5
21. Una cantidad constante de una solución de una enzima fue adicionada a una serie de tubos
conteniendo diferentes concentraciones de sustrato [S]. La velocidad inicial (V ) de la reacción
o
fue obtenida por la medida de la pendiente inicial de la curva de formación de producto. Los
datos se representan en la siguiente tabla:
[Sustrato] V o
(μM) (μM/min)
0,1 0,27
2 5
10 22
20 40
40 67
60 80
100 100
200 120
1000 150
2000 155
3000 163
Considere que la enzima tiene un comportamiento michaeliano.

a) Sin graficar, estime un valor aproximado para ambos parámetros cinéticos, K m y Vmáx.
b) Usando los parámetros cinéticos del inciso a), calcular la velocidad inicial cuando la
concentración de sustrato es 15 μM.
c) Utilizando los datos de la tabla, se realizó el gráfico de Michaelis-Menten. Calcule según el
gráfico los valores de Km y Vmáx.
180
160
140
Vo (µM/min)
120
100
80
60
40
20
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
[Sustrato] (µM)
d) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico de velocidad en función de la

concentración de sustrato?
e) Se realizó la representación gráfica de dobles recíprocas o Lineweaver-Burk. Calcule según

este gráfico los valores de Km y Vmáx.
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Tabla de datos para la construcción del gráfico de Lineweaver- Burk.
1/[Sustrato] 1/Vo
1/ (μM) 1/(μM/min)
10,0000 3,7037
0,5000 0,2000
0,1000 0,0455
0,0500 0,0250
0,0250 0,0149
0,0167 0,0125
0,0100 0,0100
0,0050 0,0083
0,0010 0,0067
0,0005 0,0065
0,0003 0,0061
Gráfico de Lineweaver-Burk
22. La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa y la fructosa utilizando ATP. Siendo el

Km para la glucosa 0,13 mM, mientras que para la fructosa es 1,3 mM. Indicar por cuál de
ambos sustratos la enzima tiene mayor afinidad. Considere que ambas V máx son muy similares
para ambos sustratos.
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23. Se tienen dos enzimas que catalizan la misma reacción: A  B

La enzima 1 tiene un Km para el compuesto A de 10 mM.
La enzima 2 tiene un Km para el compuesto A de 0,1 mM.
Compare la velocidad de ambas enzimas cuando la [A] = 1 mM, con respecto a la Vmáx de
cada una de las enzimas.
24. La penicilina es hidrolizada y así inactivada por la enzima penicilinasa, también conocida por
β-lactamasa, presente en algunas bacterias resistentes. Se midió la cantidad de penicilina
hidrolizada en un minuto en función a la concentración de penicilina y se obtuvieron los
resultados resumidos en la siguiente tabla:
[Penicilina] Cantidad
(μM) hidrolizada
(nmoles/min)
1,0 11
3,0 25
5,0 34
10 45
30 58
50 61
a) ¿Sigue la penicilinasa una cinética de Michaelis-Menten? En caso afirmativo,

b) ¿Cuál es el valor del Km?
c) ¿Cuál es el valor de la Vmáx? (Sugerencia, realice el gráfico de Lineweaver-Burk)
Inhibición enzimática
25. Se quiere determinar los parámetros cinéticos de una enzima que se comporta según el
modelo de Michaelis-Menten, en ausencia y en presencia de un inhibidor no competitivo. Se
obtuvo el siguiente gráfico:
a) Indique cómo se denomina dicho gráfico.

b) Indique cuál recta corresponde a la reacción en
ausencia (control) o presencia de dos
concentraciones diferentes de un inhibidor I (I1, I2).
Considere [I2] > [I1].
c) ¿Cómo calcularía los parámetros cinéticos a partir
del gráfico? ¿Qué valores calcula para K m y Vmáx en
cada caso?
d) Realice un gráfico de Michaelis-Menten (Vo en
función de [S]) para los tres casos, identificando a
qué corresponde cada curva.
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26. Se quiere determinar los parámetros cinéticos de otra enzima michaeliana, en ausencia y en
presencia de un inhibidor. Se obtuvo el siguiente gráfico:
a) Indique de qué tipo de inhibidor se trata.

b) Indique cuál recta corresponde a la reacción en ausencia (control) o presencia de dos
concentraciones diferentes de un inhibidor I (I1, I2). Considere [I2] > [I1].
c) ¿Cómo calcularía los parámetros
cinéticos a partir del gráfico? ¿Qué
valores calcula para Km y Vmáx en cada
caso?
d) Realice un gráfico de Michaelis-Menten
(Vo en función de [S]) para los tres
casos, identificando a qué corresponde
cada curva
27. La biosíntesis de purinas y pirimidinas utilizadas en la síntesis de ADN necesita ácido fólico.
El metotrexate es un análogo estructural del ácido fólico utilizado en el tratamiento de algunos
cánceres. Se fija con 1000 veces más afinidad que el sustrato a la enzima dihidrofolato
reductasa. Esta enzima es importante para el mantenimiento de los niveles del ácido fólico.
a) Grafique Vo en función de [S] en presencia y ausencia del inhibidor.
b) ¿Por qué este fármaco se utiliza para el tratamiento del cáncer?
c) ¿Por qué el fármaco tiene efectos secundarios que afectan al tubo digestivo y al sistema
hematopoyético?
28. El metabolismo del etanol se produce fundamentalmente en el hígado en dos pasos: en

principio el etanol se oxida a acetaldehído por la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) que
consume NAD+. El acetaldehído es medianamente tóxico, dado que normalmente es oxidado
por la aldehído deshidrogenasa (ALDH) a acetato.
El metanol también es sustrato de la alcohol deshidrogenasa, pero el producto formado

(formaldehído) que se acumula y es muy tóxico.
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ADH
Etanol + NAD  Acetaldehído + NADH + H+
+
ALDH
Acetaldehído + NAD+  Acetato + NADH + H+
Caso A. A un hombre de 43 años se le prescribió disulfiram, pero se le advirtió que no

consumiera alcohol durante el tratamiento. El disulfiram inhibe en forma irreversible a la enzima
aldehído deshidrogenasa y no presenta toxicidad en ausencia de alcohol. El paciente bebió una
gran cantidad de etanol en una fiesta y tuvo que ser trasladado al hospital, donde murió esa
misma noche. ¿Por qué el fármaco resulto tóxico para este paciente?
Caso B. Una persona ingirió vino adulterado con metanol. Posteriormente debió ser hospitalizada.
Como parte del tratamiento, el médico le suministró un exceso de etanol.
¿Cuál es el fundamento de este tratamiento?
Caso C. Los orientales son muy sensibles a las bebidas alcohólicas. Esto se debe a que la forma
mitocondrial de la enzima aldehído deshidrogenasa de bajo Km está ausente. Estas personas
solo poseen la enzima citosólica de alto Km.
a) Teniendo en cuenta esta información, explique la mayor susceptibilidad al alcohol en estos
individuos.
b) ¿Qué son entre sí las formas mitocondrial y citosólica de la enzima aldehído
deshidrogenasa?
29. La siguiente tabla indica la velocidad con que se transforma un sustrato en una reacción
catalizada por una enzima, en ausencia (C) y en presencia de dos inhibidores (I1 y I2). Calcule
Km y la Vmáx en cada caso, a partir del gráfico de Lineweaver-Burk, e indique de qué tipo de
inhibidor se trata en cada caso.
[Sustrato] Vo (mM/min)
(mM) C I1 I2
1 2,5 1,17 0,77
2 4,0 2,10 1,25
5 6,3 4,00 2,00
10 7,6 5,70 2,51
20 9,0 7,20 2,86
10
30. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:
[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)

(mM) Sin inhibidor Con inhibidor
2,0 139 88
3,0 179 121
4,0 213 149
10,0 313 257
15,0 370 313
a) el tipo de inhibición presente

b) el valor de Km en ausencia y en presencia del inhibidor
31. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:
[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)

mM Sin inhibidor Con inhibidor
1,5 0,21 0,08
2,0 0,25 0,10
3,0 0,28 0,12
4,0 0,33 013
8,0 0,40 0,16
16,0 0,44 0,18
a) el tipo de inhibición presente

b) el valor de Km en ausencia y en presencia del inhibidor.
32. Considere los siguientes datos para una reacción de hidrólisis catalizada por una enzima y en
presencia del inhibidor I:
[S] Vo Vo
(M) (μM/min) (μM/min)
Sin inhibidor Con inhibidor
6 .10-6 20,8 4,2
1 .10-5 29 5,8
2 .10-5 45 9
6 .10-5 67,7 13,6
1,8 .10-4 87 16,2
a) Utilizando una representación de Michaelis-Menten, determine el Km de la reacción en

ausencia o presencia del inhibidor.
b) Genere una representación de Lineweaver-Burk de los datos. Explique el significado de:
i) la ordenada al origen; ii) la intersección con el eje de las abscisas; iii) la pendiente
c) Determine de qué tipo de inhibición se trata.
11
Ejercicios adicionales
33. Se han realizado dos experimentos con la enzima ribonucleasa. En el experimento 1 se midió
el efecto del incremento de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción. En el
experimento 2, las mezclas de reacción fueron idénticas a las del experimento 1 excepto por la
adición de 0,1 mg de un compuesto desconocido por tubo.
Represente los datos de acuerdo con el método de Lineweaver-Burk. Determine el efecto del
compuesto desconocido sobre la actividad de la enzima.
Experimento 1 Experimento 2
[sustrato] Vo [sustrato] Vo
mM (mM/hora) mM (mM/hora)
0,5 0,81 0,5 0,42
0,67 0,95 0,67 0,67
1 1,25 1 0,71
2 1,61 2 1,08
34. La enzima aspartato transcarbamilasa cataliza la primera reacción propia de la síntesis de

pirimidinas. En un estudio de esta enzima, utilizando aspartato como sustrato, en presencia de
CTP 0,5 M y en ausencia del mismo, se obtuvieron los siguientes datos:
Aspartato V0 V0 con
(mM) sin CTP CTP 0,5 M
(mM/min) (mM/min)
1 0,45 0,2
2 0,8 0,4
3 1,7 0,7
4 2,9 1,0
5 3,4 1,4
7 4,3 2,4
9 5,1 3,7
10 5,3 4,2
12 5,6 4,8
15 5,8 5,5
16 5,8 5,6
17 5,8 5,6
a) Sin utilizar ninguna representación gráfica, estime el valor de K m y Vmáx.

b) Utilizando la ecuación de Michaelis-Menten, calcular Vo para una [S]= 3 mM. ¿Existe alguna
discrepancia entre estos datos y los experimentales? Justificarlo (la realización del grafico V o vs
[S] es una buena ayuda).
c) ¿Qué efecto tiene el CTP sobre la actividad enzimática?
12
35. En un ensayo enzimático en el cual la concentración de sustrato es mucho mayor que el K m,

¿qué relación existe entre la velocidad y la concentración de sustrato?
36. Dos isoenzimas E1 y E2 que actúan sobre el mismo sustrato S tienen los siguientes pares de
valores para sus correspondientes parámetros cinéticos:
Enzima E1: Vmáx = 6 µmoles/min/mg y Km= 0,40 mM

Enzima E2: Vmáx = 10 µmoles/min/mg y Km= 0,01 mM
La concentración fisiológica de S en la célula es de 0,4 mM.
En esas condiciones, ¿cuáles serán las velocidades (expresadas en µmoles/min/mg) con
que actuarán cada una de ellas?
37. ¿Qué tipo de mecanismo involucra la regulación de una actividad enzimática por
retroinhibición?
38. La hidrólisis de pirofosfato a fosfato constituye una fuerza impulsora importante en muchas
reacciones químicas (por ejemplo: síntesis de ADN). La V máx de una pirofosfatasa purificada de
E.coli es de 2800 UI/mg de enzima. ¿Cuántos moles de sustrato serán hidrolizados por
segundo por mg de enzima cuando la concentración del sustrato es mucho mayor que el Km?
13
RESPUESTAS CORRECTAS
11) a) 3,78 UI
b) 189 UI/ml homogenato
c) AE = 15 UI/mg prot
d) La actividad específica (AE) aumenta con el incremento de la pureza de la enzima.
e) 6,3 x 10-8 katales
12) a) Antes 960 UI, después 440 UI

Antes 0,010 UI/mg prot, después 16 UI/mg prot
b) La actividad enzimática disminuye, pero la AE aumenta con el proceso de purificación. Esto es
porque a lo largo de los distintos pasos de purificación se pierde una cierta cantidad de moléculas
de enzima, pero es mucho mayor la disminución de la masa de proteínas totales justamente por la
eliminación de la mayor parte de otras proteínas diferentes a la que está siendo purificada.
19) a) Vo = 3,9 mM/min

b) en cualquier intervalo de tiempo hasta los 20 minutos.
20) a) 7,3 10-3 mM/seg

b) hasta los 60 segundos
c)
14
21) a)
b) Vo = 32,6 M/ min.
c)
15
d)
Vmáx = 167 microM/min y Km = 63,7 microM
22) Como el Km glucosa = 0,13 mM, es menor que el Km fructosa = 1,3 mM, la hexoquinasa tiene más
afinidad por la glucosa que por la fructosa.
23) Usando la ecuación de Michaelis-Menten, cuando la [A] = 1 mM:

v01 = Vmáx/11 y v02 = Vmáx/1,1 o bien
v01 = 0,09 Vmáx y v02 = 0,9 Vmáx
24) a) Sí, sigue una cinética de Michaelis-Menten:
16
b) y c)
Vmáx = 68,5 nmoles/min y Km = 5,26 microM
Respuestas a la ejercitación de inhibición enzimática
25) a) Gráfico de Lineweaver- Burk o de dobles recíprocas
b)
Mayor concentración de
0,03
1/Vo Inhibidor
Menor concentración de
Inhibidor
0,02
Control
0,01
-1 1 2 3 4
1/(S)
c) Para calcular el Km:

-1/Km = -1  Km = 1 (en unidades de concentración de sustrato)
17
para calcular la Vmáx para el control

1/Vmáx = 0,002  Vmáx = 500 (en unidades de velocidad)
para calcular la Vmáx a la menor concentración de Inhibidor

para calcular la Vmáx a la mayor concentración de Inhibidor

inhibidor NO competitivo
d)
Vo
500 control
400
300
Mayor conc de Inhibidor

menor concentración del inhibidor
200
mayor conc de Inhibidor

100
0
0 5 10
Km = 1 (sustrato)
26) a) Inhibición competitiva

1/Vo
mayor concentración de inhibidor
0,03
0,02
menor concentración de inhibidor
0,01
control
-1 0 1 2 3 4 5
1/(S)
c) Para calcular la Vmáx

para calcular el Km en el control

-1/Km = -1  Km = 1 (en unidades de concentración de sustrato)
para calcular el Km a la menor concentración de Inhibidor

-1Km = - 0,5  Km= 2 (en unidades de concentración de sustrato)
18
para calcular el Km a la mayor concentración de Inhibidor

-1/Km = - 0,2  Km = 5 (en unidades de concentración de sustrato)
d)
InhibidorCompetitivo
Vo
500
V máx
control
400 menor concentración de inhibidor
mayor concentración de inhibidor
300
V máx/2
200
100
0
0,0 50 100
Km control Km inh2 (sustrato)
Km inh 1
27) a) Metrotexato se comporta como un inhibidor competitivo.
b) El metotrexato es un análogo estructural del ácido fólico que actúa inhibiendo competitivamente
la enzima dihidrofolato reductasa. Se utiliza para el tratamiento del cáncer ya que en presencia del
inhibidor disminuyen los niveles de ácido fólico el cual es necesario para la síntesis de novode
purinas y timidina, requeridas para la síntesis de ADN y ARN.
c) El tubo digestivo y el sistema hematopoyético poseen una alta tasa de recambio celular.
28) Caso A. El disulfiram, al inhibir a la aldehído deshidrogenasa, impidió la metabolización del

acetaldehído. Por lo tanto, en presencia de alcohol, los niveles de acetaldehído se elevaron hasta
alcanzar niveles tóxicos.
Caso B. El etanol y el metanol compiten por la enzima alcohol deshidrogenasa. En este caso, el
exceso de etanol desplaza al metanol de la unión a la enzima. Por lo tanto, se formará mayor
cantidad de acetaldehído y menor cantidad de formaldehído (muy tóxico).
Caso C. a) La enzima de alto Km sólo es efectiva a altas concentraciones de sustrato, en este

caso de acetaldehído. b) Las isoformas mitocondrial y citosólica de la ALDH son isoenzimas
19
29)
1,4 Inhibidor 2
1/Vo
compet
1,2
no competitivo
1,0
Inhibidor 1
0,8 No comp
competitivo
0,6
Control
0,4
0,2
0,0 1/ (S)
-0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
30) a) Inhibidor competitivo

b)
para calcular el Km en el control
-1/Km = -0,2 mM-1 Km = 5 mM
0,020
1/Vo
para calcular el Km para el Inhibidor
0,015
-1/Km = - 0,1 mM-1Km = 10 mM
Inhibidor competitivo
para calcular la Vmáx
0,010 1/Vmáx = 0,002 Vmáx = 500 (g prod /h)
0,005
0,000 1/ (S)
-0,2 0,0 0,2 0,4 0,6
31) a) Inhibición no competitiva
b) Se calculan las inversas 1/S y 1/V (en ausencia y presencia del inhibidor) para realizar el gráfico
de Lineweaver-Burk
mM uM/min uM/min
Sustrato V sin I V con I 1/s 1/v 1/Vi
1,5 0,21 0,08 0,67 4,76 12,50
2 0,25 0,095 0,50 4,00 10,53
3 0,28 0,12 0,33 3,57 8,33
4 0,33 0,13 0,25 3,03 7,69
8 0,4 0,16 0,13 2,50 6,25
16 0,44 0,18 0,06 2,27 5,56
20
15.00 y = 11.465x + 4.774
10.00
Con Inhibidor
5.00 Control
0.00
-1.50 -1.00 -0.50 0.00 0.50 1.00
-5.00
y = 4.1034x + 2.031
-10.00
Para calcular el Km
-1/Km = -0,4 mM-1 Km = 2,5 mM.
Para calcular Vmáx en ausencia del inhibidor

1/Vmáx = 2  Vmáx = 0,5 (g prod/h)
Para calcular Vmáx en presencia del inhibidor

1/Vmáx = 5  Vmáx = 0,2 (g prod/h)
Se pueden calcular también los valores de Km y Vmáx con mayor exactitud, despejando las
variables x e y a partir de las ecuaciones de las rectas.
32) Del gráfico de Michaelis – Menten el Valor de Vmáx para el control es cercano a 85 M/min y
el Km= 2.10-5. En presencia del inhibidor es necesario utilizar mayores concentraciones de
sustrato ya que no se llegó a una meseta
Michaelis-Menten
Vo (mol/min)
1/Vo
75
50
25
0
0,00000 0,00005 0,00010 0,00015 0,00020
sustrato (M)
-5,0 Ex4
21
b)
M µM/min µM/min
Sustrato V sin I V con I 1/s 1/v 1/Vi
0,000006 20,8 4,2 166666,67 0,05 0,24
0,00001 29 5,8 100000,00 0,03 0,17
0,00002 45 9 50000,00 0,02 0,11
0,00006 67,7 13,6 16666,67 0,01 0,07
0,00018 87 16,2 5555,56 0,01 0,06
0.30
0.25 Con Inhibidor
0.20 y = 1E-06x + 0.0563
0.15
0.10 y = 2E-07x + 0.0108
0.05 Control
0.00
-150000.00-100000.00-50000.00 0.00 50000.00100000.00150000.00200000.00
-0.05
-0.10
Km= 1/50000 2,00E-05 M

Vmáx 1/0,02 50 µM/min
Vmáx I 1/0,06 16,67 µM/min
i) la ordenada al origen es el valor de 1/Vmáx

ii) la intersección con el eje de las abscisas corresponde con el valor de -1/Km
iii) la pendiente corresponde a la relación Km/Vmáx
d) La inhibición es del tipo No Competitiva
22
33)
M µM/min µM/min
Sustrato V sin X V con X 1/s 1/V 1/Vx
0,5 0,81 0,42 2,00 1,23 2,38
0,67 0,95 0,67 1,49 1,05 1,49
1 1,25 0,71 1,00 0,80 1,41
2 1,61 1,08 0,50 0,62 0,93
3.00
2.50 Con
compuesto x
2.00
y = 0.8928x + 0.4376
1.50
Control
1.00
y = 0.4191x + 0.404
0.50
0.00
-2.00 -1.50 -1.00 -0.50 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50
-0.50
Vmáx= 1/0,44 2,27 uM/min

Km= 0,419/0,404 1,037 mM
KmI= 0,893/0,438 2,040 mM
Conclusión: En presencia del compuesto x, aumenta el Km y se mantiene igual la Vmáx. Podemos

decir que el compuesto desconocido actuaría como un inhibidor competitivo de la enzima
ribonucleasa.
34)
mM µM/min µM/min
V con
Aspartato V sin CTP
CTP
1 0,45 0,2
2 0,8 0,4
3 1,7 0,7
4 2,9 1
5 3,4 1,4
7 4,3 2,4
9 5,1 3,7
10 5,3 4,2
12 5,6 4,8
15 5,8 5,5
16 5,8 5,6
17 5,8 5,6
23
a) para el control Vmáx ≈ 6 Km ≈ 4 mM

para el inhibidor Vmáx ≈ 6 Km ≈ 8 mM
b) Considerando [S] = 3 Mm  para el control Vo calculado (ecuación Michaelis-Menten) = 2,5 y

el Vo empírico = 1,7
Los datos experimentales no se ajustan a una enzima michaeliana. Ver gráfico.
Control
Con CTP
c) el CTP es un modulador alostérico negativo.
35) Cuando [S]  Km entonces Km se puede despreciar frente a [S] por lo tanto la ecuación de
Michaelis-Menten quedaría:
Vo = Vmáx. [S] Vo = Vmáx. [S] o sea que Vo = Vmáx

Km +[S] [S]
36) A partir de la ecuación de Michaelis -Menten se obtiene:
E1: Vo=3 µmoles/min/mg (actúa a la mitad de su Vmáx)

E2: Vo=9,76 µmoles/min/mg (funciona a Vmáx)
O también. Dado que 0,4 mM es el Km de la E1 significa que la Vo para esa concentración será la
mitad de Vmáx o sea 3 µmoles/min/mg
Para la E2 una concentración de sustrato de 0,4 mM es mucho mayor que el Km de la enzima

(0,01 mM) por lo tanto la V=Vmáx
37) Modulación alostérica
38) 4,7x 10 -5 moles/mg enzima x seg
24

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HUMANA

MATERIA: QUÍMICA BIOLÓGICA II

1. ¿Qué es una enzima? ¿Cuál es su función?

2. ¿Qué significa que una enzima es un catalizador biológico?

4. Explique a qué se denomina apoenzima, holoenzima, coenzima, cofactor y grupo prostético.

5. Explique y ejemplifique qué son las isoenzimas.

6. ¿De qué depende la especificidad de las enzimas?

7. Para la reacción Sustrato →Producto se aplica el siguiente gráfico.

a) El G para la reacción de Sustrato → Producto, indicando si se producirá

b) La energía de activación (Ea) en presencia y ausencia de enzima, indicando qué curva

10. ¿Qué información brinda la actividad total y la actividad específica?

11. 20 l de un homogenato de tejido hepático (250 g de proteínas) catalizan la formación de

a) ¿Cuántas UI de enzimas habrá en dicha preparación?

a) calcule la actividad (en unidades internacionales) y la actividad específica de las

13. ¿Cuáles son los factores que modifican la actividad enzimática?

a) Dibuje un gráfico de la velocidad de reacción en función de la temperatura explicando qué

b) ¿Qué es la temperatura óptima?

Proponga un diseño experimental para la obtención de este gráfico.

a) ¿Qué parámetros se miden y cómo?

b) ¿Qué parámetros se mantienen constantes durante la determinación?

c) ¿Cómo se obtiene la velocidad de la reacción a un tiempo dado?

d) Compare la velocidad de la reacción a t1 y t2.

e) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico de concentración de producto

f) Grafique los resultados obtenidos si se realizara la medición de la concentración del

i) con diferente [Enzima]

ii) con diferente [S] inicial

18. a) Explique qué información proporciona el siguiente gráfico.

b) ¿Cómo procedería experimentalmente para construir dicho gráfico?

19. En un estudio experimental de una enzima se obtuvieron los siguientes resultados.

a) Calcule el valor de la velocidad inicial (V o).

20. La hidrólisis de la sacarosa, catalizada por la sacarasa:

Utilizando la tabla, grafique la concentración de producto en función del tiempo y

Considere que la enzima tiene un comportamiento michaeliano.

d) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico de velocidad en función de la

e) Se realizó la representación gráfica de dobles recíprocas o Lineweaver-Burk. Calcule según

Tabla de datos para la construcción del gráfico de Lineweaver- Burk.

22. La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa y la fructosa utilizando ATP. Siendo el

23. Se tienen dos enzimas que catalizan la misma reacción: A  B

a) ¿Sigue la penicilinasa una cinética de Michaelis-Menten? En caso afirmativo,

a) Indique cómo se denomina dicho gráfico.

a) Indique de qué tipo de inhibidor se trata.

28. El metabolismo del etanol se produce fundamentalmente en el hígado en dos pasos: en

El metanol también es sustrato de la alcohol deshidrogenasa, pero el producto formado

Caso A. A un hombre de 43 años se le prescribió disulfiram, pero se le advirtió que no

30. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:

[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)

a) el tipo de inhibición presente

31. A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:

[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)

a) el tipo de inhibición presente

a) Utilizando una representación de Michaelis-Menten, determine el Km de la reacción en

34. La enzima aspartato transcarbamilasa cataliza la primera reacción propia de la síntesis de

a) Sin utilizar ninguna representación gráfica, estime el valor de K m y Vmáx.

35. En un ensayo enzimático en el cual la concentración de sustrato es mucho mayor que el K m,

Enzima E1: Vmáx = 6 µmoles/min/mg y Km= 0,40 mM

12) a) Antes 960 UI, después 440 UI

19) a) Vo = 3,9 mM/min

20) a) 7,3 10-3 mM/seg

b) Vo = 32,6 M/ min.

Vmáx = 167 microM/min y Km = 63,7 microM

23) Usando la ecuación de Michaelis-Menten, cuando la [A] = 1 mM:

24) a) Sí, sigue una cinética de Michaelis-Menten: