MANUAL DE MICROBIOLOGÍA
PRACTICA Nº 6
ESTUDIO DE Staphylococcus
I.INTRODUCCION
Los estafilococos constituyen un grupo de
microorganismos esféricos gam positivos.
agrupados típicamente en forma de racimo, son
inmóviles y no esporulados.
Pertenecen a la familia Staphylococcaceae, la
especie patógena del género es Staphylococcus
aureus. Este microorganismo puede formar parte
de la flora normal de las fosas nasales y del
perineo del ser humano y es causante de diversos
procesos infecciosos purulentos, de infecciones
alimentarias y de infecciones particularmente
graves como bacteriemias.
La producción de una serie de enzimas y toxinas
ayudan a entender la patogenia de las
enfermedades causadas por este gérmen y
algunas de ellas como la enzima coagulasa nos
ayudan a identificar la especie S. aureus en e!
laboratorio.
Algunas especies de estafilococos coagulasa
negativos tales como S. epidermidis y S
saprophyticus vienen teniendo un papel
relevante en cuadros infecciosos bacteriémicos y
urinarios.
Staphyloccus aureus conocido como
“estafilococo dorado”, es una bacteria poco
exigente, desarrolla en Agar Nutritivo, es catalasa
positivo, es una bacteria anaerobia facultativa,
desarrolla colonias circulares convexas de 1 a 3
mm en 24 horas a 34 -37ºC, en el agar sangre
produce hemólisis total de los hematíes (beta
hemólisis). Tolera altas concentraciones de ClNa
por lo que desarrollan en el medio selectivo agar
Hipertónico de Chapman donde metabolizan el
manitol (colonias amarillas). Son resistentes al
frío y al calor medio ambiental. Producen la
enzima coagulasa coagulando el medio líquido
caldo-plasma.
LECTURA DE CULTIVO:
Crecimiento en medio líquido:
• Observar el crecimiento de los
estafilococos en el caldo nutritivo
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA – FACULTAD DE MEDICINA – U.N.M.S.M.
Dr. José M. Guevara Granados
Li. Elizabeth Pareja Cuadros
Lic. Carlos Sevilla Andrade
produce turbidez homogénea en todo el
tubo con formación de poco sedimento.
• Observar el desarrollo en el agar
Hipertónico de Chapman, las colonias
manita positiva de S. aureus y S
saprophyticus que presentan un color
amarillo al virar el indicador rojo de
fenol a la acidez y las colonias manita
negativas de S. epidermidis sin viración.
• Prueba de la coagulasa, luego de incubar
a 37°C observar cada hora la aparición
de coágulos, por espacio de 4 horas , si
no aparece dejar incubar por 24 horas. Si
aparece un coágulo la bacteria posee la
enzima coagulasa y se trata de la especie
S. aureus. Las otras dos especies son
negativas.
• Prueba de la DNAasa: Inocular las tres
cepas bacterianas en una placa de agar
DNAasa en forma tupida en un área
circular de 1cm. de diámetro. Incubar a
37°C por 24 horas.
Con una pipeta pasteur agregar una gota
de HCL I IN al borde del. crecimiento
bacteriano de cada una de las especies y
esperar unos minutos. S. aureus presenta
un halo transparente como resultado de
la producción de DNasa de parte de la
bacteria. que metabolizó el DNA
contenido en el medio circundante.
• Prueba de sensibilidad a la Novobiocina
: Inocular un cuadrante de la placa de
Muller Hinton en tapete utilizando una
torunda embebida en caldo nutritivo
con cada una de las cepas de
estafilococos cuya turbidez equivale al
tubo 0.5 de la escala de Mac Farland.
Colocar un disco de Novobiocina en
cada uno de los cuadrantes sembrados.
Incubar a 37° por 24 horas. Observar la
aparición de un halo inhibición para S.
aureus y S. epidemidis lo que indica
sensibilidad a la Novobiocina. S.
saprophyticus es resistente a la
Novob:ocina.
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 • Prueba de la Catalasa: Colocar con el asa
de siemba una pequeña parte de la
colonia de cada una de las cepas sobre la
lámina .Añadir una goa de peróxido de
hidrógeno. Observar la aparición de
burbujas lo que indica la presencia de la
enzima catalasa producto de la
liberación de oxígeno. Todas las
especies son catalasas positivos.
MODO DE TRANSMISIÓN
S. aureus se transmite por contacto persona a
persona, por fomites, y por intervenciones
invasivas.
Los alimentos se contaminan por malas prácticas
de manipulación, donde el almacenamiento
inadecuado de los alimentos permite la producción
de enterotoxina previo a su ingesta.
aureus resistentes a todas las penicilinas
disponibles y otros antibióticos betalactámicos.
PREVENCIÓN Y CONTROL
Lavado de manos, uso de guantes y mascarilla,
limpieza y desinfección de utensilios de cocina,
tratamiento de las lesiones infectadas. Evaluar los
puntos críticos de control en la preparación de
alimentos. Evaluación médica de lesiones de
portadores, aislamiento de los focos de infección
hospitalario, profilaxis antimicrobiana en
intervenciones quirúrgicas invasivas.
Pasteurización de la leche y derivados.

PATOLOGÍA Y EPIDEMIOLOGÍA
Las lesiones cutáneas son puertas de ingreso de S.
aureus. Los enfermos con heridas extensas,
quemaduras, intervención quirúrgica
contaminadas y los inmunodeprimidos son
susceptibles a la infección. Los determinantes de
patogenicidad de S. aureus son los componentes
de la pared celular (peptidoglucano, ácidos
teicoicos, factor de agragación), presencia de
enzimas (coagulasa, estafilocinasas,
hialorudinasa, betalactamasas, lipasas) y toxinas
(hemolisinas,leucocidinas, toxina exfoliativa,
toxina del síndrome del shock toxico y
enterotoxinas). S. aureus ocasiona proceso
supurados y procesos tóxicos.
La ingesta de la enterotoxina preformada en los
alimentos estimula el vómito en proyectil (vía
vagal) y acción tóxica sobre la mucosa gástrica
ocasionando naúseas, vómitos, diarrea y dolor
abdominal. S. aureus coloniza aproximadamente
al 30% de las personas, localizándose en la naríz y
nasofaringe. Ocasiona infecciones
intrahospitalarias. La aparición de cepas
resistentes a Meticilina hacen a Staphylococcus
 MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

VI. PREGUNTAS DE APLICACIÓN 4. ¿Qué pruebas alternativas hay para la prueba

de coagulasa?
1. ¿Cuál es el medio selectivo para
Staphylococcus? ………………………………..…………………
…………….…………………..……………….
………………………………..…………………
………………………………...……………….
5. ¿Que se tiene que tener presente cuando uno
evalúa la prueba de coagulasa?
2. ¿Cuál es el indicador de pH que tiene éste
medio? ………………………..…………………………
………………………………..…………..……
………………………………..…………………
………………………………...……………….
VII. BIBLIOGRAFÍA
1. KONEMAN, E. W.; ALLEN, S.D.
3. ¿Qué carbohidrato contiene este medio? 2008,"Diagnostico Microbiológico", 6ta.
Edición, Editorial Médica, Mc Graw Hill.
………………………………..………………… Interamericana. España, 533 págs.
………………………………..….…………….

PROTOCOLO
AISLAMIENTO

MEDIO DE COLONIAS
CULTIVO Tamaño Forma Pigmento Hemólisis Gram

Agar Sangre

TIPIFICACIÓN

Cepa Manitol Coagulasa Catalasa DNAasa Novobiocina

S. aureus

S. epidermidis

S. saprophyticus

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FECHA DE REVISIÓN FIRMA DEL DOCENTE
 MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

Fuente: Koneman Diagnóstico Microbiológico.

Norma Fariñay colb. Staphylococcus coagulasa-negativa clínicamente significativos. Especies más

frecuentes y factores de virulencia

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 IDENTIFICACIÓN DE Staphylococcus

MICROSCOPÍA S. epidermidis y S.aureus en AN S. epidermidis en AS

Staphylococcus

S. aureus en AS S. aureus y S. epidermidis S. aureus y S. epidermidis

Agar Hipertónico de Chapman Agar Hipertónico de
Chapman

S. aureus – Caldo Plasma DNA TEST- S. aurues S. aureus – Catalasa