TEMA 11.

PATOLOGÍA MOLECULAR

La patología molecular es una subdisciplina de la patología que se centra en la comprensión de

los mecanismos bioquímicos y genéticos que causan enfermedades humanas.

• Identifica y examina las moléculas implicadas en enfermedades concretas.

• Intenta explicar cómo determinados cambios genéticos producen síntomas específicos
(explica los efectos de las mutaciones en el fenotipo).
• Integra la patología y la biología molecular

El objetivo es tratar de explicar cómo una mutación causa un determinado síntoma, ya que
explicar esto tienen importantes implicaciones clínicas.

En la imagen tenemos las fibras de colágeno. Las moléculas de colágeno que forman, por
ejemplo, parte de nuestras articulaciones, se sintetizan como moléculas de procolágeno. De
manera que los productos de dos genes dan lugar a estas moléculas que se ensamblan entre si
formando esta especie de trenza. La molécula de procolágeno se procesa para dar lugar a la
molécula de colágeno madura eliminando los extremos.

De manera que, se forma un precursor, se forma la molécula madura y, ahora, todas las triples
hélices se van ensamblando entre si para dar lugar a la fibrilla de colágeno y, posteriormente, a
la fibra de colágeno.

La enfermedad Síndrome de Ehlers-Danlos es causada por una mutación que impide que las
cadenas de pro-colágeno se procesen. Las moléculas de colágeno no se pueden ensamblar
correctamente, y la piel y los cartílagos adquieren una excesiva elasticidad.

Esto lleva a:

- Una elasticidad enorme de la piel. Piel suave, aterciopelada y elástica que presenta
hematomas con facilidad
- Articulaciones inestables, con una elasticidad extrema
- Vasos sanguíneos pequeños y frágiles
- Alteración del proceso de formación de cicatrices y curación de heridas

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1. Consecuencias según el tipo de mutación

Las mutaciones que pueden tener lugar en el ADN pueden afectar a distintas partes del gen.
Según que parte esté afectada las consecuencias van a ser diferentes.

Las mutaciones pueden ser:

- Mutaciones que afectan la regulación

- Mutaciones que afectan al procesamiento. Este procesamiento de RNA (splicing)
depende de secuencias muy chiquititas que se encuentran en la frontera del exón y el
intrón.
- Mutaciones en la región codificadora (exones).

Las consecuencias van a ser muy diferentes. Saber dónde tiene lugar y cómo tiene lugar es lo
que nos va a dar explicaciones.

- Mutaciones que afectan la regulación: afectan a la expresión de un gen (pero la

estructura proteica es normal). La mayor parte de estas mutaciones van a tener como
consecuencia la producción de una menor cantidad de la proteína correspondiente, lo
cual lleva a una pérdida de la función de la proteína. En una menor cantidad de casos
estas mutaciones pueden llevar a la producción de una mayor cantidad de proteína, lo
cual conlleva la ganancia de función.
- Mutaciones que afectan al procesamiento o a la región codificadora. Vamos a tener una
proteína anormal, pues estas mutaciones van a afectar a la secuencia de aminoácidos
de la proteína. En la mayor parte de los casos nos va a llevar a una proteína que va a
tener una actividad menor de lo normal, llevando a una pérdida de función. En un
pequeño número de casos esta proteína anormal puede tener una ganancia de función.

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1.1. Pérdida de función

Son mutaciones que de alguna manera disminuyen la actividad de la proteína o la inactivan por
completo.

Estas mutaciones suelen ser recesivas.

Lo normal es que las células “funcionen” correctamente con el 50% del producto génico
(correspondiente al alelo dominante).

Las mutaciones puntuales en un gen producen el mismo efecto patológico que las deleciones.

Ejemplo del albinismo:

En ordenadas está representa la actividad de la enzima tirosinasa y en el eje de abscisas vemos

los distintos individuos (homocigoto alelo dominante, heterocigoto y homocigoto alelo recesivo
(albino)). Se tiene que superar el umbral de actividad para no presentar albinismo.

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Las mutaciones puntuales en un gen producen el mismo efecto patológico (el mismo fenotipo)
que las deleciones del gen correspondiente. Es decir, sería lo mismo no tener el gen que tener
un gen que da lugar a una proteína inactiva.

Que una mutación sea de pérdida o ganancia de función solo tiene que ver con la consecuencia
que tiene esa mutación, no tiene nada que ver con la naturaleza de la mutación.

Ocasionalmente las mutaciones de pérdida de función pueden ser dominantes. Es decir, que el
heterocigoto será enfermo. Tenemos dos casos:

- Haploinsuficiencia: en estos casos el 50% de la dosis no es suficiente y provoca un

fenotipo anormal (POCO FRECUENTE). Es decir, que la mitad de la actividad de la enzima
no es suficiente para estar sano.
- Efecto dominante negativo: el polipéptido ha perdido su propia función y además
interfiere con el polipéptido del alelo normal.

1.2. Ganancia de función

Puede ser porque haya más cantidad de la proteína o porque la mutación haya generado una
proteína anormal que es más activa.

Estas mutaciones suelen ser dominantes.

Esto ocurre porque en estas mutaciones, aunque haya presencia de un alelo normal, esto no
impide la actividad anormal del alelo mutante.

Estas mutaciones de ganancia de función, a veces, implican que el producto haga algo nuevo.

2. Casos de mutaciones de pérdida de función

Un ejemplo concreto: Mutaciones de pérdida de función en el gen FQ (Fibrosis quística).

El gen que esta afectado en estos individuos determina un canal iónico transmembranal (CFTR)
que controla el transporte iónico a través de la membrana de las células. Esto lleva a un
desequilibrio iónico que tiene consecuencia en diversos tejidos, especialmente en los pulmones.

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La mayor parte de enfermos de FQ (70%) tienen la misma
mutación: una deleción de 3 nucleótidos (CTT) que tiene
como consecuencia la desaparición de la Phe 508. De
manera que en el individuo sano la secuencia de
aminoácidos es Ile-Ile-Phe-Gly-Val, mientras que en los
enfermos es Ile-Ile-Gly-Val. La ausencia de esta Phe impide
el correcto plegamiento del canal iónico, razón por la cual
no es transferido a la membrana de manera normal y es
transferido al retículo endoplasmático para ser degradado.

Mutaciones que afectan a la proteína CFTR

Esta mutación es la más frecuente, pero conocemos otras

mutaciones que incapacitan completamente la síntesis de la
proteína, que restringen la apertura del canal…etc. Todas ellas son mutaciones de pérdida de
función y que tienen la misma consecuencia: el canal iónico no funciona.

Conocemos muchos alelos diferentes del mismo gen que causan la misma enfermedad:
HETEROGENEIDAD ALÉLICA.

La heterogeneidad alélica es una característica común de los fenotipos debidos a pérdida de

función.

Ataxia telangiectasia: enfermedad autosómica recesiva progresiva, multisistémica,

caracterizada por una degeneración del cerebelo (y del sistema nervioso en general).

Produce:

- Ataxia (descoordinación en el movimiento)

- Telangiectasia (dilataciones de capilares pequeños y de los vasos superficiales)

Nos encontramos un montón de mutaciones de naturaleza distinta que dan lugar a esta
enfermedad (ejemplo clarísimo de heterogeneidad alélica).

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2.1. Mutaciones que alteran el normal procesamiento del mRNA

Muchas de las mutaciones de pérdida de función afectan a los exones. Otras mutaciones
producen esta pérdida de función, pero no porque alteren el exón, sino porque alteran el
procesamiento normal del mensajero.

Hay unas secuencias consenso, pero las secuencias más importantes son unas pequeñas
regiones que se encuentran en la frontera entre el exón y el intrón:

- La secuencia gt: es el sitio donador

- La secuencia ag: es el sitio aceptor.

Las mutaciones en los sitios donador y aceptor (QUE OCURREN EN EL DNA COMO TODAS LAS
MUTACIONES) son difíciles de prever, ya que dichas mutaciones pueden tener varias
consecuencias distintas. Estas mutaciones van a cambiar el tamaño del mensajero y van a
cambiar la secuencia de la proteína.

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Por ejemplo, si una mutación afecta a la guanina del sitio aceptor, podría producirse la
eliminación anómala del exón 2, porque la maquinaria de procesamiento ha reconocido la
secuencia gt y lo que hace ahora es buscar un sitio aceptor, pero como no lo encuentra hasta la
zona de más a la derecha porque el primero está mutado, se está formando un mRNA maduro
compuesto por los exones 1 y 3.

Sin embargo, en otros genes se ha visto que esta mutación en el sitio aceptor tiene como
consecuencia la retención del intrón 1. Esto ocurre porque al no estar presente el primer sitio
aceptor, la maquinaria ni siquiera reconoce el sitio donador, por lo que directamente se va a
buscar los siguiente sitios donadores y aceptores, y elimina el intrón 1.

*recordatorio: ¿Qué HAYA UN CODÓN STOP PREMATURO MODIFICA EL TAMAÑO DEL

MENSAJERO? NO, PORQUE ESTO SOLO SERÍA RECONOCIDO POR EL RIBOSOMA Y SOLO
AFECTARÍA AL TAMAÑO DE LA PROTEÍNA.

2.1.1. Activación de un sitio aceptor “críptico” dentro de un intrón

En otras ocasiones, estas mutaciones que alteran el procesamiento normal de RNA pueden
activar un sitio aceptor “crítico”.

Puede ocurrir que haya un sitio dentro de un intrón que se parezca mucho a un sitio aceptor,
pero no actúa como sitio aceptor porque no tiene la secuencia correspondiente.

Pero en el caso de la imagen, el cambio de la citosina por una guanina hace que aparezca un
sitio aceptor prematuro, que es el que funcionaría, quedando una parte del intrón (la que había
entre el sitio prematuro y el sitio real) dentro del mensajero maduro de manera incorrecta.

En resumen: son secuencias tan cortitas que cambios nucleotídicos dentro de un intrón en una
región que no era un sitio aceptor ahora se convierte en un sitio aceptor, y esto tiene como
consecuencia que toda una región quede incorrectamente incluida en el mensajero maduro.

2.1.2. Activación de un sitio donador “críptico” dentro de un exón

Puede ser también que el sitio donador críptico esté dentro de un exón.

Como estos sitios son tan pequeños, el cambio de un único nucleótido puede hacer que aparezca
un sitio donador dentro de un exón cuando normalmente no debería. Esto provoca que
desaparezca una región del mensajero maduro.

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Por donde tenga lugar esta activación de un sitio donador críptico puede provocar cambios de
fases, ya que los exones pueden ser no múltiplo de tres. Esto va a tener como consecuencia una
modificación de la fase de lectura y puede ser que, por puro azar se produzca la aparición de un
codón STOP prematuro.

La mayor parte de estas mutaciones son mutaciones que provocan pérdida de función.

2.2. Mutaciones de pérdida de función que se comportan como DOMINANTES

Hay ocasionalmente situaciones en las cuales mutaciones de pérdida de función se comportan

como dominantes.

El primer ejemplo es el de la haploinsuficiencia: el heterocigoto (que contiene la mitad de

actividad génica) no llega al umbral necesario para que la función fisiológica correspondiente se
desarrolle normalmente. Por lo tanto, el heterocigoto presentaría la enfermedad.

El segundo ejemplo es el del efecto dominante negativo: este tipo de efecto se produce casi
siempre en proteínas que funcionan como multímeros. De manera que, a partir de un gen se
produce una proteína que funciona en realidad como un multímero, una asociación de muchos
monómeros. En un individuo heterocigoto vamos a tener monómeros normales (del alelo
normal) y monómeros mutantes (del alelo portador de la enfermedad). En este caso el
heterocigoto mostraría los síntomas de la enfermedad ya que si no se puede formar el
multímero se inactiva la proteína.

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2.2.1. Un ejemplo de pérdida de función dominante por haploinsuficiencia

Es el caso del Síndrome de Waardenburg tipo 1.

Una única dosis génica es insuficiente para llevar a cabo la función normal del gen.

Síntomas:

• Sordera
• Ojos azules extremadamente pálidos u ojos de color diferente (heterocromía)
• Dificultad para enderezar completamente las articulaciones
• Probable disminución leve de la capacidad intelectual
• Ojos muy separados
• Mechón de pelo blanco

Entre los individuos que tienen una mutación en el gen correspondiente se producen, por
expresividad variable, uno o varios o todos los síntomas.

Se conocen muchas mutaciones distintas (heterogeneidad alélica), que en muchas situaciones

truncan la proteína inactivándola. En cualquier caso, son mutaciones de pérdida de función, sin
embargo, se comportan como dominantes.

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Las mutaciones que provocan la pérdida de función pueden ser: mutación sin sentido,
mutaciones por cambio de fase, mutaciones en los sitios de procesamiento o deleciones totales
o parciales del gen.

2.2.2. Ejemplo de efecto dominante negativo

Es la “enfermedad de los huesos de cristal” u osteogénesis imperfecta (OI)

El gen afectado determina la síntesis del colágeno tipo I, que forma la parte intrínseca de
nuestros huesos.

El Colágeno Tipo I es una triple hélice formada por dos cadenas producto del gen α1 y una
cadena producto del gen α2 (en los huesos y tejido conectivo).

Esta enfermedad caracterizada por una fragilidad excesiva en los huesos, como consecuencia de
una deficiencia congénita en la elaboración de colágeno (tienen menos colágeno de lo normal…)

En una situación normal tenemos el locus, el gen, que está en el cromosoma 17, que da lugar al
colágeno alfa1, y otro gen en el cromosoma 7 que da lugar al colágeno alfa 2.

Las moléculas de colágeno están formadas por hélices. Cada molécula de colágeno requiere dos
moléculas de alfa 1 y una molécula de alfa 2, de manera que en las hélices hay el doble de
cantidad de alfa1.

OI leve: las mutaciones que llevan estas personas son mutaciones que podemos llamar graves,
que son perfectamente inactivantes. En lugar de tener el doble de moléculas de alfa 1 que de
alfa 2, voy a tener la mitad de las moléculas de alfa 1, quedando el mismo número de moléculas
de alfa 1 que de alfa 2.

En consecuencia, solo se van a formar la mitad de las moléculas de colágeno. Al final nos sobran
moléculas de alfa 2, que como no han sido ensambladas en la triple hélice son degradadas.

Esta mutación se comporta como dominante, es un ejemplo de haploinsuficiencia.

OI grave (debilidad extrema en los huesos): cuando se analizan las mutaciones que llevan estas
personas se observa que las mutaciones provocan cambios en las proteínas que no son tan
graves como en la OI leve, se trata de mutaciones leves.

Esta mutación leve (rojo) no inactiva por completo a la proteína, sino que da lugar a una proteína
que tiene incluso capacidad de ensamblarse en la triple hélice. Se van a producir la mitad de las
moléculas de alfa 1 normales y la otra mitad anormales. El problema es que cuando estas
moléculas anormales se ensamblan en la triple hélice la desactiva por completo.

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De cada 4 moléculas de triple hélice que se sinteticen, solo 1 será una molécula de procolágeno
normal. Las otras 3 triples hélices son defectuosas, pues portarán una o dos moléculas de alfa 1
anormales.

Esta mutación se comporta como dominante, es un ejemplo de efecto dominante negativo.

2.3. Clasificación molecular de algunas enfermedades del tejido conectivo

Hay heterogeneidad de locus, clínica y alélica.

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3. Casos de mutaciones de ganancia de función

Los casos de ganancia de función son mucho menos frecuentes que los de pérdida de función.
LAS MUTACIONES DE GANANCIA DE FUNCIÓN SON DOMINANTES

Hay diversos mecanismos distintos por los cuales se puede producir una ganancia de función:

La heterogeneidad alélica es típica de mutaciones de pérdida de función. En el caso de

mutaciones de ganancia de función son mutaciones sutiles, no hay muchas mutaciones que
produzcan este efecto, así que es común que los enfermos presenten el mismo alelo mutante.

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Adquisición de un nuevo sustrato: en el caso de las enzimas la mutación puede afectar de tal
forma al centro activo, que la enzima sea capaz de reconocer a un nuevo sustrato. Se trata de
una herencia dominante, porque, aunque esté presente el alelo recesivo, este alelo con la
mutación va a reconocer a ese nuevo sustrato.

Sopreexpresión: si este hecho lleva a tener una concentración de la proteína anormal puede ser
perjudicialmente fisiológico y desencadenar unos síntomas.

Receptores permanentemente activos: una mutación puede dar lugar a un receptor que esté
permanentemente activo independientemente de que haya ligando o no.

Canal iónico abierto inadecuadamente: la mutación hace que el canal esté siempre abierto.

Gen quimérico: la región codificante queda bajo el control de otro promotor diferente, lo que
hace que se exprese en condiciones inadecuadas.

Agregación: puede ser que las proteínas producto del alelo mutante tengan tendencia a
agregarse.

3.1. Mutaciones de ganancia de función

Paramiotonía congénita

El producto del gen SCN4a forma un tipo de canal de

sodio abundante en las fibras musculares. Los canales
de sodio se abren normalmente para que los
músculos se exciten, y luego se cierran para que
termine la excitación (flujo de sodio= excitación-
relajación).

En el caso de esta enfermedad, la causa es una

mutación puntual en este gen que cambia la
estructura y la función del canal, haciendo que estén
abiertos durante más tiempo y, en consecuencia,
causando una mayor excitación (impide la correcta
relajación de la fibra muscular), anulando el ciclo
normal de contracción y relajación.

Leucemia mieloide crónica

Los individuos que presentan esta leucemia, en ellos se encuentra una anomalía cromosómica,
ya que en ellos se encuentra un cromosoma que se denominó cromosoma Philadelphia. En este
cromosoma se ha producido una traslocación
recíproca entre los cromosomas 9 y 22. Como
consecuencia de esto se va a generar una proteína
de fusión nueva que contiene parte del gen BCR y
parte del gen ABL. Esta proteína es oncogénica y es
la causa de este tipo de cáncer de las células
sanguíneas.

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Se produce el intercambio del material genético (translocación recíproca) entre los cromosomas
22(gen BCR) y el 9 (gen ABL). Como consecuencia, en el punto de translocación se ha producido
esta fusión génica, por lo que tenemos gran parte del gen ABL que está fusionado con el BCR, y
ahora todo este gen de fusión queda bajo el control del promotor BCR.

El gen ABL1 es una quinasa de tirosina que se expresa solo en condiciones específicas.

Ahora gran parte de este gen queda bajo el control del promotor de BCR que si se expresa
constantemente, por lo que muchas células madre se transforman en glóbulos blancos.

3.2. El potencial patogénico de las regiones repetidas

El hecho de que existan regiones repetidas puede llevar a situaciones de inestabilidad genómica
y patogénesis, ya que se pueden producir en estas regiones:

- Entrecruzamiento desigual
- Deslizamiento de cadenas

3.2.1. La recombinación desigual puede provocar duplicaciones y deleciones

Una región del cromosoma de arriba (en azul más oscuro) es repetitiva. Cuando se produce la
recombinación genética durante la meiosis, para que se produzcan estos hechos tiene que haber
homología de secuencia en las cadenas. En este caso, en lugar de recombinar la unidad de
repetición 2 con la 2, la 3 con la 3...como todas las unidades de repetición son homólogas entre
si (son secuencias repetitivas) ocurre un entrecruzamiento desigual, recombinándose la unidad
1 de repetición con la unidad 2 de repetición. Esto lleva a duplicaciones y deleciones.

Se estarían produciendo cromosomas que tienen un menor número de repeticiones o un mayor

número de repeticiones.

Esto puede ocurrir también entre cromátidas hermanas.

Esto puede tener consecuencias patológicas.

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3.2.2. Las mutaciones de pérdida y ganancia de función en un mismo gen pueden causar
diferentes patologías

Síndrome de Charcot-Marie-tooth

El gen responsable de la enfermedad CMT1A (azul) está flanqueado (tiene a ambos lados) por
secuencias de tipo repetitivo (naranjas). En este caso, como estas secuencias son iguales, puede
ocurrir que durante la meiosis se produzcan recombinaciones entre la repetición “de la derecha”
de una cromátida con la repetición “de la izquierda” de la otra cromátida.

Esto nos llevaría a un cromosoma que tendría un gen Charcot-Marie-Tooth y otro gen Charcot-
Marie-Tooth, es decir, tendrían el gen Charcot duplicado.

Si un individuo, como este, es heterocigótico para la duplicación tendría 3 copias del gen y, por
tanto, tendría más producto génico de lo que es normal. Esta cantidad extra de producto génico
es el que provoca la enfermedad de Charcot-Marie-Tooth.

*el mismo síndrome de Charcot-Marie-Tooth también puede producirse por una mutación
puntual activadora. El individuo que tenga el alelo mutante tendrá una actividad mayor de lo
normal.

Por lo tanto, este síndrome puede producirse por:

- Ser heterocigótico para una duplicación

- Ser heterocigótico para una mutación de ganancia de función activadora

Si se hubiese producido este cromosoma debido a una recombinación recíproca se tiene que
haber producido también un cromosoma que carece del gen CMT1A.

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Si un individuo es heterocigótico para esta mutación que es una deleción va a tener la mitad del
individuo normal, lo cual produce otro síndrome distinto que es la neuropatía tomaculosa
(HNPP). Este síndrome también puede ser provocado por una mutación puntual de pérdida de
función.

3.3. “Deslizamientos” de la polimerasa en regiones repetidas

En estos casos son repeticiones pequeñas de unos pocos nucleótidos. Cuando estas repeticiones
están en tándem, cuando la polimerasa va a replicar el material genético se pueden producir en
ella deslizamientos.

La secuencia de color azul es una secuencia que durante el proceso de replicación funciona como
DNA molde, de manera que la polimerasa está sintetizando la hebra de color rojo conforme
avanza.

Como estas secuencias son repetitivas se puede producir la situación siguiente:

La polimerasa está sintetizando la nueva hebra de ADN a partir de la molde (con 6 repeticiones).
Puede ser que en la nueva hebra que se está sintetizando se produzca un bucle porque lo que
acaba de sintetizar la polimerasa se puede unir a una repetición u otra. Tras formarse este bucle
la polimerasa sigue sintetizando y, como resultado, me aumenta el número de repeticiones:
INSERCIÓN.

Si donde se produce el bucle es en la hebra molde voy a obtener una nueva hebra con un menor
número de repeticiones: DELECIÓN.

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3.4. Mutaciones dinámicas patogénicas: expansión de tripletes

Esta es la base de un tipo de enfermedades llamadas: mutaciones por expansión de triplete.

En el alelo mutante se produce un aumento anormal en el número de repeticiones de una

secuencia, que en muchas veces es un trinucleótido (triplete).

Debido a estos deslizamientos de la polimerasa puede ocurrir que el número de repeticiones

llegue a un número que es patológico. Existe cierto umbral a partir del cual aparecen los
síntomas de la enfermedad.

En estas enfermedades es muy

normal los fenómenos de la
ANTICIPACIÓN. Esto es debido a
que, generación tras generación se
acumulan más repeticiones y, al
aumentar el número de
repeticiones, aumenta la gravedad
de los síntomas y disminuye la edad
de aparición.

3.4.1. Expansión de tripletes fuera de la región codificante

SÍNDROME DE X-FRÁGIL

- Es la causa más común de retraso mental hereditario (1/1000 varones)

- La severidad de los síntomas aumenta con el número de repeticiones

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Cuando el número de repeticiones excede de 200, toda la región se hipermetila (en la C del CG),
el promotor se inactiva y el gen se silencia.

Esta repetición anormal de tripletes está en la región 5’UTR del gen. Las repeticiones en esta
región no me deberían de importar, pero el problema es que cuando hay un número
anormalmente grande de repeticiones CGG se estimula la hipermetilación, lo cual provoca la
inactivación del promotor y la silenciación del gen.

DISTROFIA MIOTÓNICA

En este caso la repetición está en la región 3’-UTR, donde también cabría esperar que esto no
tuviera efecto en la síntesis de la proteína.

Pero estas repeticiones secuestran a factores que están implicados en el procesamiento del
RNA, lo cual no solo afecta al procesamiento de este gen, sino que también afecta al
procesamiento de otros genes importantes. Estas repeticiones hacen una especie de sumidero
de factores.

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3.4.2. Expansión de tripletes dentro de la región codificante

ENFERMEDAD DE HUNTINGTON

La secuencia que se repite si está en este caso dentro de la región codificante. Estas proteínas
con unos enormes tramos de poliglutamina tienen tendencia a agregarse y esto es lo que
provoca los síntomas de la enfermedad.

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