Facultad de medicina

Cuarto semestre

Integrantes código estudiantil

-Sebastián Felipe Romero Romero 10502215712

-María Emma Ramírez Ladino 10502229407

-Anhell Valeria Bedoya salinas 10502228638

-Alexandra Alonso Sánchez 10502229900

Informe

Identificación de cocos Gram positivos

Docente: Maritza torres

2024
Objetivos

General

- Reconocer las principales características de los géneros Staphylococcus spp. y

Streptococcus spp. y los métodos de identificación en el laboratorio.

Específicos

- Conocer el fundamento y realizar los procedimientos de laboratorio diseñados para

diferenciar las principales especies de Staphylococcus spp. y Streptococcus spp.
Patógenos humanos.

- Interpretar los resultados de las pruebas de identificación para especies de

Staphylococcus spp. y Streptococcus spp.

Materiales

- caja Staphylococcus aureus

- 1 caja Staphylococcus saprophyticus
- 1 caja Streptococcus viridans
- 1 caja Enterococcus faecalis
- • 1 caja Streptococcus agalactiae
- • 1 caja Staphylococcus epidermidis
- • 1 caja de Agar salado Manitol
- • 1 caja de Agar Dnasa
- • 3 cajas Agar sangre
- • 3Tubos de 0,5mL c/u de Plasma humano
- • 3 tubos de caldo BHI suplementado con 6,5% de
- NaCl
- • 3Unid Sensidiscos de Bacitracina
- • 3Unid Sensidiscos de Optoquina
- • 3Unid Sensidiscos Novobiocina
- • 3unid Asas curvas
- • 1unid Pinzas relojero
Flujogramas
Consulta previa

A. ¿Para qué utilizan los estafilococos la proteína coagulasa, In Vivo?

Los estafilococos utilizan esta proteína la cual está implicada en el desarrollo de los
abscesos, mediante la formación de una capa de fibrina alrededor de la lesión, lo que
impide la localización y fagocitosis del agente patógeno. Esta tiene una relevancia
importante la cual se encarga de convertir el fibrinógeno en fibrina, durante el
laboratorio la proteína coagulasa (Enzima que causa coagulación del plasma, formando
un complejo con la protrombina humana, los estafilococos producen dos tipos de
coagulasas: Estafilocoagulasa, coagulasa libre que produce coagulación verdadera del
plasma y factor estafilocócico de agregación, coagulasa ligada a la pared celular, que
induce agregación de las células en presencia de fibrinógeno), además esta proteína se
utiliza principalmente para diferenciar el Staphylococcus aureus de los Staphylococcus
coagulasa negativos.1

B. Explique tres enzimas involucradas en el proceso de patogenicidad de S. aureus.

-Coagulasa: produce la coagulación del plasma y puede encontrarse libre o unida a la

bacteria. Actúa sobre el factor liberador de coagulasa (CRF), lo que provoca la
formación de un material similar a la trombina llamado trombina
coagulasa, que convierte el fibrinógeno en fibrina. La coagulasa ligada a la bacteria
favorece la formación de grumos o racimos lo que ayuda a la fagocitosis, sin embargo,
el papel de la coagulasa en la enfermedad sigue incierto.

-La hialuronidasa o factor de difusión: capaz de romper el ácido hialurónico del

tejido conectivo, en la difusión del microorganismo. Sin embargo, también el papel de
la hialuronidasa en la infección sigue estando mal definido, ya que es producida tanto
por las cepas patógenas como por las que no lo son y, por otro lado, los anticuerpos
antihialuronidasa no previenen ni dificultan la infección.

-killing intracelular: consiste en mecanismos oxígeno-dependientes y oxígeno-

independientes. Los primeros se realizan a través de la producción de peróxido de
hidrógeno y de radicales de oxígeno e hidróxilo.2

C. ¿El crecimiento de Staphylococcus aureus en un medio con altos contenidos de sal,

en que le favorece a la bacteria, encuentra alguna relación con su patogenicidad?

Staphylococcus aureus es una bacteria muy resistente en el medio ambiente y está

ampliamente distribuida en la naturaleza. Durante investigaciones se ha logrado
observar que diversas toxinas relacionadas a esta logran resistir temperaturas altas y
baja acidez. Se tiene conocimiento previo de que esta bacteria crece perfectamente en
alimentos con alto contenido de sal, con respecto al pH, su intervalo de crecimiento se
encuentra entre 4,5 y 9,3 estando su óptimo entre 7,0 y 7,5 por ende, es imposible
 erradicarla del medio ambiente. Su capacidad para producir en pocas horas
enterotoxinas resistentes al calor y sales, la convierten en una bacteria bastante
resistente. Respecto a la patogenicidad se tiene conocimiento de que al crecer
prósperamente en ambiente con sales genera abundancia de esta y no interviene
afectándola. 3

D. ¿Cómo diferenciaría una cepa perteneciente a la familia Micrococcacea de una

Staphylococcacea?

E. ¿Cuál es la importancia médica de diferenciar entre NO Enterococos y Enterococos?

Los enterococos (Son microorganismos anaerobios facultativos grampositivos, estos causan

infecciones urinarias y endocarditis), la importancia médica de diferenciar los enterococos de
los no enterococos radica en las diferentes enfermedades y lo más importante las distintas
resistencias entre estos, ya que en las últimas décadas esta ha aumentado en mayor proporción,
generando que los enterococos sean resistentes a diversos aminoglucósidos y glucopéptidos
(Entre estos se tiene conocimiento de la vancomicina).5

F. Explique el fundamento de la prueba de CAMP, e indique para que se utiliza.

El fundamento principal de la prueba CAMP se basa en identificar Estreptococo agalactiae del

grupo β-hemolítico, básicamente los estreptococos del grupo B producen un factor llamado
CAMP (Factor de monofosfato de adenina cíclica), que aumenta la zona de hemolisis
producida por un estafilococo productor de Bilisina. El procedimiento consta de realizar un
estriando en cultivo de Estreptococo B-

Hemolítico en forma perpendicular a una estría de un estafilococo productor de B-lisina en agar

sangre. Este se incuba entre 18-24 horas a 37°C. Interpretación de los resultados: La prueba
positiva se evidencia principalmente por una zona de potenciación de la hemólisis en forma de
puntas de flechas en el lugar donde se contactan las dos estrías. Esta prueba se utiliza
principalmente para comprobar la capacidad de un microorganismo de producir y mantener
estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa por la vía de la
fermentación ácido- mixta.6

G. Los estreptococos son microorganismos exigentes que requieren medios de

enriquecimiento para su crecimiento, ¿Cuál es el medio de preferencia para el
crecimiento de estos microorganismos y por qué?

Los estreptococos forman parte de la flora saprofita de la boca, piel, intestino y el tracto
respiratorio superior de los humanos, el medio de preferencia para el crecimiento de estos
microorganismos es Todd-Hewitt, el cual es un caldo que se emplea para la producción de
hemolisina estreptocóccica y el cultivo de estreptococos para el tipaje serológico, este sustrato
se encuentra a nuestro alcance y además posee óptimas condiciones para la viabilidad, por su
carga de nutrientes y excelente amortiguamiento.7

H. ¿Cuál es la importancia de la bacitracina y optoquina en los microorganismos? ¿Qué

función cumplen?

La importancia de la bacitracina radica en que es uno de los primeros antibióticos conocidos y

es producido por cepas de Bacillus, estas se han usado tópicamente en veterinaria, inhibiendo
selectivamente a los Streptococcus pyogenes y las optoquinas inhibe el desarrollo de
Streptococcus pneumoniae. Estas cumplen la función de diferenciar estreptococos ß-
hemolíticos, ya que muchos estreptococos alfa-hemolíticos (Incluidos los neumococos) son
sensibles a la bacitracina.8

I. ¿Cuál es la importancia de la Nobociocina en la identificación de los microorganismos?

¿Qué función cumplen?

La nobociocina es activa frente el Staphylococcus epidermidis y puede usarse para diferenciarlo

de los otros coagulasa-negativos, como el Staphylococcus saprophyticus que son resistentes a
esta, su función principal es unirse a la ADN girasa y bloquear la actividad de la adenosina
trifosfatasa (ATPasa). Esta es un curioso y viejo antibiótico natural obtenido en 1956, que
reconoce varios tipos de mecanismos de acción, como el 98% de los estafilococos coagulasa
negativos aislados en clínica son de las especies S. epidermidis y S. saprophyticus, el uso de
dos pruebas sencillas: Coagulasa (S. aureus es coagulasa +) y sensibilidad a nobociocina
facilita la identificación de los estafilococos patógenos.9

J. Mencione los Estreptococos patógenos y tres no patógenos.

Los estreptococos patógenos son:

-Grupo A: estos causan Infección en la garganta, escarlatina, impétigo (infección en la piel),

síndrome del shock tóxico, celulitis y fascitis necrotizante (enfermedad necrotizante).

-Grupo B: puede causar infecciones de la sangre, neumonía y meningitis en los recién nacidos
y en personas mayores de 65 años puede causar infecciones del tracto urinario y neumonía.

-Streptococcus viridans: implicado en la flora nasofaríngea y orofaríngea normal en el 15% de

los niños mayores de 5 años y del 5 al 40% de los adultos, relacionado en el desarrollo de
patologías como la sinusitis, neumonía, otitis, bronquitis y meningitis.

No patógenos:

-Gamma hemólisis: No se produce hemólisis, generalmente los estreptococos gamma

hemolíticos no son virulentos.
Tabla de resultados

Tabla 1. Resultados para Staphylococcus spp.

Identificación de la bacteria: staphylococcus Aureus

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la catalasa POSITIVA

Prueba de la Dnasa NEGATIVA

Prueba de la coagulasa POSITIVA

Sensidisco de noboviocina SENSIBLE

Degradación de Manitol POSITIVA

Posible microorganismo identificado: staphylococcus Aureus

Observaciones: se puede observar que S. Aureus siendo un microorganismos Gram positivo (

+) presenta la mayoría de las pruebas positivas gracias a sus morfologias
Identificación de la bacteria: staphylococcus epidermidis

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la catalasa POSITIVA

Prueba de la Dnasa NEGATIVA

Prueba de la coagulasa POSITIVA

Sensidisco de Noboviocina
SENSIBLE

Degradación de Manitol NEGATIVO

Posible microorganismo identificado: staphylococcus epidermidis

Identificación de la bacteria: staphylococcus saprophyticus

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la catalasa POSITIVA

Prueba de la Dnasa NEGATIVA

Prueba de la coagulasa POSITA (Coagulación

mínima)

Sensidisco de RESISTENTE
noboviocina

Degradación de Manitol POSITIVO

Posible microorganismo identificado: staphylococcus saprophyticus

Observaciones: Podemos evidenciar diferentes características en el microorganismo que resaltan la

variedad en los resultados de las pruebas, ya sean positivos y negativos.
Tabla 2. Resultados para Streptococcus spp.

Identificación de la bacteria: streptococcus pyogenes

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la NEGATIVO
catalasa

ALFA: tipo de GAMMA: no

Tipo de hemólisis que se se realiza
Hemólisis realiza parcialmente. ningún tipo
no se observó en de
Pyogenes hemólisis
BETA
se presenta en pyogenes, hemólisis
completa

Crecimiento en NEGATIVO
NaCl

Bacitracina SENSIBLE: Al
medicamento sólo se
observa en Pyogenes

Optoquina SENSIBLE. Al
medicamento no se
observa crecimiento
en Pyogenes

Hidrólisis de NEGATIVO: no se
esculina observa una reacción
con el citrato férrico

Posible microorganismo identificado: streptococcus pyogenes

Observaciones: Se logró identificar que streptococcus pyogenes genera una prueba catalasa
negativa, un tipo de hemólisis BETA, crecimiento de Nacl negativo, una hidrólisis de esculina
negativa y una sensibilidad a la bacitracina y optoquina.
Identificación de la bacteria: streptococcus agalactiae

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la NEGATIVA: no genera una

catalasa reacción de burbujas.

Tipo de ALFA: lisis parcial, hay GAMMA: no existe lisis, BETA: lisis total,
Hemólisis una observación. no se observa. no se observa.

Crecimiento POSITIVO: crecimiento NEGATIVO: no hay crecimiento.

en NaCl apropiado en altas
concentraciones de sal.

Bacitracina SENSIBLE: No genera RESISTENTE: no genera una resistencia.

sensibilidad.

Optoquina SENSIBLE: No genera RESISTENTE: no genera una resistencia.

sensibilidad.

Hidrólisis de POSITIVO: relación con NEGATIVO: no genera reacción.

esculina citrato férrico. No generó
una reacción.

Posible microorganismo identificado:streptococcus agalactiae

Observaciones: Se logró observar que streptococcus agalactiae genera una reacción

negativa en la prueba catalasa, en la prueba hemólisis genera una respuesta alfa y en las
pruebas bacitracina, optoquina, hidrólisis de esculina y crecimiento se Nacl no genera una
reacción ni resistencia.
Identificación de la bacteria: streptococcus viridans

PRUEBA RESULTADO

NEGATIVA
Prueba de la
catalasa

ALFA: LISIS PARCIAL. se GAMMA: no BETA: Lisis

observa en viridans se realiza completamente. no se
Tipo de ninguna observa en viridans
Hemólisis hemólisis no
se observa
en viridans

Crecimiento en POSITIVO: buen crecimiento

NaCl en altas concentraciones de
sal

Bacitracina RESISTENTE: Se observa

crecimiento

Optoquina RESISTENTE: Se observa

crecimiento del organismo
viridans

Hidrólisis de NEGATIVO: No hubo reacción

esculina

Posible microorganismo identificado: streptococcus viridans

Observaciones: Se logra detectar que streptococcus viridans da como resultado negativo

en la prueba catalasa, una reacción ALFA en hemólisis, un crecimiento positivo en Nacl,
resistencia con la bacitracina y optoquina, y en hidrólisis esculino no obtuvimos resultado.
 Identificación de la bacteria: Enterococcus faecalis

PRUEBA RESULTADO

Prueba de la NEGATIVA
catalasa

ALFA: es una lisis parcial, se GAMMA: no BETA: lisis

Tipo de Hemólisis observa existe lisis y completa no
no se observa en
observa Faecalis

Cre cecimiento en NaCl POSITIVO: crece en altas

concentraciones de sal

Bacitracina RESISTENTE: se observa

crecimiento

Optoquina SENSIBLE: no se observa

crecimiento

Hidrólisis de POSITIVO; hubo reacción con el

esculina citrato férrico

Posible microorganismo identificado: Enterococcus faecalis

Observaciones:Se logró detectar con Enterococcus faecalis una prueba catalasa negativa,
un tipo de hemólisis ALFA, un crecimiento de Nacl positivo, bacitracina resistente,
optoquina sensible y una hidrólisis de esculina positiva.
Discusión

Para los resultados de las primeras pruebas abordaremos las bacterias staphylococcus
aureus, epidermidis y saprophyticus. Empezaremos hablando de Staphylococcus aureus y de
las pruebas realizadas en este. La prueba de la catalasa dio positiva lo que nos explica que
esta bacteria es capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno por la enzima antes
mencionada. Para la prueba de (DNAsa) hubo un resultado negativo, lo que nos demuestra
que no tiene la enzima desoxirribonucleasa, por lo tanto no posee la capacidad de hidrolizar
el ADN.

En la prueba de coagulasa dio un resultado positivo muy evidente lo que le permite la

capacidad de coagular el plasma como característica importante de la bacteria como factor
de virulencia y patogenicidad.

La prueba de sensidiscos de novobiocina dio un resultado de sensibilidad, esto es muy

importante ya que nos ayuda a identificar que este tipo de antibiótico nos puede servir como
tratamiento a la hora de que un paciente presente una infección con esta bacteria.

Por último, en la prueba de degradación del manitol obtuvimos un resultado positivo, lo que
nos permite identificar que fermenta el manitol, esto es una capacidad que le da a la bacteria
una forma para conseguir energía del medio en el que se encuentra, en este caso del azúcar
que posee este agar.

La segunda bacteria evaluada fue staphylococcus epidermidis, en este caso todos los
resultados fueron iguales, la única diferencia la encontramos en la prueba del manitol, en
esta obtuvimos un resultado negativo, lo que significa que no hubo degradación del manitol,
esta bacteria no tiene esta capacidad así como staphylococcus saprophyticus

En cuanto a la bacteria staphylococcus saprophyticus debemos tener en cuenta que es una

bacteria de tipo coco Grampositiva, encontrado en el tracto urinario y piel del ser humano.

Para las pruebas realizadas los resultados variaron. En cuanto a la catalasa evidenciamos un
resultado positivo lo que nos afirma la presencia de la enzima catalasa, demostrando la
capacidad que tiene la bacteria de descomponer el peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua,
confirmando que la mayoría de bacterias Grampositivas son catalasa positiva.

En la segunda prueba (DNAsa) evidenciamos un resultado positivo que nos permite

observar la relación de la bacteria con la enzima desoxirribonucleasa encontrada en esta.
Esta enzima puede ser usada por la bacteria para descomponer ADN circulante en el medio
ambiente lo que le permite degradar el material genético de otras células y evadir el sistema
inmune de sus hospedadores.

La prueba coagulasa tuvo un resultado positivo, dejándonos ver la capacidad de la bacteria

para coagular el plasma, siendo esta una característica bastante importante ya que al tener
 esta enzima se activa la conversión de fibrinógeno en fibrina lo que lleva a la formación del
coágulo.

En cuanto al sensidisco de novobiocina dio un resultado resistente, lo que significa que hubo
crecimiento a pesar del antibiótico al que fue expuesta. Según investigaciones este
antibiótico es muy usado a la hora de querer diferenciar esta especie de bacteria de otras.

No obstante a ello el siguiente microorganismo que trabajamos en el laboratorio fueron los

streptococcus: pyogenes, agalactiae, viridans y Enterococcus faecalis. Los streptococcus
son microorganismos caracterizados por ser Grampositivos (+) anaerobios facultativos,
inmóviles, con forma esféricas o de coco y algunos pueden contener capsula., lo que explica
y por qué algunos resultados fueron positivo o negativo en las pruebas químicas
realizadas.

Para streptococcus: pyogenes: su prueba de cátala es negativa, ya que este

microorganismo carece de esta enzima, siendo importante para descomponer el peróxido de
hidrogeno en O2 y H20, lo que indica que este microorganismo podría ser eliminado con
facilidad en el organismo humano ya que el peróxido producido por el metabolismo
generaría un impacto lítico del microorganismo.

Su prueba hemolítica resulta ser B- Hemolisis completa, ya que presenta una enzima
llamada estreptolisinaO la cual degrada los glóbulos rojos en un Agar sangre, por ello este
microorganismo es poco común y caracterizado por generar patologías humanas como
bacteriemias, osteomielitis y en algunas ocasiones infecciones graves en la piel.

Su prueba de sensidiscos al medicamento de optoquina y Bacitracina obtuvo una reacción de

sensibilidad y no se observó crecimiento, esto es dado por los mecanismos de acción que
posee los antibióticos que inhiben su síntesis de proteínas y membrana, siendo fácil de
controlar y atacar.

streptococcus agalactiae

Su prueba de catalasa se observó negativa, de igual manera carece de la enzima perdiendo a

si su capacidad de hidrolizar este componente.

Su Hemolisis corresponde - A hemolisis por su enzima estreptolisinaO con ello inferimos

que esta enzima es la encargada de hacer los 3 tipos de hemolisis conocidos α (alfa), β (beta)
γ (gamma)

Para los sensidiscos utilizados de optoquina y Bacitracina agalactiae obtuvo una

sensibilidad debido a las diferencias en la composición de la membrana y pared celular de
 la bacteria así como la presencia o ausencia de enzima y proteínas de trasporte, haciendo
más fácil la actividad bactericida de los sensidiscos

streptococcus viridans

Hemolisis- A- debido a la presencia de la enzima estreptolisinaO

Se observa que este microorganismo viridans no tiene la capacidad de crecer en altas

contracciones gracias a la prueba de crecimiento de NaCL , esto es debido a su naturaleza no
halófila estas bacterias estas adatadas a ambientes con bajos niveles salinidad, esto se debe a su
estructura y composición de membrana celular, es por ello que viridas es conocido por generar
patologías en la garganta y sobre la piel

Para los sensidiscos de optoquina y Bacitracina viridans muestra una resistencia ante ellos
debido que estos medicamentos actúan en la membrana celular generando perdida de la
integridad conduciendo a una lisis celular y por ende la muerte de la bacteria. Por otro lado la
Bacitracina inhibe la síntesis de la pared celular bacteriana.

streptococcus viridans es positivo para la hidrolisis escolida debido a la presencia de enzimas

como la esculinasa la cual puede descomponer la esculina en glucosa y esculitina

Enterococcus faecalis

Para la prueba cátala faecalis muestra una reacción negativa debido a que carece de la enzima
cátala, siendo mas fácil de atacar con la presencia de peróxido de hidrogeno

Este microorganismo tiene la capacidad de crecer en altas concentraciones de sal debido a que
tiene la capacidad de regula su el equilibrio osmótico. Esto significa que puede adaptarse a
condiciones de lata salinidad gracias al presencia de sistemas de transporte de iones y
acumulación de solutos compatibles, es por ello que es común encontrarlo en cavidades
respiratorias, gastrointestinales y en el tracto genital de las mujeres.

Faecalis es resistente a la bacitracina y sensible a la optoquina debido a las morfaologias y

mecanismos de acciones de estas, explicadas posteriormente. Es por ello que la optoquina es
administrada en enfermedades como: neumonía, otitis o infecciones respiratorias, y para la
bacitracina es solicitada para enfermedades como infecciones de faringitis celulitis y facitis
necrotizante, de igual manera resulta con gran capacidad de crecer en medios de sal.
Conclusiones

Basándonos en los resultados de las pruebas realizadas en Staphylococcus aureus, Staphylococcus

epidermidis y Staphylococcus saprophyticus, podemos concluir que estas bacterias presentan
características bioquímicas distintivas que son relevantes para su identificación y comprensión de
su papel en las infecciones. Staphylococcus aureus demostró la presencia de la enzima catalasa,
coagulasa y capacidad para fermentar manitol, lo que indica su capacidad para descomponer
peróxido de hidrógeno, coagular plasma y fermentar manitol, respectivamente. Estas
características son importantes para su virulencia y patogenicidad, así como para su identificación y
posible tratamiento con antibióticos. Staphylococcus epidermidis también mostró resultados
positivos en las pruebas de catalasa y coagulasa, pero un resultado negativo en la degradación del
manitol. Esta diferencia en la capacidad de fermentar manitol puede ser útil para diferenciar esta
bacteria de S. aureus.Por otro lado, Staphylococcus saprophyticus dio resultados positivos en las
pruebas de catalasa, DNAsa y coagulasa. Estos resultados sugieren que esta bacteria también
puede descomponer peróxido de hidrógeno, hidrolizar ADN y coagular plasma, lo que es relevante
para su virulencia y patogenicidad.
BIBLIOGRAFIA

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