° UNIVERSIDAD PONTIFICA BOLIVARIANA FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA EVALUACIÓN DE ENZIMAS Nombre: _______________________________________________________________________________________
Fecha: 10 de marzo 2020 Duración: Tipo de prueba: Mixta
Temáticas: Biología celular y macromoléculas Criterios de desempeño: Identifico las características de las enzimas y su función en las células Determino los parámetros que caracterizan la cinética de una enzima y analizo sus efectos en el comportamiento de la misma Analizo los impactos positivos y negativos de diferentes propuestas de ingeniería, para jerarquizarlas según su grado de afectación sobre el entorno y seleccionar una, explicando mis razones. 1. (1.0) Analice y responda: a. ¿Qué relación existe entre la concentración de la enzima y la velocidad máxima (V máx) de la reacción? b. ¿Influye la concentración de la enzima sobre el valor del Km? c. Haga una gráfica aproximada de la velocidad de reacción en función del sustrato (S) para dos preparaciones de una misma enzima de las cuales una tiene el doble de concentración de la otra. Indique claramente en el gráfico la Km y la Vmáx en ambos casos.
2. (1.0) Analice los siguientes gráficos y responda:
a. En la figura 1, se muestran las concentraciones de dos sustratos presentes en concentraciones similares y juntos en el mismo reactor, con una enzima. Ambos sustratos pueden ser convertidos por la misma enzima con aproximadamente el mismo número recambio (número de moléculas de sustrato transformadas por molécula de enzima en determinado tiempo). ¿identifique por cuál de los dos sustratos tiene mayor afinidad la enzima? Explique
b. Un investigador realiza tres experimentos con tres enzimas diferentes y grafica 2. Las concentraciones de enzima son iguales. ¿Cuál de las enzimas tiene el mayor valor de Vmax? Explique Bioquímica ejercicios cinética enzimática
3. (0.5) Durante un ensayo para establecer la cinética de la enzima glucanasa y el efecto de 3 sustancias inhibidoras (i1, i2 e i3), se obtuvieron las curvas de Lineweaver Burk que se presentan a continuación:
De la literatura se sabe que el compuesto i1 actúa como un inhibidor competitivo, el i2 como uno mixto y el i3 como uno acompetitivo. Determine cuál línea pertenece a cada tipo de inhibidor y cuál al ensayo sin inhibidor. Explique.
4. (1.0) En experimentos de laboratorio, se utilizaron dos enzimas tipo decarboxilasas (A y B) obtenidas de diferentes microorganismos (ver tabla). a. Grafique los datos empleando el grafico de MM y LB. Bioquímica ejercicios cinética enzimática b. Determine cual enzima demuestra un mayor coeficiente de especificidad, (Vmax/ Km), (recuerde que entre mayor sea el valor del coeficiente de especificidad más específica es la enzima por el sustrato) ENZIMA A ENZIMA B [S] (mM) V (uM/min) [S] (mM) V (um/min) 0.0002 0.3373 0.005 0.3962 0.0002 0.3364 0.005 0.3857 0.0005 0.6945 0.01 0.6163 0.0005 0.6957 0.01 0.6413 0.001 1.0764 0.05 1.5606 0.001 1.1407 0.05 1.5689 0.005 1.9636 0.1 1.9862 0.005 1.7706 0.1 1.7909 0.01 2.0641 0.25 2.2011 0.01 2.0751 0.25 2.2047
5. (1.0) El triclosán es un desinfectante que actúa uniéndose a la proteína transportadora enoil‐acil reductasa (ENR), el complejo de ENR-NAD+-triclosán produciendo inhibición de la síntesis de ácidos grasos (moléculas imprescindibles en la construcción y mantenimiento de las membranas celulares) lo que causa la muerte microbiana. El ser humano no posee la enzima ENR, de modo que no se ve afectado por el triclosán. A partir de estos resultados de cinética enzimática, responda:
V (mmol/L/min) [s] mmol/L Sin inhibidor Con inhibidor B 3mM Con inhibidor B 5mM 1.25 1.72 1.25 1.01 1.67 2.04 1.54 1.26 2.5 2.63 2 1.72 5 3.33 2.86 2.56 10 4.17 3.7 3.49
a. ¿Qué tipo de inhibidor es Triclosán?
b. ¿Cuál de las dos concentraciones de Inhibidor es más eficiente?
6. (0.5) En el campo de los alimentos, el pardeamiento enzimático (reacción de oxidación en la que interviene como sustrato el oxígeno molecular) puede ser un problema muy serio en frutas al producir alteraciones en: el color, características nutricionales y organolépticas que reducen el valor comercial de los productos. Éste es un problema que afecta los cultivos frutales como el Lulo; este pardeamiento es catalizado por enzimas llamadas Polifenol oxidasas (PFOs; PFO: EC 1.10.3.1, 1.10.3.2 y/o 1.14.18.1) Para comprender el comportamiento de esta enzima en los frutos de Lulo, se evaluaron las características fisicoquímicas y cinéticas. Para observar la acción enzimática se empleó la enzima PFO y el sustrato catecol. El experimento fue llevado a cabo en los seis estadios de maduración definidos comercialmente (estadio 0 verde y para el estadio 5 maduro). Bioquímica ejercicios cinética enzimática Al realizar el ajuste al modelo lineal, según el tratamiento de Lineweaver-Burk, se estimó la constante de Michaelis-Menten (KM) y la velocidad máxima (Vmáx) para cada uno de los estadios de maduración (tabla 1). Tener en cuenta la Vmáx está expresada en (mM x mg /min) Tabla 1. Parámetros cinéticos de la enzima PFO del extracto obtenido de los 6 estadios de maduración del lulo Estadios de maduración Km (mM) Vmáx (mM x mg /min) Color 0 5.71 268.08 Color 1 3.26 661.24
Color 2 4.15 609.20
Color 3 2.21 327.38
Color 4 1.16 117.29
Color 5 5,35 629.28
a. Responda y jutifique: I. En que estadio se presentó menor afinidad por el sustrato catecol: II. En que estadio se presentó mayor afinidad por el sustrato catecol: III. En que estadios se presentó mayor eficiencia de la enzima PFO en la trasformación del catecol: IV. En que estadios se presentó menor eficiencia de la enzima PFO en la trasformación del catecol:
b. Debido a estos resultados, en que estadio de maduración sugeriría a los cultivadores de lulo realizar la cosecha para obtener frutos de calidad y capaces de ser conservados por un tiempo prolongado.
