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COCOS GRAM-POSITIVOS

Cepa C

Staphylococcus aureus

FISIOLOGIA MICROBIANA
UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR


FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ASIGNATURA - FISIOLOGA MICROBIANA
DOCENTE-JUAN CARLOS PRADA HERRERA
PROGRAMA MICROBIOLOGA

IDENTIFICACIN DE COCOS GRAM POSITIVOS A TRAVS DE PRUEBAS


BIOQUIMICAS CONVENCIONALES

GRELYS JOHANA TERNERA MEJIA


GINO FRANCHESCO OLIVIERI SALAS
KATHY GRISALES HERNANDEZ
IVONN CAROLINA SIMANCA MEDINA
HERNILDA HOYOS ANGULO
IDEZARETH HERNANDEZ MESTRE

VALLEDUPAR CESAR
2015

INTRODUCCIN

Los cocos Gram positivos son microorganismos que se aslan con ms frecuencia
en muestras de pacientes y se han involucrado como agentes importantes en
enfermedades infecciosas, estos microorganismos se encuentran ampliamente
distribuidos en la naturaleza y algunos hacen parte de la microbiota normal de la
piel y mucosas del hombre y de animales. Es de vital importancia identificarlos
puesto que de ello depende que se lleve a cabo un buen diagnstico y
procedimiento cuando se est frente a este tipo de patgenos.

OBJETIVOS

Estudiar las caractersticas macroscpicas, microscpicas y cambios


producidos por el microorganismo en los diferentes medios utilizados.
Conocer algunas de las pruebas bioqumicas de laboratorio utilizadas para la
identificacin de especies de cocos Gram-positivos.
Identificar gnero y especie de una cepa bacteriana que es totalmente
desconocida antes de aplicar las pruebas.

MARCO TERICO

En microbiologa, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que


se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de aqu el nombre de
"Gram-positivas" o tambin "Gram positivas". Esta caracterstica Qumica est
ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo
natural de organizacin bacteriana. Son uno de los principales grupos
de bacterias, y cuando se tratan como taxn se utiliza tambin el nombre de pos
bacteria. Las restantes son las bacterias Gram negativas. La envoltura celular de
las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmtica y una pared
celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior.
La pared celular se une a la membrana citoplasmtica mediante molculas
de cido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a
estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tincin de Gram.
A diferencia de las Gram-positivas, las Gram-negativas presentan una segunda
membrana lipdica externa a la pared celular. Incluyen especies tanto mviles con
va flagelos como inmviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium,
Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus);
con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies
son fotosintticas, pero la mayora son hetertrofas. Muchas de estas bacterias
forman endosporas en condiciones desfavorables.4 Realmente, no todas las
bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tien por la aplicacin de ese
mtodo), pero se incluyen aqu por su similitud molecular con otras bacterias
Gram-positivas. (Koneman, 2006).
Los cocos Gram positivos son microorganismos unicelulares, caracterizados por
presentar una forma esfrica, en la que algunas de sus especies se agrupan en
diferentes patrones, de manera que son clasificados por su forma
en diplococos, los cuales son cocos asociados en parejas como el Streptococcus
Pneumoniae o neumococo; los tetracocos, ttradas o tetrgenos son cuatro
micrococos dispuestos a manera de cuadro; la sarcina que adopta formaciones en
paquete de ocho o ms micrococos.
A su vez, los Staphylococcus se presentan en esferas que forman racimos de
uvas como el Staphylococcus aureus; y por ltimo los Streptococcus formados por
esferas dispuestas en cadena, resultado de su divisin a lo largo de un eje, lo que
lo diferencia del Staphylococcus que se divide en varios ejes formando racimos.
Los Staphylococcus son microorganismos que presentan una colonizacin
transitoria en el individuo como sucede con el S. aureus presente en la humedad
de los pliegues de la piel, la orofaringe, tracto gastrointestinal, adems del
urogenital, siendo considerado el causante de ciertas patologas a travs de sus
toxinas o invasin directa lo que produce destruccin de los tejidos.

De la misma manera los Streptococcus presentan especies patgenas para el


organismo humano, mientras que otros forman parte de la microbiota normal de la
piel y las mucosas en individuos inmunocompetentes, siendo estos ltimos
oportunistas en situaciones que presenten factores predisponentes como sucede
con el estrs o enfermedades consuntivas. A su vez se encuentran
los Enterococcus que son considerados, patgenos oportunistas, presentes en la
microbiota normal del tracto gastrointestinal y son causantes de infecciones en
heridas quirrgicas, infecciones urinarias, adems de abscesos intrabdominales.
Por sus parte y de acuerdo a los requerimientos atmosfricos se pueden clasificar
en: aerobios y anaerobios facultativos, representados por la familia
de Micrococacceae que
comprende
a
los Staphylococcus,
Micrococcus,
Stomacoccus y Planococcus, adems de los gneros Streptococcus y
Enterococcus; existiendo adema los anaerobios estrictos, representados por
los Peptococcus y Peptoestreptococcus. (Evangelina Olivas).

http://www.microbeworld.org/component/jlibrary/?view=article&task=download&id=7611

MATERIALES

Cepa bacteriana.
Microscopio.
Agar Manitol al 7%
Agar nutritivo.
Agar sangre.
Agar DNasa.
Agar Mueller Hinton.
Tubo con EDTA 0.5
Caldo nitrato.
Fosfatasa Alcalina.
Oxidasa.
Novobiocina discos.
Escala de Macfarlan
Glucosa 5ml 0.5 al 1%
Maltosa 5ml 0.5 al 1%
Sacarosa 5ml 0.5 al 1%
Manitol 5ml 0.5 al 1%
Manosa 5ml 0.5 al 1%
Tubos estriles centrifuga
Alcohol
Algodn
Asas para siembra
Mechero
Fsforos
Gradilla
Reactivos para la tincin de Gram
Lminas
Cinta para rotular

PROCEDIMIENTO

Se toma una cepa bacteriana como parte del anlisis cuya finalidad es lograr
identificar que microorganismo est presente a travs del uso de una serie de
pruebas bioqumicas convencionales. La presente tcnica es para la deteccin de
Staphylococcus y ms que todo la especie aureus, la cual consiste en los
siguientes pasos:

Aislamiento selectivo, se utiliza un medio selectivo slido, el cual inhibe el


desarrollo de gneros diferentes al Staphylococcus, pero adems permite
reconocer el desarrollo caracterstico del microorganismo buscado.
Recuperacin de la cepa, este paso permite restaurar las clulas daadas
de Staphylococcus aureus.
Identificacin bioqumica, en este punto se identifica el gnero y especie
de Staphylococcus aureus. Estas pruebas bioqumicas (de acuerdo a la
Norma Oficial) son: presencia de la enzima coagulasa, catalasa y
presencia de la enzima termonucleasa.

La caracterizacin bioqumica de Staphylococcus aureus se obtiene a travs de


pruebas convencionales siguiendo estos pasos:
Se ingres al laboratorio de microbiologa manteniendo las normas de
bioseguridad.
Se procedi a escuchar una breve introduccin de lo que ser la prctica a
realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).
Escuchar con atencin las pautas, recomendaciones y normas para realizar
la prctica (indicaciones) por parte del profesor.
Observar con detenimiento y anotar todos los pasos realizados por el
docente al realizar una demostracin rpida de lo que ser la prctica a
realizar (pruebas bioqumicas de identificacin).
Preparar el rtulo respectivo para las placas asignada (1 por grupo) (Fecha,
agar, tcnica, muestra, T, nombre, grupo).
Se realiz la identificacin de la morfologa colonial de la cepa tal y como
se percibe y se pudo observar que las colonias eran mediadas
blanquecinas, con una forma redonda u ovalada.
Luego se realiz la tincin de Gram con los respectivos reactivos y
respetando el tiempo para cada uno.
Se observ en el microscopio y se hizo una posible identificacin puesto
que se encontraron cocos en racimos de color morado.
Se tomaron fotografas y se anotaron los resultados.

Se procedi a inocular y a sembrar el microorganismo en las diferentes


pruebas bioqumicas y agares e incubar a 37C y as determinar el nombre
del microorganismo teniendo en cuenta los resultados al revelar.

Siembra en Agar Nutritivo

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa redonda, previamente flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulado en donde se encuentra el


Agar Nutritivo.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Presencia de catalasa

Se toma un portaobjetos nuevo

Con un asa se tom una colonia y se deposit en un portaobjetos

Luego se aadi una gota de perxido de hidrgeno al 30%

Y se observ la formacin de burbujas (resultado positivo)

Presencia de Coagulasa

Se mezcl con un asa cargada con el microorganismo obtenido de un


cultivo en medio slido,

Se agreg en 0,5 ml de plasma de humano, contenido en un tubo pequeo


de aproximadamente 7 mm de dimetro.

Se Incubo a 37C y se examin peridicamente durante 4 horas.

Siembra en agar BHI

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de , previamente flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulada en donde se encuentra el


Agar BHI.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Presencia de DNasa

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de aro, previamente
flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulada en donde se encuentra el


Agar DNasa.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Presencia de sensibilidad por Novobiocina en agar Mller Hinton

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de aro, previamente
flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulada en donde se encuentra el


Agar Mller Hinton.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Se agregan 3 sencidisco de novobiocina con una pinsa esteril

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Presencia de Hemolisis

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de aro, previamente
flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulada en donde se encuentra el


Agar Sangre.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Crecimiento en Manitol Salado

Se tom de la placa con el medio de cultivo una muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de aro, previamente
flameada.

Luego en la placa con tapa previamente rotulada en donde se encuentra el


Agar Manitol Salado.

Luego sembramos con el asa utilizando el metodo de siembra por


Agotamiento.

Cerramos hermticamente despus de sembrar y se coloc en la


incubadora a 37 durante 24 horas.

Fermentacin de Manitol, Sacarosa, Maltosa y Glucosa

Se tomaron de la placa con el medio de cultivo dos muestra del


microorganismo con el asa de platino en forma de punta, previamente
flameada.

Se tomaron los tubos de ensayo con tapa previamente rotulado en donde se


encuentran las azucares con rojo de metilo y campana de durhan: (Manitol,
Sacarosa, Maltosa y Glucosa).

Luego se flamearon los tubos al abrir y se sembr con el asa utilizando el


metodo de siembra por resuspensin.

Se Cerr despus de sembrar y se coloc en una gradilla y en la incubadora a


37 durante 24 horas.

RESULTADOS

CEPA BACTERIANA

CEPA OBSERVADA AL MICROSCOPIO

REACCIN CATALASA

AGAR SANGRE DESPUS DE 24 HORAS

AGAR SANGRE DESPUS DE 72 HORAS

PRUEBAS FERMENTACION DE AZUCARES A 24 HORAS

A 48 HORAS
MANOSA

PRUEBA NITRATO

GLUCOSA

MALTOSA

PRUEBA UREA

SACAROSA

PRUEBA COAGULASA

AGAR DNasa

AGAR BAIRD PARKER

AGAR MUELLER HINTON CON SENCIDISCOS DE NOVOBIOCINA

ANALISIS DE RESULTADOS
PRUEBA

RESULTADO

TINCION DE GRAM
til para la identificacin de la
morfologa microscpica de la
especie bacteriana.

GRAM-POSITIVO: Cocos
agrupados en racimos

CATALASA
Identificar si el microorganismo
posee la enzima catalasa.
til para la diferenciacin de
microorganismos del genero
Staphylococcus y
Streptococcus
HEMOLISIS
Detecta la presencia
de hemolisina, enzima que
permite la clasificacin de
cocos en alfa, beta y
gamma hemolticos.
MANITOL- SALADO
Medio de cultivo selectivo y
diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.

POSITIVO: El
microorganismo posee la
enzima catalasa y la
utiliza para desdoblar el
perxido de hidrogeno
en agua y oxigeno.

POSIBLE
MICROORGANISMO
S. epidermidis, S. aureus
S. saprophyticus, S.
pyogenes, S. agalactiae,
S. pneumoniae, entre
otros.
Staphylococcus
epidermidis,
Staphylococcus aureus
Staphylococcus
saprophyticus

BETA HEMOLITICO:
hemolisis total o un halo
grueso alrededor de la
colonia.

Streptococcus pyogenes,
Streptococcus agalectiae,
Staphylococcus aureus.

POSITIVO: acidificacin
del medio, el
microorganismo es capaz
de crecer en altas
concentraciones de sal.

S. aureus y algunas cepas


de S. saprophyticus

COAGULASA
Enzima que estimula la
conversin de fibringeno en
fibrina, comprueba la capacidad
de un microrganismo de
coagular el plasma por accin
de esta enzima.
SENSIBILIDAD A LA
NOVOBIOCINA
Antibiotico que en agar Mueller
-Hilton inhibe el crecimiento de
algunos Staphylococcus.

POSITIVO: El
microorganismo es capaz
de coagular plasma a
travs de la enzima
coagulasa.

S. aureus

SENSIBLE: El
microorganismo no
muestra resistencia ante
el antibitico.

S. aureus y S.
saprophyticus

FERMENTACION DE
AZUCARES (Glucosa,
Maltosa, Sacarosa, Manitol)
til para observar la capacidad

POSITIVO para todos los


azucares con formacin
de gas en la campana de
Durham

S. aureus

del microorganismo de
fermentar estos azucares con
produccin de gas en la
campana de Durham
BAIRD PARKER
Medio de alta especificidad
diagnstica, selectivo y
diferencial para el aislamiento y
recuento de estafilococos en
alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria.
DNasa
Determina la capacidad del
microorganismo para desdoblar
el ADN en sus nucletidos a
partir de la enzima DNasa.

Colonias negras brillantes


debido a la reduccin del
telurito a telurio.

El resultado fue variable


puesto
que
el
microorganismo
creci,
pero al momento de
revelarlo dio negativo y
esto se debe a que el
medio estaba vencido.

S. aureus y S. epidermidis

S. aureus

De acuerdo a lo anteriormente descrito podemos deducir que la cepa C que nos


fue entregada corresponde a Staphylococcus aureus ya que responde de
manera positiva a las pruebas catalasa, coagulasa y DNasa, adems fermenta los
azucares en su totalidad, caractersticas propias de esta especie. Cabe resaltar
que las dems pruebas fueron realizadas con el fin de tener un mayor
conocimiento en la diferenciacin de este gnero y aportar un reporte completo en
la presentacin de los resultados.

CONCLUSIN

En algunas infecciones graves es importarte determinar el patgeno o agente


infectante y para eso es necesario tener conocimiento de que pruebas son tiles
para la identificacin de dicho agente. En el caso de Staphylococcus aureus puede
encontrarse infecciones en casi todos los sitios anatmicos siendo ms frecuentes
en lesiones de la piel y partes blandas, esto obliga a realizar un diagnostico previo
para luego tratar la infeccin.

BIBLIOGRAFIAS

http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?pid=S230437682014001000004&script=sci_arttext
10/06/15
11:39am
Elmer W. Koneman, Stephen Allen. Diagnostico Microbiolgico. Capitulo 40
pg. 39. Editorial Mdica panamericana. Ao 2006. Argentina, Espaa,
Mxico, Venezuela.
Evangelina Olivas, Manual de prcticas de Microbiologa I, II y
parasitologa. Prctica 6. Pg. 25. Editorial Mdica panamericana. Ao
2004. Mxico.