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Materia:
Bacteriología II
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Índice
Objetivos .................................................................................................................................................... 3
Introducción .............................................................................................................................................. 3
Metodología ............................................................................................................................................... 6
Resultados ................................................................................................................................................ 12
Discusión .................................................................................................................................................. 22
Conclusión ............................................................................................................................................... 23
Cuestionario ............................................................................................................................................ 24
Referencias .............................................................................................................................................. 27
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Objetivos
• Realizar la toma correcta de muestra conocida como exudado faríngeo.
• Observar la morfología macroscópica de las colonias sospechosas en diferentes
muestras en medios de cultivos usados para su aislamiento.
• Observar la morfología microscópica mediante la tinción de Gram.
• Realizar las pruebas bioquímicas útiles para la identificación de género y especie de los
microorganismos en estudio.
• Elegir los medios de cultivo adecuados para asegurar el crecimiento del agente
patógeno.
• Aprender los diferentes métodos de siembra en placa de acuerdo al medio de cultivo.
• Lograr un correcto aislamiento de las colonias en el medio de cultivo para obtener
cultivos puros de microorganismos.
• Identificar a los microorganismos presentes en un exudado de herida dependiendo la
zona afectada.
Introducción
Los exudados se producen como resultado de un aumento en la permeabilidad capilar debido
a la liberación de sustancias inflamatorias, como citocinas y quimiocinas, en el sitio de la
lesión. Las causas más comunes de exudados son las infecciones, las neoplasias y los
procesos inflamatorios. Estos son líquidos turbios que contienen fibrina, lo que indica la
presencia de una respuesta inflamatoria (Vargas, 2023). Por lo tanto, en un exudado faríngeo
habrá una acumulación de liquido o secreción en la faringe resultado de una infección o algún
proceso inflamatorio en la garganta.
En esta practica se llevo a cabo una toma de muestra de exudado faríngeo para poder
identificar las causas, es decir, el microorganismo o agente causante de una infección en las
vías respiratorias, tomando como muestra esa secreción producida en el área afectada.
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Figura 1.
Flora habitual y patógenos respiratorios
El conocer la flora habitual del lugar en donde se tomará la muestra es importante para
descartar algún microorganismo presente en ella ya que puede ser que este no sea el agente
etiológico de la enfermedad por lo tanto también se tendrá que comparar con el cuadro clínico
del paciente.
Los requisitos que debe tener en cuenta el paciente para que se pueda realizar esta prueba en
el laboratorio son los siguientes:
El exudado faríngeo debe realizarse tan pronto como sea posible tras la aparición de los
síntomas y antes de instaurar la terapia antibiótica. La muestra se debe obtener con hisopos
de Dacrón o alginato cálcico; con la ayuda de un depresor se inmoviliza la lengua, y se realiza
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la toma del área amigdalar y faringe posterior, así como de cualquier zona inflamada o
ulcerada. Es fundamental evitar rozar la torunda con la úvula, la mucosa bucal, los labios o
con la lengua, tanto antes como después de la toma. La torunda se introducirá en un tubo con
medio de transporte tipo Amies-Stuart (Batista et al., 2006).
✓ Exudado de herida
Así también, en esta practica se tomo una muestra de exudado de herida para identificar a
aquellos microorganismos que están causando una infección en el tejido lastimado.
Las heridas sean de la etiología que sean pueden presentar un nivel más o menos elevado de
exudados, dependiendo en la fase de cicatrización o complicaciones que puedan tener a nivel
local como puede ser el nivel de colonización polimicrobiana. El cultivo de las secreciones
de heridas es un análisis que permite detectar gérmenes, como bacterias, hongos o virus, en
una herida abierta o en un absceso (Palomar et al., 2021).
• Tomar el medio Stuart para inocular con el hisopo en la placa de interés, depositando el
inoculo a 1 cm de la pared de la placa del tamaño de una huella dactilar.
• Con el asa bacteriológica esterilizada hacer la primera estría subiendo y bajando
rápidamente el inoculo, parar antes de llegar a la mitad de la placa
• Girar la placa a 45°, esterilizar el asa, enfriar por aireación y realizar la segunda estría.
• Girar la placa a 45°, esterilizar el asa, enfriar por aireación y realizar la tercera estría.
• Girar la placa a 45°, esterilizar el asa, enfriar por aireación y realizar la última estría,
esta será más amplia y abierta sin tocar ningún grupo de estrías que ya esté hecha.
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Figura 3. Figura 4.
Depositar inoculo en la placa. Estría cruzada
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Nota: Tomada de (Blogspot, 2012)
• Tomar el medio Stuart para inocular con el hisopo en la placa de interés, depositando el
inoculo a 1 cm de la pared de la placa del tamaño de una huella dactilar.
• Con el asa bacteriológica esterilizada trazar una línea a lo largo del diámetro de la placa.
• Posteriormente realizar una estría de arriba hacia abajo en toda la caja con distancias
equidistantes.
Figura 5.
Estría de un solo trazo
4. Incubar
• Los medios de cultivo como McConkey, chocolate, sal y manitol, sangre y EMB se
deben incubar en la estufa bacteriológica a una temperatura de 37° C durante 24 a 48
horas.
• Por otro lado, los medios de cultivo como Biggy y Sabouraud deben incubarse en la
estufa micológica a una temperatura de 28° C durante 3 a 5 días
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5. Observar morfología macroscópica
Pasado el tiempo de incubación se debe observar las colonias que crecieron en cada medio
para así elegir la colonia sospechosa a la cual se le hará la morfología macroscópica.
Figura 6
Tabla de morfología macroscópica
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i) Observar al microscopio con objetivos de 40X y 100X.
Nota: Tomada de (López, 2013) Nota: Tomada de (López, 2013) Nota: Tomada de (López, 2013)
Figura 10.
Aplicación de Lugol Figura 11. Figura 12.
Lavado de la preparación Lavado de la preparación
Nota: Tomada de (López, 2013) Nota: Tomada de (López, 2013) Nota: Tomada de (López, 2013)
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También se debe hacer un examen en fresco de la colonia sospechosa:
• Limpiar los portaobjetos para eliminar restos de suciedad y grasa.
• Colocar una pequeña gota de solución salina fisiológica en el portaobjetos.
• Tocar una parte de la colonia sospechosa y homogenizar con la solución salina puesta
en el portaobjetos haciendo una espiral desde dentro hacia afuera.
• Colocar un portaobjetos.
• Observar al microscopio con el objetivo de 40X.
Figura 15.
Examen en fresco
Una vez identificada la colonia sospechosa también es necesario realizar pruebas bioquímicas
para poder determinar la especie a la que pertenece el agente causal de la infección del tracto
urinario. La batería utilizada en esta ocasión fue:
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• SIM: sembrar por picadura
• Urea: sembrar por agitación
NOTA: Hay que esterilizar el asa antes de sembrar en cada prueba bioquímica.
Figura 16.
Siembra en pruebas bioquímicas
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Resultados
Tabla 1
Exudado faríngeo, Daniela Chandomi
Agar sangre
Morfología macroscópica
Tamaño Puntiforme Figura 17.
Agar sangre
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Convexa
Superficie Lisa
Color Blanca grisácea
Propiedad óptica Opaca
Consistencia. Mucoide
Otras Se observa una alfa
hemolisis en el medio
Morfología microscópica
Figura 18.
Tinción gram de la colonia sospechosa
Pruebas bioquímicas
Figura 19.
Producción de
burbujas
Catalasa Positivo
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Figura 20.
Formación de un coagulo
Coagulosa Negativa
Tabla 3
Exudado faríngeo, Daniela Chandomi
Agar EMB
Morfología macroscópica
Tamaño Puntiforme Figura 21.
Agar EMB
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Elevada
Superficie Lisa
Color No pigmentada
Propiedad óptica Opaca
Consistencia. Suave
Otras
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Tabla 3
Exudado faríngeo, Olaf Alegría
Pruebas bioquímicas
Figura 24
Producción de
burbujas
Catalasa Positivo
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Tabla 4
Exudado faríngeo, Olaf Alegría
Agar McConkey
Morfología macroscópica
Tamaño --- Figura 25.
No hubo crecimiento en agar McConkey
Forma ---
Borde ---
Elevación ---
Superficie ---
Color ---
Propiedad óptica ---
Consistencia. ---
Otras
Tabla 5
Exudado faríngeo, Sofia Farrera
Agar chocolate
Morfología macroscópica
Tamaño ---
Figura 26
Forma --- Crecimiento excesivo
Borde ---
Elevación ---
Superficie ---
Color ---
Propiedad óptica ---
Consistencia. ---
Otras
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Tabla 6
Exudado faríngeo, Sofia Farrera
Agar Biggy
Morfología macroscópica
Tamaño Puntiforme Figura 27
Crecimiento en agar Biggy
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Elevada
Superficie Lisa
Color Blancas
Propiedad óptica Brillantes
Consistencia. Suave
Otras
Morfología microscópica
Figura 28
Tinción gram de la colonia sospechosa
No se logra apreciar
Tinción de Gram ninguna forma,
agrupación y
coloración
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Tabla 7
Exudado de herida, Martha Gómez
Agar sangre
Morfología macroscópica
Tamaño Grande Figura 29
Crecimiento de Pseudomonas aeruginosa
Forma Filamentosa
Borde Irregular
Elevación Plana
Superficie Lisa
Color Gris verdoso con
ligero brillo
Propiedad óptica Opaca
Consistencia. Suave
Otras Se detecta un ligero
olor a masa de tortilla
Morfología microscópica
Figura 30
Tinción de gram de la colonia sospechosa
Bacilos gram
Tinción de Gram negativos
Pruebas bioquímicas
Figura 31
Producción de
burbujas
Catalasa Positivo
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Tabla 8
Exudado de herida, Martha Gómez
Agar Sabouraud
Morfología macroscópica
Tamaño Pequeña Figura 32
Estría de un solo trazo
Forma Circular
Borde Entero
Elevación Plana
Superficie Lisa
Color Amarillo claro
Propiedad óptica Brillantes
Consistencia. Suave
Otras
Morfología microscópica
Figura 33
Examen en fresco de la colonia sospechosa
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Tabla 8
Exudado de herida, Ingrid Pérez
Figura 35
Tinción de gram de la colonia sospechosa
Pruebas bioquímicas
+Positivo: fermenta
Figura 36
glucosa, sacarosa y Siembra por estría simple
lactosa.
TSI +No produce ácido
sulfhídrico
+No produce gas
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Figura 37
Siembra por estría simple
+Positivo: fermenta
dos tipos de azúcares
+Producción de gas
Kligger +No produce ácido
sulfhídrico
Figura 38
Siembra por estría simple
Negativo: a lisina
descarboxilasa o
LIA desaminación
Figura 39
Siembra por estría simple
Negativo, no hubo
Citrato de Simmon cambio de color
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Figura 40
Siembra por punción
Figura 41
+Negativo a Siembra por punción
producción de ácido
sulfhídrico
SIM +Indol negativo
+Móvilmente posible
Figura 42
Siembra por agitación
UREA +Negativo
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Discusión
De acuerdo a las imágenes presentadas en cada una de las tablas de resultados, la técnica de
siembra no fue la correcta debido a que no se logro un buen aislamiento de las colonias y
afecto el identificar a la colonia sospechosa, además de que el no realizar bien el arrastre de
las bacterias en cada estría evito la proliferación de mas colonias de las que posiblemente
pudieron haber sido las indicadas para realizar las demás pruebas complementarias para su
posterior identificación.
La técnica utilizada en la prueba tanto de exudado faríngeo como el exudado de herida fue la
de aislamiento por agotamiento por estría, el cual se trata de un método simple y rápido de
agotamiento progresivo y continuo del inoculo sobre un medio sólido, generalmente
contenido en una placa de Petri. El objeto es obtener a partir de un elevado numero de
bacterias, un numero reducido de ellas distribuidas individualmente a lo largo de la superficie
de la placa. Al incubar esta, cada una de las bacterias originará una colonia, las colonias
individuales constituyen cada una un cultivo puro (Sanz, 2011). En el caso de algunos
compañeros no sucedió de esa manera ya que las colonias estaban muy próximas entre sí,
además de que el crecimiento ocurrió entre la primera y segunda estría, donde se concentra
mucho mas el numero de bacterias y no se encuentra todavía algún cultivo puro.
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observo bacilos gram negativos. Al realizar las pruebas bioquímicas con el fin de obtener
mayor información sobre la bacteria, dio resultados positivos a ciertas pruebas en las que las
especies de Staphylococcus dan negativo. Es por esto que se recomienda realizar las técnicas
correspondientes y de la mejor manera para obtener resultados fiables.
Conclusión
De acuerdo a lo mencionado anteriormente, se concluye que para obtener un diagnostico
microbiológico correcto es necesario seguir la metodología y las técnicas adecuadas para el
aislamiento e identificación de los microorganismos de interés, los cuales en este caso eran
aquellos que se encontraban en las vías respiratorias superiores e inferiores con el fin de
brindar un tratamiento oportuno y eficaz. En relación con la muestra obtenida de un exudado
de herida se sospecha la presencia de algún microorganismo perteneciente a la familia
Enterobacteriacea debido a que dio positivo a varias pruebas bioquímicas por lo tanto se
recomienda obtener una muestra nueva y sembrar en medios selectivos para los
microorganismos que posiblemente se encuentren en la zona infectada para así obtener un
resultado sin falsos positivos o negativos.
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Cuestionario
1. Mencione a los virus y bacterias que ocasionan rinofaringoamigdalitis.
(Font, 2001)
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(i) Se toma la caja de Petri en la palma de la mano y ligeramente inclinada; con la
mano contraria, se manipula el asa de argolla previamente esterilizada y con ella
se recoge el material de cultivo, para colocarlo en un área periférica de la caja
haciendo movimientos circulares para homogeneizar el inóculo.
(ii) El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada cerca del mechero; a
continuación, se realiza una estría partiendo de la primera y arrastrando los
microorganismos presentes en ella hacia el extremo contrario de la superficie del
agar. Se debe procurar que, en cada sección de la caja, las estrías queden trazadas
con mayor separación.
(iii) Repita el paso ii, por tres veces (algunos autores reportan solo dos), recordando
flamear y enfriar el asa cada vez que culmine una estría y solo tocar con el asa la
estría inmediatamente anterior, con el objetivo de ir reduciendo la carga
microbiana arrastrada por la argolla.
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Para tomar una muestra de Haemophilus influenzae, se puede recolectar una muestra de
esputo, aspirado traqueal, líquido cefalorraquídeo, sangre o un hisopo nasofaríngeo
(IPN,2022).
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Referencias
Batista Díaz, N., Bordes Benítez, A., Leucuona Fernández, M. & Lara Pérez, M. (2006).
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del tracto respiratorio superior.
SEIMC.
https://kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/89629/Exudados%20y%20trasudado
s%20en%20el%20laboratorio%20cl%C3%ADnico.pdf?sequence=1&isAllowed=y#
:~:text=Los%20exudados%20se%20caracterizan%20por,presencia%20de%20una%
20respuesta%20inflamatoria.
Cacho Calvo, J B., Meseguer Peinado, M. A., Oliver Palomo, A. & Puig de la Bellacasa, J.
(2007). Diagnóstico microbiológico de las infecciones bacterianas del tracto
respiratorio inferior.
https://seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/se
imc-procedimientomicrobiologia25.pdf
González Meléndez, R. C., Elizalde Cuevas, B., Cortés Cruz, M. E. & Orduña Sánchez, M.
(2020). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología: un enfoque
gráfico. Universidad Nacional Autónoma de México
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Palomar-Llatas F, Zamora-Ortiz J, Palomar-Albert D, Diez-Fornes P, Sierra-Talamantes C,
Pastor-Orduña M.I, Castellano-Rioja E, Company Palonés M, Clausell-Català V,
Segovia-Donoso C, Fornes-Pujalte B. (2021). La gestión del exudado en úlceras y
heridas: familia de apósitos. Enferm Dermatol, 15(43): 9-13. DOI:
10.5281/zenodo.5532842
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