INFORME DE LABORATORIO

COCOS GRAM POSITIVOS: ASPECTOS PRÁCTICOS

INTEGRANTES
Blanca Susana Cujia Castro
Andrea Carolina Barraza Llamas
Vanessa Cecilia Mejía Cardiles
Herlis Yamile Trespalacios Gutiérrez

DOCENTE
Yiceth Katherine Acosta Triana

UNIVERSIDAD DE SANTANDER
INFECTOLOGÍA / V SEMESTRE
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
VALLEDUPAR /CESAR
2022
 RESUMEN

En esta práctica se realizarán distintos tipos de pruebas las cuales podemos diferenciar los
grupos y géneros los cuales deseamos estudiar

Los estafilococos son microorganismos aerobios Gram positivos. El más patogénico de ellos
es el Staphylococcus aureus, que típicamente causa infecciones de la piel y a veces
neumonía, endocarditis y osteomielitis. En general se lo asocia con la formación de
abscesos

La mayoría de las especies de Streptococcus son anaerobios facultativos, y algunos crecen

únicamente en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono (bacterias carboxílicas).
Sus exigencias nutricionales son complejas, y su aislamiento requiere el uso de medios
enriquecidos con sangre o suero. Son capaces de fermentar carbohidratos produciendo
ácido láctico y también son catalasa negativa a diferencia de los estafilococos.

ABSTRACT

In this practice different types of tests will be performed which can differentiate the groups
and genders which we want to study

Staphylococci are Gram-positive aerobic microorganisms. The most pathogenic of these is

Staphylococcus aureus, which typically causes skin infections and sometimes pneumonia,
endocarditis, and osteomyelitis. It is generally associated with abscess formation.

Most Streptococcus species are facultative anaerobes, and some grow only in an
atmosphere enriched with carbon dioxide (carboxylic bacteria). Their nutritional requirements
are complex, and their isolation requires the use of media enriched with blood or serum.
They are capable of fermenting carbohydrates producing lactic acid and are also catalase
negative unlike staphylococci.
 INTRODUCCIÓN

El primer paso para la identificación de una especie bacteriana es el estudio de su

morfología microscópica y macroscópica. Luego se deben estudiar sus requerimientos
atmosféricos y nutricionales. Por último se procederá a la realización de pruebas
bioquímicas que permitirán llegar a la identificación de género y especie bacteriana. Las
Staphylococcus son un grupo de bacterias. Hay más de 30 tipos. Un tipo llamado
Staphylococcus aureus causa la mayoría de las infecciones por estafilococos. Las bacterias
de estafilococos pueden causar muchos tipos diferentes de infecciones, incluyendo:

- Infecciones de la piel: Los tipos más comunes de infecciones por estafilococos

- Bacteriemia: Infección del torrente sanguíneo que puede llevar a una sepsis, una
respuesta inmune muy seria a la infección
- Infecciones de los huesos
- Endocarditis: Infección del revestimiento interno de las cámaras y válvulas del
corazón
- Intoxicación por la ingesta de alimentos
- Neumonía infección del sistema respiratorio
- Síndrome del shock tóxico: Afección potencialmente mortal causada por toxinas de
ciertos tipos de bacterias
- Por eso es importante saber y conocer frente a qué microorganismo vamos a tratar
conocer bien su morfología nos ayudará a poder tener los resultados deseados.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

➢ GÉNEROS : Staphylococcus y Streptococcus

OBJETIVO: Identificar la morfología microscópica y macroscópica de las especies

bacterianas.

NOTA:Para la identificación y observación de bacterias en el experimento se utilizaron

como estudio: S.aureus,S.pyogenes y S.haemolyticus.

MATERIALES:
● Cultivos
● Mechero
● Microscopio
● Asa de siembra
● Portaobjetos
● Solución salina
● Cristal Violeta
● Lugol
● Alcohol acetona
● Fucsina
● Aceite de inmersión
● Cepas bacterianas: S.aureus , S.haemolyticus (estafilococos) y S.pyogenes (
estreptococos).
PROCEDIMIENTO:

1. Aplicar una gota de solución salina en el portaobjetos limpio

2. Flamear el Asa de siembra para esterilizarla
3. Enfriar el Asa e introducirlo dentro del cultivo para poder tomar una muestra de las
bacterias.
4. Tomar la muestra y aplicarlo en el portaobjetos
5. Hacer el frotis en el portaobjetos
6. Fijarlo a la flama
7. Cubrir con cristal violeta durante 1 minuto y después lave ligeramente con agua
corriente
8. Cubrir con yodopovidona (Lugol) durante 40 segundos
9. Lavar con agua corriente
10. Decolorar con alcohol-acetona durante 20 segundos
11. Lavar con agua corriente
12. Cubrir con fucsina durante 40 segundos
13. Lavar con agua corriente
14. Dejar secar y observar al microscopio.
 ➢ PRUEBA DE LA CATALASA

NOTA: Para este experimento se utilizaron como muestras de investigación bacteriana en

la catalasa (+) : S.aureus y en la muestra que pertenecen a la familia de estreptococos
catalasa (-) se emplearon los y-hemolíticos (enterococos):S.faecium y los B-hemolitico
:S.agalactiae.

MATERIALES
● 3 portaobjetos
● Peróxido de hidrógeno
● Cultivos de bacterias:S.aureus,S.faecium y S.agalactiae
● Hisopo de algodón

PROCEDIMIENTO:

1. Colocar una gota de peróxido de hidrógeno al 3% en cada portaobjetos.

2. Tomar con un hisopo de algodón una muestra de los cultivos puros de bacterias
:S.aureus,S.faecium y S.agalactiae. Es decir, cada muestra que se tome deberá de
ser utilizados por hisopos diferentes en cada portaobjetos para no contaminar la
muestra bacteriana.
3. Realizar el frotis.
4. Observar que portaobjetos con la muestra bacteriana hacen o no efervescencia.

➢ PRUEBA DE LA COAGULASA

NOTA: Para este experimento se emplearon como muestras de investigación bacteriana en

coagulasa (+) :S.aureus y coagulasa (-) :S.epidermidis

MATERIALES:
● Mechero
● Asa de siembra
● Cultivos puros:S.aureus y S.epidermidis
● 2 tubos de 0,5 ml de plasma citratado

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear asa de siembra
2. Enfriar el asa de siembra
3. Usar un cultivo de siembra para tomar una muestra de la bacteria
4. Abrir tubo que contiene el plasma citratado para flamear su boca
5. Introducir la muestra dentro del tubo que contiene el plasma
6. Flamear la boca del tubo y cerrarlo
7. Llevar el tubo a incubar a 35° por 24 h
8. Observar después de las 24h para ver si hay presencia del coágulo o no.

➢ PRUEBA DE PRESENCIA DESOXIRRIBONUCLEASA (DNAsa)

NOTA: Para este experimento se utilizaron como muestras de investigación bacteriana un

S.aureus y S.haemolyticus.
MATERIALES:
● Agar DNAsa
● Mechero
● Asa de siembra
● Hisopo de algodón
● Cultivos de S.aureus y S.haemolyticus

PROCEDIMIENTO:
1. Utilizar el mechero para flamear el asa de siembra para esterilizar.
2. Cortar a la mitad en el agar DNAsa con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir el cultivo y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el agar
DNAsa y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de
estafilococos en forma de estría y botón.
5. Incubar por 18 h a 35°.

➢ PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA

NOTA: Para este experimento se implementaron bacterias en estudio: S.saprophyticus y un

S.epidermidis (perteneciente a los estafilococos coagulasa negativa)1.

MATERIALES:
● Agar sangre
● Asa de siembra
● Cepas bacterianas:S.saprophyticus y un S.epidermidis
● Hisopo de algodón
● Mechero
● 2 disco de novobiocina
● Pinzas

Discos de novobiocina

PROCEDIMIENTO:
1. Utilizar el mechero para flamear el asa de siembra para esterilizar.
 2. Cortar a la mitad en el agar sangre con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir la cepa y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el agar
sangre y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de
estafilococos realizando un barrido.
5. Flamear las pinzas
6. Usar las pinzas para tomar los discos de novobiocina e insertarlos en cada medio de
cultivo del agar sangre.
7. Incubar a 35° por 18 horas.

➢ PRUEBA DE FERMENTACIÓN DEL MANITOL EL AGAR-MANITOL SALADO

NOTA:En este experimento se utilizaron como cepas de estudio: S.aureus y

S.haemolyticus.

MATERIALES:
● Agar- Manitol Salado
● Mechero
● Asa de siembra
● Bacterias cocos Gram (+) : S.aureus y S.haemolyticus.
● Asa de siembra
● Hisopo de Algodón

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear el asa de siembra
2. Cortar a la mitad el agar-manitol salado con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir la cepa y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el
agar-manitol salado y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de
estafilococos realizando un barrido.
5. Incubar a 35° por 24 horas.

➢ PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

NOTA: Para este experimento se emplearon como muestras de bacterias en

investigación:S.pyogenes y S.agalactiae.

MATERIALES:
● 2 discos de bacitracina
● Un agar sangre
● Un hisopo de algodón
● Pinzas
● Cultivos:S.pyogenes y S.agalactiae.

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear el asa de siembra para esterilizar
 2. Cortar a la mitad el agar sangre con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir la cepa y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el agar
sangre y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de
estreptococos realizando un barrido en varias direcciones.
5. Esterilizar la pinza y tomar un disco de bacitracina para transferirlo a dentro de la
muestra de cultivo.
6. Incubar por 24 horas a 37°.

➢ PRUEBA DE LA BILIS ESCULINA

NOTA:En este experimento se implementaron como cepas en investigación: E.faecalis y

S.pyogenes.

MATERIALES:
● 2 tubos de agar bilis esculina
● Cepas bacterianas:E.faecalis y S.pyogenes.
● Asa de siembra
● Mechero

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear el asa de siembra .
2. Abrir la cepa e introducir el asa en una de sus esquinas que no contenga colonia
para enfriar la.
3. Recoger una muestra de la bacteria con el asa de siembra.
4. Abrir el tubo de agar de bilis esculina flamear la boca e introducir el asa que contiene
la muestra para cultivar las bacterias dentro del tubo.
5. Flamear la boca del tubo y cerrar.
6. Incubar por 24 h a 35°.

➢ PRUEBA DE CAMP

NOTA: En este experimento de investigación se utilizaron las cepas: S.agalactiae y

S.pyogenes.

MATERIALES:
● Cepas de cultivo:S.agalactiae y S.pyogenes.
● Un agar sangre
● Mechero
● Asa de siembra
● Hisopo de algodón

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear el asa de siembra para esterilizar
2. Cortar a la mitad el agar sangre con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir la cepa y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
 4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el agar
sangre y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de los
estreptococos realizando un estriado en forma perpendicular a una estría.
5. Incubar a 37° por 24 horas.

➢ PRUEBA DE TOLERANCIA A LA SAL (CALDO SALADO)

NOTA: En esta investigación se implementaron cepas en estudio: E.faecalis y S.pyogenes.

MATERIALES:
● Cepas bacterianas:E.faecalis y S.pyogenes.
● Asa de siembra
● Mechero
● 2 tubos de caldo salado
● Mechero

PROCEDIMIENTO:
1. Flamear el asa de siembra .
2. Abrir la cepa e introducir el asa en una de sus esquinas que no contenga colonia
para enfriar la.
3. Recoger una muestra de la bacteria con el asa de siembra.
4. Abrir el tubo de caldo salado , flamear la boca e introducir el asa que contiene la
muestra para cultivar las bacterias dentro del tubo.
5. Flamear la boca del tubo y cerrar.
6. Incubar a 35° por 24h

➢ PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

OBJETIVO:Diferenciar los S.pneumoniae de otros estreptococos α-hemolíticos.Por lo tanto

,separar estreptococos α-hemolíticos.

NOTA:Para la práctica de laboratorio se emplearon como muestras de bacterias en estudio

a los: S.pneumoniae y S.viridans.

MATERIALES:
● Cepas de cultivo:S.pneumoniae y S.viridans.
● Un Agar sangre
● 2 discos de optoquina
● Asa de siembra
● Hisopo de algodón

PROCEDIMIENTO:
1. Utilizar el mechero para flamear el asa de siembra para esterilizar.
2. Cortar a la mitad el agar sangre con el asa de siembra para separar las dos
muestras bacterianas que se van a cultivar.
3. Abrir la cepa y recoger una muestra con un hisopo de algodón.
 4. Posteriormente de tomar la muestra bacteriana en el hisopo ,introducirla en el agar
sangre y con el hisopo que contiene las bacterias sembrar la colonia de
estreptococos realizando un barrido en varias direcciones .
5. Flamear las pinzas.
6. Usar las pinzas para tomar los discos de optoquina e insertarlos en cada medio de
cultivo.
7. Incubar por 24 h a 37°.

RESULTADOS

Cepa n°1: S. Cepa N°2: S. Cepa N°3: S.

haemolyticus pyogenes aureus

Morfología Estafilococo Gram Estreptococo Gram Estafilococo Gram

macroscópica positivo positivo positivo

Morfología
microscópica

Prueba de catalasa
Cepa N°1: S. Cepa N°2: E. Cepa N°3: S.
aureus faecium agalactiae

Resultado Desprendimiento de Sin burbujas Sin burbujas

burbujas (catalasa (catalasa negativo) (catalasa negativo)
positivo)
Prueba de coagulasa
Cepa N°1: S. aureus Cepa N°2: S. epidermidis

Resultado Coágulo total (coagulasa No coaguló (coagulasa

positivo) negativo)

Prueba de DNAsa
Cepa N°1: S. aureus Cepa N°2: S. haemolyticus

Resultado Se observó halo No se observó halo

transparente luego de transparente
agregar HCl 1N

Prueba de susceptibilidad a la Novobiocina

Cepa N°1: S. Cepa N°2: S. epidermidis
saprophyticus

Resultado Resistente a Novobiocina Sensible a la Novobiocina

Prueba de fermentación del Manitol el Agar-Manitol salado
Cepa N°1: S. aureus Cepa N°2: S. haemolyticus

Resultado Se observa halo amarilo No se observa halo amarillo

débil

Prueba de sensibilidad a la Bacitracina

Cepa N°1: S. pyogenes Cepa N°2: S. agalactiae

Resultado Sensible, se observa halo Resistente, no se observa

de inhibición halo de inhibición

Prueba de Bilis Esculina

Cepa N°1: E. faecalis Cepa N°2: S. pyogenes

Resultado Ennegrecimiento (prueba No se ennegreció (prueba

positiva) negativa)
Prueba de CAMP
Montaje

Resultado Se observa la zona de potencialización de hemólisis formada por el

cultivo de S. agalactiae a diferencia del S. pyogenes que no lo
muestra

Prueba de tolerancia a la sal (caldo salado)

Cepa N°1: E. faecalis Cepa N°2: S. pyogenes

Resultado Sin turbidez, se puso poca Sin turbidez

muestra de microorganismo
Prueba de sensibilidad a la Optoquina
Cepa N°1: S. pneumoniae Cepa N°2: S. viridans

Resultado Sensible a la optoquina Resistente a la optoquina

DISCUSIÓN

En la prueba de catalasa, al observar el comportamiento del peróxido de hidrógeno sobre la

primera cepa de S. aureus, se ve la presencia de burbujas lo que indica que es una prueba
positiva de estafilococos, esto debido a la presencia de una enzima llamada catalasa la cual
está presente en organismos bacterianos del género estafilococo, lo que hace esta enzima
es descomponer el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. En las cepas 2 (E. faecium) y
3 (S. agalactiae), no se observó la presencia de burbujas y teniendo en cuenta el
fundamento del test estas son pruebas de catalasa negativa, es decir, son estreptococos. El
siguiente test, prueba de coagulasa, dio los siguientes resultados, la primera cepa de S.
aureus mostró un coágulo, por lo que se considera que es una prueba positiva, esto gracias
a la capacidad que tiene este microorganismo de producir las enzimas endocoagulasa y
exocoagulasa, las cuales son capaces de coagular el plasma; por su parte, la segunda cepa
de S. epidermidis no coaguló, es decir, este microorganismo hace parte del grupo de
estafilococos coagulasa negativo.

En la prueba de DNAsa, luego de cubrir la placa con ácido clorhídrico 1N, después de 5
minutos se observó la formación de un halo claro, transparente alrededor del crecimiento
del S. aureus, este es un DNAsa positivo debido a que el ácido desoxirribonucleico presente
en este microorganismo es polimerizado, a diferencia del S. haemolyticus que no contiene
esta enzima, por lo que es un DNAsa negativo. Por consiguiente, al realizar el test de
susceptibilidad a la novobiocina, en la muestra de S. epidermidis se observó un halo de
inhibición alrededor del disco de novobiocina, esto muestra la sensibilidad del
microorganismo ante este antibiótico pues no puede crecer en presencia de él; en cambio,
el S. saprophyticus si es resistente a la novobiocina pero en la prueba no se pudo observar
ya que se tomó poca muestra del organismo bacteriano.

La prueba de fermentación de manitol se desarrollo con las muestras de S. aureus y S.

haemolyticus, en el primero se visualizó un halo amarillo débil, este estafilococo coagulasa
positivo es capaz de fermentar el manitol; el segundo microorganismo, por su parte, se debe
visualizar como una colonia de color rojo pues no fermenta el manitol. Al llevar a cabo el test
de sensibilidad a la bacitracina se evidenció que los beta hemolíticos S. pyogenes son
sensibles a la bacitracina y los S. agalactiae son resistentes; el primero, muestra halo de
inhibición y el segundo no.

En la prueba de bilis esculina, en la cepa de E. faecalis se observa un ennegrecimiento del

medio de cultivo, estos estreptococos del grupo D tienen la capacidad de crecer
rápidamente en el agar bilis esculina e hidrolizar la esculina; en cambio, la cepa de S.
pyogenes no se ennegreció pues no tiene esta capacidad. La prueba de CAMP mostró una
zona de potencialización de hemólisis formada por el cultivo de S. agalactiae pues estos
estreptococos del grupo B producen el factor de monofosfato de adenina cíclica, a
diferencia del S. pyogenes que no muestra esta zona.

La prueba de tolerancia a la sal no se pudo observar bien debido a que se tomó poca
muestra de E. faecalis, este enterococo debía mostrar turbidez pues es capaz de crecer en
concentraciones de NaCl; la otra muestra, S. pyogenes, tampoco tuvo turbidez porque no
tiene la misma capacidad del enterococo mencionado anteriormente. Por último, en la
prueba de optoquina se evidenció que el S. viridans es resistente pues crece alrededor de la
optoquina por lo que no se muestra un halo de inhibición; por el contrario, el S. pneumoniae
es sensible debido a que no puede crecer ante la presencia de optoquina.

CONCLUSIÓN

Las pruebas bioquímicas anteriormente mencionadas son de mucha utilidad para

identificación de numerosos microorganismos, ya sean estafilococos o estreptococos,
mediante pruebas de cultivo de bacterias se pueden detectar bacterias perjudiciales o el
agente patológico responsable de ciertas implicaciones patogénicas, esto ayuda a
diagnosticar ciertos tipos de infecciones, realizar la evaluación clínica y aplicar una terapia
antimicrobiana eficaz, un pilar fundamental en la práctica de la microbiología clínica lo
constituye la asignación de especie a un aislamiento microbiano.

BIBLIOGRAFÍA
1. Fariña N ; Sanabria R ; Figueredo L ; Ramos ; Samudio.2005.Staphylococcus
saprophyticus como patógeno urinario.Scielo.Mem. Inst. investigando Cienc. Salud
vol.3 no.1 Asunción Dic. 2005.Encontrado
en:http://scielo.iics.una.py/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1812-952820050
00100008#:~:text=La%20prueba%20del%20disco%20de,saprophyticus%2C%20
Infecci%C3%B3n%20urinaria%2C%20Mujeres.

2. INSTRUCCIONES DE USO - MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR . (s/f).

www.bd.com. Recuperado el 8 de agosto de 2022, de
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8771