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Métodos y Técnicas de Estudio Microbiológico I r.a.c.j.

GUÍA PRACTICA N° 8
CULTIVOS
INCUBACIÓN ANAEROBIA Y AEROBIA

INTRODUCCIÓN

“Mediante los medios de cultivo se pretende aislar e identificar los microorganismos”, se


clasifican en: i) Medios simples (caldo nutritivo y agar nutritivo); ii) Medios enriquecidos
(agar sangre y agar chocolate); iii) Medios selectivos (agar Mac Conkey, agar hipertónico
de Chapman); iv) Medios de transporte (el medio de Stuart) y Medios diferenciales. Los
medios de cultivo se agrupan de acuerdo a su estado físico básicamente en Medio líquido y
Medio sólido. Las bacterias requieren de medios de cultivo que contengan sustancias nutritivas
parecidas en lo posible al medio natural en el que viven y se reproducen. Los medios de cultivo
contienen sustancias nutritivas: i) Compuestos orgánicos nitrogenados; ii) Compuestos
inorgánicos; iii) Sustancias energéticas, etc.
La esterilización es un proceso básico en la preparación o elaboración de medios de cultivo, por
ello se debe tener un control estricto de la temperatura, tiempo de duración (calentar hasta
ebullición y por un tiempo prolongada destruye las sustancias nutritivas).
Inoculación: Consiste en sembrar o infundir con material sospechoso (germen o virus), en un
medio de cultivo; objeto de estudio o investigación.
Incubación: Proceso mediante el cual se colocan los cultivos a 35°C por 12 a 24 horas.
OBJETIVO GENERAL
1. Elaborar un medio de cultivo o preparar un medio de cultivo compuesto por un agar común
en el laboratorio de microbiología.
2. Realizar siembras en los medios de cultivos comunes, aplicando las técnicas apropiadas para
realizar diagnostico microbiológico según orden o solicitud de examen médico.
FUNDAMENTO GENERAL
En el diagnostico microbiológico directo de las muestras para cultivo, el sembrado es en medios
seleccionados, seguidamente se incuban, luego los cultivos son examinados y a continuación
los microorganismos son identificados a través de diferentes Técnicas:
1. TINCION: Tinción con azul de metileno, fucsina, Gram, Ziehl-Neelsen, Giemsa; para
realizar una tinción de Gram, los técnicos fijan la muestra con calor a un portaobjeto y lo
tiñen mediante la exposición secuencial al colorante de cristal violeta, yodo, decolorante y
un colorante de fondo o contraste por lo general la safranina.
2. MEDIO DE CULTIVO: Son sólidos (muy utilizado en el laboratorio de microbiología) o
líquidos. El agente solidificante más utilizado es el agar (químicamente inerte). Medios que
se agrupan para facilitar su utilización: i) Medios de transporte (Medio de Stuart, Medio de
Cary y Blair para transporte de muestras fecales); ii) Medios enriquecidos (Agar
chocolate=crecimiento de Haemophilus, medio de loeffler=Cultivo de Corinebacterias); iii)
BD MacConkey II Agar, medio de diferenciación selectivo para aislamiento y diferenciación

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de Enterobacteriaceae y otros diversos bacilos Gram negativos a partir de muestras clínicas.


Medio tioglicolato y un hidrolizado de caseína, dextrosa y cistina=Clostridium; Lowenstein-
Jensen=Tuberculosis, causada por la bacteria Mycobacterium tuberculosis; Tos convulsiva,
coqueluche=Bordetella pertussis, Agar nutritivo o caldo nutritivo (CN), Agar Mueller-
Hinton (MH), Agar sangre (AS); Medio Ruiz Castañeda=Hemocultivo, Agar Salmonella
Shigella (SSA), Medio Triple Sugar Iron (TSI), Medio de Lisina Iron Agar (LIA). Manitol
Sal Agar, medio Hipertonico Chapman.
Cultivo Agar sangre, Agar chocolate CO2, estafilococos, medio Chapman, caso tosferina
(tos convulsa o pertussis) enfermedad muy contagiosa causada por la bacteria Bordetella
pertussis. Difteria, Corynebacterium diphtheriae (bacilo de Klebs-Löffler). Los cultivos
Agar sangre, Agar chocolate, Agar MacConkey se utilizan en forma general.
El meningococo es una enfermedad grave, causada por la bacteria Neisseria meningitidis.
que causa meningitis (infección del revestimiento del cerebro, médula espinal) y bacteriemia
o septicemia (infecciones de la sangre); se usa el medio Agar Thayer Martin, en procesos
agudos basta una sola muestra, si es crónico una muestra múltiple puede ser de 12 a 24 horas.
MATERIALES DE USO DE UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Materiales de uso práctico: Vasos pírex, Matraces aforados, canastillas, etc.; Tubos de ensayo
(15 x 160, 13 x 100, 10 x 70); placas de Petri, balones, probetas, kitasatos, Erlenmeyer, Beakers
(vasos de precipitación), pipetas de ml (10, 5, 2, 1, 0.2, 0.1); embudos, frascos goteros de 60
ml. (blanco y ámbar); laminas portaobjetos, laminillas cubreobjetos, tubos de centrifuga,
gradillas de metal engomadas, mortero, cajas metálicas para esterilizar, mangos de kolle, asas
de micrón, copas de vidrio (cónicas), coladores de metal, fosforo. Medios de cultivo (mirar
atlas); Asas de micrón; Mechero de bunsen (la llama es la producida por la combustión de gas
propano o butano con el oxígeno del aire); Pipetas de pistón, dispensadores, diluidores,
analizadores, etc.; Microscopio compuesto, Autoclave, Horno, Centrifuga, Incubadora, Baño
maría, Balanza, Frigidaire, Potenciómetro, Cocina eléctrica, Mechero Bunsen; Otros: algodón,
papel, cinta adhesiva, lápiz; Cestos o Tachos, Otros.

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MUESTRAS PARA PROCESAMIENTO GENERAL:


Es importante conocer la procedencia de la muestra, para escoger el medio de cultivo apropiado
que permita el crecimiento del microorganismo que se necesita estudiar. Las muestras a
utilizarse para el examen en el laboratorio de microbiología deberán recogerse de lugares de
donde sea más probable de encontrar los microrganismos sospechosos y deberán manipularse
asépticamente con el objeto de evitar contaminación con gérmenes normales o ambientales.
Para recoger muestras, analizarlas y luego dar un resultado es necesario reconocer, su
localización, variedades y efectos de la flora bacteriana. Se puede realizar selección y recogida
de especímenes en los siguientes fluidos biológicos: i) Sangre; ii) Líquidos corporales estériles:
LCR; iii) Tejidos; iv) Quirúrgicos (exámenes histopatológicos); para el cultivo de secreciones
de heridas y secreción faríngea.
TOMA DE MUESTRAS CLÍNICAS EN MICROBIOLOGÍA

 Secreciones Faríngeas y Amígdalas: Las secreciones inflamatorias de la garganta, se


recogen en hisopos de algodón esterilizados, la garganta deberá iluminarse bien para que
la muestra se recoja directamente de las zonas inflamadas, las cuales deben limpiarse lo
más profundamente posible para lograr una cantidad suficiente de organismos.
- Toma de muestra con un hisopo estéril: Se abre la boca y sostener la lengua con un baja
lenguas, tomar la muestra de la misma faringe haciendo un raspado y poner en el caldo
que se utiliza como medio de transporte, luego marcar el tubo con el numero respectivo
hasta el momento de procesarla, la cual debe ejecutarse en el mismo día. Cuando llega
la muestra al laboratorio marcar la placa y dos laminas portaobjeto:
- Depositar con el hisopo a la placa y con el mismo hacer el extendido en las láminas la
secreción faríngea debe cultivarse en Agar sangre y Agar chocolate.

 Secreciones Uretrales Vaginales: Las obtenciones de las muestras se efectúan en hisopos o


torundas esterilizados y se deberán introducir inmediatamente el hisopo en caldo nutritivo,
estos nos sirven como medios de transporte o procesarlas inmediatamente en los medios
correspondientes. Para secreciones vaginales y uretrales, usar Agar Thayer Martin=
Neisseria gonorrhoeae.

 Esputo: Secreción Bronquial: El esputo se debe obtenerse de los bronquios (pulmones),


para lo cual se instruirá al paciente que deberá expectorar directamente en frascos
esterilizados de boca ancha, evitando la introducción innecesaria de la saliva y además
deberá recolectarse la muestra con previa higiene bucal. No se recomienda cajas de papel
o de cartón, ni otros envases no esterilizados.

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­ Tomar Muestra con hisopo: Medio de transporte, cultivar dentro de media hora, puede
ser caldo nutritivo o CCC (caldo cerebro corazón), cuando se necesita transportar con
anaerobios (caldo cerebro corazón). Medio tioglicolato, medio de enriquecimiento para
una amplia variedad de microorganismos aerobios y anaerobios estrictos a partir de
diversas muestras. Las especies aerobias desarrollan en la parte superior y las anaerobias
en el fondo del medio de cultivo. Puede funcionar como medio de transporte.
­ Pacientes indicar que se laven la boca para no contaminar con gérmenes. Muestra por
aspirado bronquial, frascos estériles descartables, examen macroscópico (purulenta
sanguinolenta, ver si por negruzco ese punto vira - blanquecino espumoso). Examen
microscópico fresco colocar entre lamina y laminilla suero fisiológico observar hongos
y parásitos. Coloración puede ser Gram o Ziehl-Neelsen.

 Liquido Céfalo Raquídeo: Este líquido deberá ser recogido por el Medico encargado del
caso, por medio de una punción en la columna vertebral. El líquido deberá llevarse tan
prontamente o llevar consigo mismo los medios y materiales necesarios, para procesar
inmediatamente y frotices para coloraciones.

PREPARACIÓN DE AGAR NUTRITIVO


MÉTODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

INTRODUCCIÓN
El agar nutritivo, es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para la identificación
de todo tipo de bacterias. Es muy útil por que permanece sólido incluso a (relativamente) altas
temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo
general se distinguen mejor las colonias pequeñas. Preparado y contenido en una placa Petri, es
claro e incoloro o con tonalidad amarillenta. El tiempo, la temperatura y la atmosfera de
incubación, dependerán del microorganismo. Así, el Agar Nutritivo, es medio de cultivo
utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en
lo que se refiere a requerimientos nutritivos. La preparación y conservación de medios de
cultivo, especialmente para medios de cultivo que no se adquieren listos para su uso deben
prepararse en el laboratorio (siguiendo las indicaciones del fabricante para medios comerciales
deshidratados). Posteriormente se esterilizan, se revisan y se conservan.
OBJETIVOS
1. Preparar el medio de cultivo Agar Nutritivo de uso general para el cultivo de diferentes
especies de bacterias.
2. Explicar el fundamento del medio de cultivo “Agar Nutritivo” en la aplicación de
aislamiento de microorganismos y las condiciones de incubación.
FUNDAMENTO
Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos
nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente
de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite

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el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de


microorganismos exigentes.

 Características del medio: ámbar claro a medio ligeramente opalescente.


 Usos: Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas
y otros materiales de importancia sanitaria.

 Siembra: En superficie: Inocular directamente la muestra por estría.


 En profundidad: Inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un
volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40 – 45°C. Homogenizar mediante
movimientos de vaivén y rotación. Dejar solidificar.
MATERIALES / EQUIPOS
Disponer de instrumentos y material debidamente limpio y seco (hacer la limpieza adecuada).
a. Materiales:
 Agar Nutritivo
 Agua destilada
 Asas bacteriológicas
 Espátulas
 Matraz (50 ml)
 Varillas de vidrio
 Probeta (100 ml)
 Tubos de ensayo estéril
 Placas Petri estéril
b. Equipos
 Autoclave
 Balanza analítica
 Horno (180°C)
 Incubadora (37°C).
 Mechero de Bunsen.

TÉCNICA DE PREPARACION

Para preparar y realizar un cultivo es necesario contar con todo el material debidamente
esterilizado, además de tener la precaución de trabajar junto a una fuente de calor que impida
tanto un contagio de la persona que procesa la muestra, así como una posible contaminación
del cultivo donde se va a trabajar.

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El Agar nutritivo se prepara a partir de un medio líquido al cual se le agrega Agar como agente
solidificante. El Agar nutritivo depositado en placas Petri, permite el aislamiento de bacterias
no exigentes, al estado de pureza, también se utiliza para la preparación de cosechas bacterianas
masivas en la elaboración de antígenos, vacunas, conservación de cepas para estudios culturales
en tubos de prueba o sirven para cultivar y observar algunas manifestaciones bioquímicas.
MEDIO A PREPARAR: Agar Nutritivo - Preparación Práctica de Medios de Cultivo
PROCEDIMIENTO DE PESADO:

 Pesar 23g de agar - Agar nutritivo (23g/1L de agua destilada)


 Calentar el agua destilada.
 Disolver 23 g/1 l de H2O destilada.
 Cubrir la boca del matraz con papel y amarrarlo con un hilo.
 El Agar diluido ponerlo dentro de la autoclave (llenar con agua destilada), para su
esterilización a120°C/ 15 lb/ 30 min.
PROCEDIMIENTO DE PREPARACION / ELABORACION
1. El fabricante indica la cantidad a pesar y que cantidad de agua destilada debo de añadir.
2. Pesar el medio agar nutritivo deshidratado (espátula), en papel aluminio (5g). Luego se añade
el medio sólido agar nutritivo en el matraz (pírex de 500 ml de capacidad).
3. Se mide el volumen de agua destilada en una probeta graduada (indicada por el fabricante),
luego vertemos el agua destilada al matraz. Como se trata de un medio solido es necesario
disolverlo completamente antes de llevarlo a ESTERILIZAR y para ello utilizaremos un
agitador magnético (y que a la vez calienta).
4. Dejar enfriar a temperatura ambiente, luego proceder a la distribución en las placas Petri y
en los tubos:

 Verter en las placas de Petri y esperar a que este gelatinoso.


 Posteriormente, sembrar la muestra clínica y Observar.

PROCEDIMIENTO DE DISTRIBUCIÓN Y AUTOCLAVADO


1. Repartimos el medio solido hidratado en tubos y placas de Petri, pasando a dispensar unos
ml de medio con ayuda de una pipeta y una propipeta; mantener las condiciones de
esterilidad trabajando dentro de la región estéril del mechero Bunsen.

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2. Cogemos unos ml y lo llevamos a un tubo o tubos y luego los tapamos con algodón o tapa a
presión o de rosca (comercio).
3. Para esterilizar estos medios en tubo los cubrimos con Papel Kraft o papel aluminio, igual el
matraz con el medio y los llevaremos al AUTOCLAVE, según protocolo de trabajo.
4. Posteriormente una vez que tenemos los medios estériles los dejamos enfriar un poco a
temperatura ambiente.
5. Si lo que deseamos son tubos con medio solido con agar inclinado, los podemos dejar
apoyados o inclinados en una gradilla, hasta que solidifiquen en esta posición.
6. Y si lo que queremos es medio en placas de Petri que vienen estériles del fabricante, pasamos
a dividir el medio en cada una de las placas, para ello es necesario siempre trabajar en
condiciones estériles y nos ayudamos con una llama de mechero de Bunsen.
7. Verter el medio del matraz a las placas Petri dentro del radio de trabajo del mechero. Una
vez que el medio este aún liquido retiramos el tapón del matraz y siempre flameando la boca
del matraz, vaciar una cantidad de medio en cada placa de Petri. Siempre flameando la boca
del matraz para cada operación de vaciado y luego de esta manera dejamos enfriar las placas
en esta posición hasta que se solidifiquen.
8. Apagar el mechero y conservar los medios (placas Petri hasta su utilización).
Nota: Agar Nutritivo: su uso es para todo tipo de bacterias.

TECNICA DE INOCULACION, ENTUBADO Y SIEMBRA


TÉCNICAS DE SIEMBRA
1. Estría

 En superficie, inocular directamente muestra por estría.


 Colocar agar (10 ml aproximadamente) a cada placa y dejar solidificar.
 Flamee el asa y se toma muestra del material a estudiar. Extienda de un extremo a otro
formando líneas en zigzag hasta cubrir toda el área de la placa Petri.
2. Tubo de ensayo inclinado

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 Rotular el tubo con el nombre del gar utilizado y con la mano derecha tome la aguja de
inoculación y flaméela. Sin soltarla, déjela enfriar.

 Sostenga el tubo con el cultivo en la mano izquierda, remueva el tapón con el meñique
de la otra mano y sosténgalo de tal manera que no toque ninguna superficie y Flamee la
boca del tubo.

 Retire con la aguja de inoculación una porción de la colonia. Flamee nuevamente la


boca del tubo y Tápelo. Luego toma el tubo a inocular, destápelo, flaméelo e inocúlelo,
haciendo una estría en su superficie.

 Flamee de nuevo la boca del tubo, tápelo y colóquelo en la gradilla (antes de descartar
la aguja de inoculación, esterilícela) y seguidamente incube a 37°C por 24 horas.

TECNICA DE INOCULACION DE MUESTRA EN PLACA DE PETRI


Placa de Petri con un medio de cultivo, usada en microbiología para cultivar microorganismos
deseado y obtener el crecimiento (en medio selectivo), se pueden agregar antibióticos
PROCEDIMIENTO: Para realizar un cultivo bacteriano es necesario tomar el asa e introducirla
al fuego para que se esterilice, dejar enfriar unos segundos y tomar la muestra que se va a
estudiar; abrir la placa Petri y flamear delante del mechero, con el asa impregnada de la muestra
se efectúa un pequeño inóculo en el borde, de allí se parte la primera estriación; luego de la
esquina de una de las estrías de la primera estriación se realiza la segunda estriación y
finalmente de la esquina de una de las estrías de la segunda estriación, se realiza la tercera
estriación, procurando hacer las estrías mucho más separadas de las dos primeras, con la
finalidad de separar las colonias que sean sembradas; se tapa la caja y se lleva a la incubadora,
colocándola de lado contrario al que se sembró y se la deja en las condiciones apropiadas para
el crecimiento de cada bacteria: temperatura, atmósfera, pH, tiempo, etc.

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TRANSFERENCIA DE MUESTRAS EN LOS MEDIOS DE CULTIVO


La inoculación o transferencia se hace con asa de platino (extremo curvo), alambre que debe
esterilizarse antes y después de usarlo (calentar al rojo vivo). Para las muestras tomadas con
hisopo, efectuar la transferencia sin riesgo de contaminación en lo posible. Si luego de la
inoculación queda una cantidad apreciable de materia en la aguja o alambre deberá calentarse
gradualmente hasta que se ponga rojo; de lo contrario es probable que se dispersen organismos
viables sobre el operador y la mesa.
Las muestras para cultivo son sembrados en “Medios Seleccionados” y en seguida incubar.
Después de la incubación los cultivos son examinados y a continuación los microorganismos
son identificados a través de diferentes técnicas.
a. Medios en placa Petri, utilizado para permitir el crecimiento de colonias individualmente
aisladas. Las placas se colocan en la estufa con la base hacia arriba.
b. Medios inclinados en tubo, utilizado para resembrar cepas aisladas, con el propósito de
identificarlas.
SIEMBRA DE SÓLIDO A SOLIDO (PLACA - TUBO) POR PICADURA.
OBJETIVO: Aprender a realizar una siembra en tubo, de sólido a sólido, procedente de una
placa previamente sembrada. La técnica utilizada para ello será por picadura.
FUNDAMENTO: La finalidad de estas técnicas es la de resembrar un microorganismo en un
tubo. Dicho microorganismo debe proceder de una placa de Petri, con un medio de cultivo,
previamente sembrada. También puede ser útil para aislar un microorganismo concreto y
sembrarlo en un medio específico que favorezca su identificación por métodos bioquímicos.
PROCEDIMIENTO: Siembra de sólido a sólido (placa a tubo) por picadura. Se toma, con un
asa de siembra de platino, una muestra de un microorganismo procedente de un cultivo sólido
(placa). Se siembra en otro medio sólido que difiere del anterior (tubo). La siembra en este
nuevo medio se realiza zigzagueando por la superficie inclinada del medio sólido que se
encuentra en el tubo. La técnica de picadura requiere del uso de un hilo de siembra de platino.
La muestra del microorganismo, procedente de la placa, se transfiere al tubo atravesando su
medio de cultivo hasta alcanzar el fondo del tubo.
MATERIAL Y REACTIVOS: Microorganismo problema, Asa de siembra de platino, Hilo de
siembra de platino, Mechero Bunsen, Papel de filtro, Tubo con medio de cultivo sólido (TSI),
Tapón metálico, Gradilla, Estufa, otros.
TÉCNICA
1. Coger un inóculo de un microorganismo con un hilo de siembra previamente esterilizado en
el mechero Bunsen y realizar la siembra por picadura introduciendo el hilo de siembra en el
medio hasta el fondo del tubo.
2. Coger un inóculo con un asa de siembra estéril y realizar una siembra por lengüeta en el
mismo medio, zigzagueando con el asa desde el fondo del tubo hacia adelante.
3. Tapar el tubo con el tapón metálico (algodón) e incubar en la estufa a 37ºC. Una vez
incubado se observa y se valora el resultado al día siguiente.

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RESULTADOS E INTERPRETACIÓN: Como resultado se observa un cambio de color en el


medio de cultivo del tubo de amarillo a rojizo, debido a que el medio de cultivo posee algún
nutriente necesario para el metabolismo del microorganismo.
Nota: Ejecutar practica de prueba en medio de cultivo (TSI) y observar crecimiento.
OBSERVACIONES: En técnica compuesta de doble siembra, extremar las precauciones para
evitar que el tubo se contamine. Hacer la siembra por partida doble utilizando dos asas de
siembra diferentes que se deben esterilizar convenientemente. Cuando se utilice el asa de
siembra habrá que esterilizarlo previamente a la preparación del inóculo. Lo mismo ocurre con
el hilo de siembra (en ambos casos tener precauciones dejando que se enfríen después de haber
pasado por la llama del mechero bunsen). Si la temperatura del asa, o del hilo, es muy alta,
eliminaremos los microorganismos del inóculo y no crecerá nada.

SIEMBRA DE SÓLIDO A LÍQUIDO (PLACA - TUBO) POR AGITACIÓN.


OBJETIVO: Aprender a realizar una siembra de sólido a líquido (placa a tubo) haciendo uso
de la técnica de agitación.
fundamento: La siembra en un medio líquido puede realizarse de varias formas. Puede utilizarse
asa de siembra de platino o hilo de siembra de platino, hisopo e incluso una pipeta. La finalidad
es transferir un microorganismo problema de un medio de cultivo (sólido) a otro medio de
cultivo (líquido). De este modo procedemos a una resiembra y se pueden aprovechar las
características del medio líquido para hacer una determinación bioquímica.
PROCEDIMIENTO: Siembra de sólido a líquido (placa a tubo) por agitación. Se realiza con
asa o hilo de siembra, ésta se carga en condiciones de esterilidad y se adiciona al medio líquido
agitando ligeramente. Con el hisopo se procede a sembrar (igual a asa de hilo de platino). Si se
hace uso de una pipeta, se toma un volumen de la muestra y se adiciona al medio líquido como
paso previo a su agitación.
MATERIAL / REACTIVOS: Microorganismo problema, Hilo de siembra de platino, Mechero
Bunsen, Papel de filtro, Tubo con medio de cultivo líquido (Clark y Lubs), Tapón metálico,
Gradilla, Estufa.
TÉCNICA
1. Esterilizar el hilo de siembra de platino haciendo uso del mechero bunsen.
2. Coger el inóculo con el hilo de siembra estéril, luego introducir en el medio líquido dentro
del tubo y agitar y tapar el tubo con el tapón metálico.
3. Introducir en la estufa para su cultivo a 37ºC. y una vez incubado, se observa y se valora el
resultado al día siguiente.
RESULTADOS / INTERPRETACIÓN: El medio de cultivo fue de color amarillo, y tras la
incubación se tornó blanquecino. Esto fue debido al crecimiento del microorganismo.
OBSERVACIONES: A la hora de esterilizar la boquilla del tubo en la llama del mechero tener
cuidado de no derramar el caldo de cultivo. Tener en cuenta (prácticas anteriores) se usó medios
sólidos, donde se podía esterilizar la boquilla del tubo sin miedo a derramar el medio de cultivo.

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RESULTADO / INTERPRETACION GENERAL

La siembra de los medios de cultivo solidos incluidos en placas de Petri suele hacerse con asa
de platino previamente pasada por la llama. Cuando se trata de hisopos en lugar de cargar con
un asa de platino se utiliza el mismo hisopo para la siembra. Los medios inoculados suelen
cultivarse a temperatura ambiente y 37°C. Cuando se quiera hacer subcultivos se toman las
colonias del medio solido con un alambre recto (aséptico) y se llevan a los otros medios.
Reporte Final del Cultivo es enviado al Médico o al servicio de dónde provino la muestra.

HOJA DE UN SERVICIO DE MICROBIOLOGÍA CON RESULTADOS

CLÍNICA…
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
NOMBRE: (Paciente)
CENTRO: Consultas externas
SERVICIO: Otorrinolaringología
DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: Otitis en oído izquierdo
DOCTOR: (Nombre)
NUMERO DE MUESTRA:
TIPO DE MUESTRA: Exudado ótico
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO:
Tinción de Gram.
Aparecen numerosos leucocitos polimorfonucleares
AÍSLA:
Pseudomonas aeruginosa
ANTIBIÓTICOS A LOS QUE ES SENSIBLE:
Gentamicina, Piperacilina, Ciprofloxacina.
FIRMA: ………………………….
FECHA INFORME: 25 - 10 - 2020

MÉTODOS DE CULTIVO EN CONDICIONES AEROBIOS Y ANAEROBIOS


Los microorganismos se cultivan en condiciones aerobias y anaerobias. Algunas especies solo
se reproducen en condición de anaerobiosis. La forma más sencilla es crecer las bacterias en un
medio solido o semisólido que contenga una sustancia reductora como el tioglicolato o el ácido
ascórbico. En estas condiciones los microrganismos crecen en los lugares más profundos de las
placas. El sistema Gas Pak es de mejor uso.
CULTIVOS EN ATMOSFERAS DE CO2: Determinados microorganismos solo crecen en
atmosferas de CO2 como: i) Brucella abortus; ii) Neisseria gonorrhoeae; iii) Neumococos. El
método más sencillo para conseguir una atmosfera rica de CO2 es colocar las placas de cultivo
en un frasco herméticamente cerrado que contenga una vela donde al producirse la combustión
se consume el oxígeno y se produce el CO2.También existen incubadoras para el caso.

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MEDIOS DE CULTIVO: Mediante los cultivos se pretende aislar e identificarlos


microorganismos. Los medios de cultivo son sólidos o líquidos, los sólidos son los más usados
en los laboratorios de microbiología. El agente solidificante más utilizado es el agar,
polisacárido complejo que se extrae a partir de algas marinas. Al calentarlo a 100 °C forma una
solución que cuando se enfría a 32-40 °C da lugar a un gel por el que los solutos pueden difundir
igual que en una solución acuosa. El agar es químicamente inerte y no es atacado por ninguna
bacteria de interés clínico. Los componentes del medio de cultivo se mezclan con el agar líquido
y al enfriar quedan incluidos en el.

RESUMEN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO - COMPOSICION


Simples, enriquecidos, selectivos y transporte:
a. Los Medios Simples: Tienen como base un extracto acuoso de carne o caldo y sales
minerales. Su composición más frecuente es 1 litro de extracto acuoso de carne, 10 g de
peptona, 3 g de cloruro sódico y 2 g de fosfato disódico.
b. Los Medios Enriquecidos: Ccontienen algunas sustancias necesarias para el crecimiento de
determinados microorganismos patógenos, señalamos: Agar chocolate, medio de loeffler.
­ El Agar Chocolate: Que contiene sangre que se ha calentado por encima de 100 °C para
destruir los hematíes, es un medio adecuado para el crecimiento de Hemophilus.
­ El Medio de loeffler: Que contiene un 75 por 100 de suero y un 25 por 100 de caldo
glucosado y que se usa para el cultivo de Corinebacterias.
c. Los Medios Selectivos: Contienen sustancias que solo permiten o estimulan el crecimiento
o desarrollo de algunos microorganismos. Se encuentra:
­ El MacConkey: Que contiene taurocolato sódico, sal biliar que impide el desarrollo de
microorganismos no entéricos.
­ El Medio con tioglicolato y un hidrolizado de caseína, dextrosa y cistina. Es un Medio
adecuado para el desarrollo de Clostridium.
­ El Medio de Lowenstein-Jensen: Contiene diversos fosfatos, citratos y sulfatos, glicerol
que estimula el desarrollo de M. tuberculosis.
d. Los Medios de Transporte: Incluido en la toma de muestra, fundamentalmente los hisopos,
desde su recogida hasta su entrega al laboratorio microbiológico. El más usado es el de Stuart
que contiene tioglicolato, cloruro de calcio y glicerofosfato. En la actualidad existen en el
comercio una gran variedad de cultivos deshidratados para reconstituirlos en el laboratorio.
ANEXOS

 Utilizar, Atlas de técnicas de cultivo - Utilizar, Atlas de pruebas bioquímicas.

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