UNIVERSIDAD DE SONORA

División en Ciencias de la Salud

Departamento de Ciencias Químico Biológicas

Laboratorio de Análisis Bacteriológicos

Docente Escobar López Román

PRÁCTICA No. 3

AISLAMIENTO DEL GÉNERO STAPHYLOCOCCUS

Grupo 1

Robles Pacheco Celina

Hermosillo, Sonora 07 de Septiembre del 2022

Objetivo
Ejecutar las técnicas básicas para el aislamiento y caracterización de Staphylococcus sp.

Fundamento
El género Staphylococcus, miembro de la familia Micrococcaceae, comprende especies de
gran importancia tanto en el aspecto clínico como en la industria alimentaria, entre los que
destacan S. aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus, causantes de intoxicaciones,
infecciones de la piel, vejiga y septicemias, entre otros problemas clínicos.
Son microorganismos catalasa positivo, en forma de cocos gram positivos que se presentan
agrupados en agregados irregulares o racimos, o bien formando pequeñas cadenas.
Su crecimiento en medios sólidos está dado por colonias grandes, circulares y convexas que
varían en coloración desde blancas a amarillo naranja, debido a la presencia de pigmentos
carotenoides excretados por algunos miembros del género.
S. aureus, la especie tipo, produce una gran cantidad de productos extracelulares, entre los
cuales se encuentran hemolisinas, coagulasa, leucocidina y enterotoxina, que ayudan a la
diferenciación entre especies. Otra prueba bioquímica de suma importancia es la
fermentación del manitol, la cual es positiva para S. aureus.
En la industria alimentaria, es importante no solo el aislamiento e identificación de S. aureus
de alimentos involucrados en problemas de intoxicación alimentaria, sino también, el poder
determinar la presencia de la toxina, lo cual requiere de técnicas inmunológicas como el
método de Outcherlony y la hemaglutinación, entre otros.

Materiales Cultivo
Reactivos para tinción Gram Cultivo de Staphylococcus sp.
Mechero Placas con agar Baird Parker
Portaobjetos Placas con agar Staphylococcus 110
Asa Placas con agar Sal-Manitol
Peróxido de hidrógeno Tubo con medio BHI
Plasma sanguíneo

Metodología
Día 1
1. Se inoculó un amuestra Staphylococcus aureus y de Staphylococcus epidermidis en
los siguientes medios de cultivo: agar Baird Parker, agar Staphylococcus 110 y agar
sal manitol.
2. De la misma colonia se tomó una muestra y se inoculó un tubo de BHI.
3. Se incubó por 24, a 35 –37 °C y se esperó al siguiente día.
Día 2
1. Se observaron las características coloniales en cada uno de estos medios.
2. Se realizó un frotis de la muestra proporcionada por el maestro de práctica y se realizó
una tinción al Gram. Se observó detalladamente al microscopio y se describieron las
características.
3. Se eligió una colonia típica de cocos gram (+) y realizar prueba de catalasa.
4. Se realizó la prueba de coagulasa, utilizando el cultivo de BHI.
5. Se reportaron los resultados obtenidos y el microorganismo aislado y/o identificado.
Prueba de la catalasa.
1. Se tomó una pequeña cantidad de microorganismos del centro de una colonia pura
bien aislada y se depositó sobre un portaobjetos.
2. Se agregó una gota de agua oxigenada al30% sobre los microorganismos y se observó
la inmediata aparición de burbujas, lo cual se considera como prueba positiva.

Prueba de la coagulasa.
1. Se agregaron 0.5 mL de plasma sanguíneo a un tubo estéril de 13 x 100 mm.
2. Se agregaron 0.5 mL de un cultivo puro de Staphylococcus sp. En BHI (24horas).
3. Se mezclaron suavemente los contenidos para suspender el microorganismo.
4. Se realizaron observaciones cada hora por espacio de 4 horas.
5. Se inclinó ligeramente el tubo para observar la aparición del coágulo, lo cual se
considera prueba positiva.

Resultados

Agar Baird-Parker.
Staphylococcus aureus.

⎯ Tamaño: Grandes y puntiformes.

⎯ Elevación: Elevada.
⎯ Forma: Circular puntiforme.
⎯ Pigmentación: Negra.
⎯ Superficie: Suave.
⎯ Borde: Completo.
⎯ Colonia en general: Puntiforme.

Staphylococcus epidermidis.
⎯ No hubo crecimiento.

Agar Sal-Manitol.
Staphylococcus aureus.

⎯ Tamaño: Pequeña.
⎯ Elevación: Elevada.
⎯ Forma: Circular.
⎯ Pigmentación: Amarilla.
⎯ Superficie: Suave.
⎯ Borde: Completo.
⎯ Colonia en general: Puntiforme.

Staphylococcus epidermidis.
⎯ No hubo crecimiento.

Agar Staphylococcus 110

Staphylococcus aureus.
 ⎯ Tamaño: Pequeña.
⎯ Elevación: Elevada.
⎯ Forma: Circular.
⎯ Pigmentación: Mismo color del medio.
⎯ Superficie: Suave.
⎯ Borde: Completo.
⎯ Colonia en general: Puntiforme.

Staphylococcus epidermidis.
⎯ No hubo crecimiento.

Tinción Gram.
Staphylococcus aureus.
Gram Positivos +
Color: azul.
Morfología: cocos

Prueba Bioquímica Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis.

Catalasa +
Coagulasa +

Discusión
No se observó crecimiento de Staphylococcus epidermidis que pudiese ser ocasionado con el
tiempo de la cepa, ya sea antigua.

En los medios utilizados, Staphylococcus aureus sí tuvo crecimiento y presentó las

características esperadas de acuerdo a la literatura, como lo son colonias negras en Baird-
Parker debido a la reducción de telurito a telurio; colonias amarillas en Sal-Manitol por ser
fermentadoras de manitol; y presentaron crecimiento en agar Staphylococcus 110,
observándose colonas del color del medio (doradas-amarillas) por las altas concentraciones
de NaCl.
Dentro de las pruebas bioquímicas, solo se obtuvieron resultados de la misma bacteria (S.
aureus) por ser las únicas en presentar crecimiento, donde catalasa y coagulasa fueron
positivas.
Por otro lado, Staphylococcus epidermidis debería ser catalasa positiva y coagulasa negativa.
 Prueba Bioquímica Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis.

Catalasa + +
Coagulasa + -

Conclusión
Se ejecutaron las técnicas básicas para el aislamiento y caracterización de Staphylococcus sp,
tales como la inoculación, caracterización de la morfología en los medios de cultivo y las
pruebas bioquímicas. Culminando en los siguientes puntos:
Medios Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis.

Sal-Manitol Crecimiento. Colonias amarillas Crecimiento. Colonias rojas.

Baird-Parker Crecimiento. Colonias negras. Crecimiento.
Staphylococcus 110 Crecimiento Crecimiento.
Prueba Bioquímica Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis.

Catalasa + +
Coagulasa + -

Referencias
1. Aryal, S. (2022, agosto 9). Biochemical Test and Identification of Staphylococcus
epidermidis. Microbiology Info.com. Recuperado de
https://microbiologyinfo.com/biochemical-test-identification-staphylococcus-
epidermidis/
2. Aryal, S. (2022, 10 agosto). Coagulase Test- Principle, Procedure, Types,
Interpretation and Examples. Microbiology Info.com. Recuperado de
https://microbiologyinfo.com/coagulase-test-principal-procedure-types-
interpretation-and-examples/
3. Gil, M. (2019, 24 abril). Prueba de la coagulasa: fundamento, procedimiento y
usos. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/prueba-de-la-coagulasa/
4. Hurtado, M. P., de la Parte, M. A., & Brito, A.. (2002). Staphylococcus aureus:
Revisión de los mecanismos de patogenicidad y la fisiopatología de la infección
estafilocócica. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología, 22(2), 112-
118. Recuperado de
http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-
25562002000200003&lng=es&tlng=es.
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