TIPOS Y MECANISMOS DE ACCIÓN DE MUTACIONES :

SU EFECTO SOBRE PATRONES

DE HERENCIA

La genética desde una perspectiva molecular:

-Evaluar el gen en el contexto del genoma o del organismo y no en forma aislada.
-La genética “moderna” intenta descubrir la función de las proteínas y las vías en las que participa.
-La genética es el estudio de cómo las proteínas interaccionan y funcionan tanto solas como en complejos, y
cuáles son las consecuencias de perturbar estos procesos.

Tipos de mutaciones desde una perspectiva molecular

Recesivas:
-Entender cómo se afecta la función de una proteína

Dominantes:
-Hiperactividad
-Expresión aumentada
-Función nueva
-Haplo-insuficiencia

Condicionales:
-Sensibles a la temperatura
-Sensibles al ambiente

Aberraciones cromosómicas pueden llevar a la pérdida o ganancia de genes

-Alteraciones en el número o estructura de cromosomas
-Surgen normalmente por errores en la gametogénesis o primeras divisiones del cigoto

-Anomalías numéricas:
— Aneuploidía (algunos cromosomas o fragmentos de más o de menos).
— Poliploidía (más de un complemento de cromosomas completo)
— Monosomías (falta de uno de los cromosomas paternos)
— Trisomías (exceso de un cromosoma)

Aberraciones cromosómicas: pérdida de genes

-Anomalías estructurales:
— Alteración de la secuencia normal de fragmentos génicos que componen un cromosoma
— Producto de roturas cromosómicas y reparación
— Pueden surgir en forma espontánea o causadas por agentes químicos o radiación ionizante
— También pueden ser causadas por los transposones
— Pueden ser equilibradas (complemento cromosómico normal)
— Pueden ser desequilibradas (hay pérdida o ganancia de material)

-Reordenamientos desequilibrados
— Deleciones
— Duplicaciones
— Ambas
 Aberraciones cromosómicas: pérdida de genes
-Reordenamientos equilibrados
— Inversiones y translocaciones
— En general, no tienen efectos fenotípicos (para el portador pero sí pueden generar problemas en la
progenie)
— Pero hay rearreglos equilibrados a nivel “citogenético” (cantidad de material) pero desequilibrados a
nivel “molecular”. Por ejemplo: la rotura afecta a un gen, o se genera un gen quimérico (ejemplo BCR-ABL
en LLC).

El tipo de mutación está asociado al mecanismo de herencia

Tipos de mutaciones desde el punto de vista molecular

-Herencia recesiva —> mutaciones “recesivas”: ¿Cómo afectan la función proteica?

MUTACIONES “RECESIVAS”
-Muchos tipos de mutaciones pueden resultar en un fenotipo recesivo
-Alelos nulos:
— Deleciones
— Codones de terminación prematuros
— NO HAY GEN = NO HAY FUNCIÓN (pero al haber dos copias del gen, la copia salvaje es suficiente
para mantener funcionalidad)

-Pérdida de función parcial:

— Hipomorfos

Pérdida de función
Mutación

M M M

Alterar actividad Alterar abundancia Alterar localización

*
Mutando un sitio de interacción *
Alterando estabilidad * Mutando señales de localización
* Mutando el sitio activo de una enzima
* Alterando nivel de expresión * Mutando dominios proteicos .

( promotores nivel estabilidad

,
y
de ARNm ) .
-Las mutaciones pueden afectar a varios niveles:
— Expresión del gen
-Enhancers, promotores
-Procesamiento del mensajero
-Abundancia del ARNm
-Traducción

— Proteína
-Abundancia
-Estabilidad
-Localización
-Actividad

El tipo de mutación está asociado al mecanismo de herencia

Tipos de mutaciones desde el punto de vista molecular
Dominantes:
— Hiperactividad
— Sobre-expresión
— Función nueva
— Dominantes negativos
— Haploinsuficiencia

-DE ALGUNA MANERA INTERFIEREN CON LA ACTIVIDAD NORMAL DEL ALELO SALVAJE (ENTONCES
DAN UN FENOTIPO A PESAR DE LA PRESENCIA DEL MISMO).

Mutaciones dominantes
HIPERACTIVIDAD:
- Por lo general resultan en la adquisición de una función no fisiológica
 
- Ejemplos:
- Función aumentada
- mutación en un dominio de regulación negativa
 
Las proteínas son máquinas que pueden ser encendidas o apagadas. Muchas mutaciones afectan esta
regulación, dejando proteínas constitutivamente encendidas o apagadas

Ejemplo :
mutaciones en el bacteriano le ✗ A
gen

Daño en el ADN = ADNss = se activa RecA = junto con residuos en LexA, esta se cliva

= pérdida de dimerización = pérdida de unión al ADN = activación de genes blanco

Mutaciones que cambian aa en LexA que participan en el reconocimiento por RecA o la proteólisis resultan en
fenotipos no inducibles DOMINANTES

Por qué? Que podría hacer que fueran recesivas?

Ejemplo : mutantes constitutivamente activos de PKC

PKC: protein kinase C: quinasa de proteínas que actúa como aceptor de diacil glicerol (DAG) y Ca2+.

¿Qué tipo de mutaciones generarían una proteína constitutivamente activa?

tjemplo.mu/-antesconstitutivamenteexpreso-ds
- Expresión constitutiva
- muchos genes no se expresan en forma constitutiva
- mutaciones en elementos que actúan en cis:
- deleción de elementos inhibidores
- creación de nuevas secuencias enhancer
 
- Expresión ectópica
- expresión de un gen en una célula donde no debe
 
- Expresión heterocrónica:
- expresión en el momento inadecuado
- ejemplo: proteínas reguladas por el ciclo celular, o proteínas importantes durante el desarrollo

Abundancia alterada

Sacar silenciadores
- Adicionar un enhancer
- Aumentar la tasa de transcripción (bajar los sitios de pausa)
- Aumentar la estabilidad del ARNm (algunos tienen secuencias que los desestabilizan)
- Afectar splicing (favorecer a una isoforma)
- aumentar estabilidad de proteína
- amplificación génica
 
Abundancia = tasa de síntesis – tasa de degradación

Mutaciones dominantes función :

nueva
Ine
onrorfeotl
alteran la proteína de manera que adquiere una función nueva
 
- expresión ectópica o heterocrónica cae dentro de esta categoría
 
- Ejemplos:
- alterar la especificidad de unión al ADN de una proteína (pasa a regular otros genes)
 
- alterar especificidad de interacciones proteína-proteína
 
- alterar la especificidad enzimática
 Dominantes negativos
- forma mutante interfiere con la función de la proteína salvaje
 
- basado en la idea que las proteínas funcionan mediante su interacción con otras proteínas
 
- el fenotipo se asemeja al de una mutación hipomórfica
 
- el fenotipo debería reducirse en presencia de copias extra de proteína salvaje

Dominante
negativo ejemplo 1
Dominantes
negativos
• Tetrámero en
que
todas las subunidades deben ser wt para tener función .

Mutación : 42 monómeros son mutantes : 1116 de los tetrámeros será wt .

Los modelos son simplificaciones

Siguiendo con el ejemplo anterior:

 
- incluso habiendo una mutación que en teoría afecte el 50% de la proteína producida
 
- la proteína mutante puede ser menos estable
 
- la proteína mutante puede tener menos afinidad por la wt
 
- feedback loops pueden llevar a producir más proteína.
 Dominante
negativo ejemplo %
En
(
algunos casos
,
aumentando la producción de una
proteina puede
,
tener un efecto dominante negativo ,

el 100% de la proteina la célula wt )

aunque en sea .

Complejo hetero trimériw

sobreproducción de
MAHOMA

ctoutacionesdonutnarrtes
Haploinsuficiencia
 
- Mutación nula causa un fenotipo en presencia de la copia salvaje
 
- Por lo general afecta aquellos genes/proteínas cuyos niveles están altamente regulados (morfógenos por
ejemplo)
 
- Más fácil de detectar en backgrounds que han sido sensibilizados por mutaciones que producen un
fenotipo modesto

CATEGORÍAS DE ENFERMEDADES HUMANAS

-Monogénicas
-Multifactoriales

-De herencia recesiva

-De herencia dominante

Los modelos o clasificaciones por lo general representan una simplificación de la realidad

Facilitan el entendimiento y comprensión del problema

- Facilitan su estudio
- Facilitan su disección
La clave está en no perder de vista que se trata de un modelo
   - no interpretar los datos exclusivamente bajo ese    modelo
   - adecuar el modelo cuando los datos “no encajan”
 ¿Cuál es la base celular y molecular de estas categorías?

Categorías de enfermedades humanas

MONOGÉNICAS
Uno o dos alelos “fuertes” causan el fenotipo
-Dominante
-Recesivo
-Ligado al X
-Mitocondrial

Simplemente Monogénicas?
Fibrosis Quística

Ejemplo de enfermedad autosómica recesiva

 
- Mutaciones en CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) (Riordan JR et al. Science 245,
1066–1073, 1989).
 
- Hipótesis: el análisis del espectro de mutaciones en CFTR permitirá establecer correlaciones genotipo-
fenotipo
 
- Pero… variabilidad en el fenotipo, sobre todo en lo que respecta al aspecto pulmonar de la enfermedad
 
- Mostrando las limitaciones de un modelo puramente monogénico.
 
- Llevando a la identificación de genes modificadores, en este caso del componente intestinal de la
enfermedad (Zielenski, J. et al. Nature Genet. 22, 128–129, 1999)
Las mutaciones o alelos siguen un patrón de herencia Mendeliano. Sin embargo el fenotipo no
necesariamente lo hace.
 
En la gran mayoría de los casos, la identificación de mutaciones en un determinado locus no nos permite
predecir el fenotipo que el paciente desarrollará
 
Esto se debe a la presencia de otros factores tanto genéticos como ambientales

Son estas enfermedades monogénicas “complejas” en realidad multifactoriales?

Multifactoriales:
–Muchos alelos contribuyen % del defecto
–Predisposición (contribuidores causales)
–Moduladores del “age of onset” (modificadores)
–Moduladores de la severidad (modificadores)
 
•Componente ambiental significativo
Categoría “intermedia”: enfermedades oligogenéticas

Mutaciones en un número reducido de genes contribuyen al fenotipo

–Efecto puede se aditivo o multiplicativo
–Efecto puede ser tanto causal como modificador

Características de una enfermedad oligogénica:

 - siguen siendo primariamente de origen genético

 - requieren de la interacción de mutaciones en un número “limitado” de genes

Gradiente entre enfermedades Mendelianas y complejas

- Donde se ubique una determinada enfermedad dependerá de:

- la existencia de un locus principal (CFTR)

 
- el número de loci involucrados
 
- la contribución de cada uno de ellos al fenotipo
 
- el impacto ambiental

CF estaría a la “izquierda” de esa curva (un gen mayor + modificadores)

 
-Schizophrenia podría estar en el “medio”
- predispocisión genética significativa (40–50% concordancia en estudios de gemelos)
 
- A la “derecha” podrían estar rasgos que afectan por ejemplo el comportamiento
 
- base genética poco conocida y cuantificable

Modelos
oligogénicos
 - A pesar de la participación de varios genes, los modelos mendelianos    han sido instrumentales en el
clonado de genes involucrados
 
   - Como se puede reconocer la “oligogenicidad”?
 
1. correlaciones genotipo-fenotipo (o falta de…)
 
2.diferencias genotípicas en modelos animales (diferentes backgrounds)
 
3. identificación de mutaciones que no se ajustan a un modelo monogénico
 
4. establecimiento de ligamiento a más de un locus o la inhabilidad de detectar ligamiento
Yborrelación genotipo -

fenotipo
Se clona un gen para una enfermedad:
 
• espectro de mutaciones
 
• correlación entre tipos y mutaciones particulares con aspectos del fenotipo
 
• Frecuentemente este tipo de estudio no arroja datos significativos
 
• Entonces se expande el modelo para tomar en cuenta otros factores
 
 
Ejemplos incluyen un gran número de enfermedades genéticas:
   - PKU
   - CF
   - familial amyotrophic lateral sclerosis (FALS)
       - defecto neurológico
       - transmitido en forma dominante
2) Diferencias fenotípicas en modelos animales
 
- Análisis de mutaciones en un background genético homogéneo
 
- Herramienta clave para la identificación de modificadores
 
- Ejemplo: FAMILIAL ADENOMATOUS POLYPOSIS (FAP) causada por mutaciones en “adenomatous
polyposis coli” (APC)
 
- Mutagénesis screen (ENU) deriva en el ratón Min (multiple intestinal neoplasia), causado por una
mutación en Apc
 
- El fenotipo sin embargo es modulado por un segundo locus: Mom1 (modifier of Min)

3) Identificación de mutaciones que no se ajustan a un modelo monogénico

 
- En muchos casos, la oligogenicidad se ha descubierto por azar
 
- Ejemplo: RETINITIS PIGMENTOSA (RP), una enfermedad genética y clínicamente heterogénea que
puede ser heredada como autosómica dominante, recesiva o ligada al X
 
- Primer modelo ejemplificando como la expansión de modelos teóricos resuelve datos mutacionales
contradictorios
 
- Modelo “digénico” Kajiwara et al. demostraron que en algunas familias se requieren mutaciones en
retinal outer segment membrane protein 1 (ROM1) y peripherin/retinal degeneration slow (RDS)
Un modelo de enfermedad oligogénica es el Síndrome de Bardet-Biedl

Otras características:
• Obesidad
• Retardo Mental
• Dificultades de aprendizaje
• Malformaciones de gónadas y renales