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CLASE 6: TIPOS DE MUTACIONES EN

BACTERIAS

MSc. Rosa María Liñán Abanto


MUTACIONES

o Cualquier alteración en la secuencia de ADN o


cualquier modificación heredable.
o No necesariamente son irreversibles, ya que
existen mecanismos de reparación y reversión.
o Pueden ser espontáneas o inducidas por agente
mutágenos.
o Es la base esencial del proceso evolutivo
TIPOS DE MUTACIONES

SEGÚN LA EXTENSIÓN DEL MATERIAL GENÉTICO AFECTADO

SEGÚN SU ORIGEN

GÉNICAS GENÓMICAS CROMOSÓMICAS


Los efectos son Afecta a Afecta a la
puntuales localizados amplias estructura del
en un determinado porciones del cromosoma
gen. genoma

Espontáneo o interno Inducido o externo

SEGÚN SU EFECTO

Perjudiciales Neutras Beneficiosas


Mutaciones Génicas
Tipo Agente causal Consecuencias
Sustitución
Transición: pirimidina sustituida por Análogos de bases, radiación UV, Si se forma un codón sin sentido,
pirimidina o purina sustituida por agentes desaminantes, péptido trunco.
purina. alquilantes. Espontánea. Si se forma un codón de sentido
erróneo, proteína alterada.
Transversión: purina sustituida por Espontánea.
pirimidina o viceversa.
Deleción
Macrodeleción: supresión de un segmento HNO2, radiación, agentes Péptido trunco
grande de nucleótidos alquilantes.
Microdeleción o deleción puntual. HNO2, radiación, agentes Corrimiento del marco de lectura,
Supresión de 1 o dos nucleótidos alquilantes. que casi siempre da lugar a un
codón sin sentido y a un péptido
trunco.
Adición
Macroadición: inserción de un segmento Transposones o secuencias de Gen interrumpido que da lugar a un
grande de nucleótidos inserción producto trunco.
Microadición o adición puntual: Inserción Acridina Corrimiento del marco de lectura,
de 1 o 2 nucleótidos. que casi siempre da lugar a un
codón sin sentido y a un péptido
trunco.
Inversión Transposones o secuencias de Diversos efectos posibles
inserción
MUTACIONES GENICAS

Pueden afectar a:

Una secuencia descriptora o moduladora: afecta a la


expresión de un operón completo, aumentando o
disminuyendo su expresión

Un gen estructural: su efecto se analiza a nivel del


nucleótido, del código o de la función
A. A NIVEL DEL NUCLEOTIDO

Mutaciones puntuales.
Cuando afectan normalmente a un solo nucleótido.
Se cambia un nucleótido por otro (Sustitución)

Mutaciones de cambio de fase:


Cuando se añade o quita uno o más nucleótidos se suele afectar a la
fase de lectura de los codones.
Se pueden dar por inserción: desfase+1, +2 etc.
Se puede dar por deleción: desface-1,-2 etc.
B. NIVEL DEL CODIGO

 El cambio de una letra por otra en la secuencia de un gen tendrá un


efecto
 fenotípico mayor o menor dependiendo del cambio que produzca en la
proteína mutada.
 Cuando una letra mutada por transición ocupa durante la traducción la
tercera posición de un codón, tiene una muy elevada probabilidad de
no afectar al aminoácido codificado
 La probabilidad de alterar al aminoácido aumenta si se trata de una
transversión y es aún mayor si la posición en el triplete es una de las
dos primeras.
 Mutación silenciosa: cuando no se altera el significado del codón,
mutación a nivel del nucleótido
Mutación sin sentido: cuando el cambio conduce a un codón de fin de
mensaje
Mutación de cambio de sentido: cuando el cambio en la letra conduce a un
cambio en el aminoácido

No todas las mutaciones de cambio de sentido tienen el mismo efecto


fenotípico:

Mutación de cambio conservador : cuando una aminoácido es cambiado por


otro que tiene el mismo o similar grupo funcional
Ejemplo: asparagina por glutamina

Mutación de cambio radical: cuando un aa es cambiado por otro


radicalmente distinto.
Ejemplo: lisina por leucina

De los 576 cambios posibles que pueden darse por sustitución de una letra
por otra el 25% son silenciosas, el 71% cambia de aa y el 4% son sin
sentido.
De todos los cambioa de aa el 53% son conservadores y el 47% son radicales
C. NIVEL DE LA FUNCION

Mutaciones silenciosas : las sustituciones no afectan a la


funcionalidad de una proteína y por lo tanto el fenotipo.

Mutaciones de perdida o cambio de función: cuando producto de las


sustituciones de aa la proteína pierde su función.
Ejemplo: una mutación Lact- hace al represor de la lactosa no
funcional.
una mutación en el gen rpsl, que codifica una de las
proteínas ribosómicas, convierte al ribosoma y a la bacteria
resistente a la estreptomicina.

Desde el punto de vista evolutivo es el nivel de la función el que


tiene una consideración definitiva.
EFECTOS FENOTIPICOS DE LAS MUTACIONES

 DEL FENOTIPO AL GEN


Búsqueda de las mutaciones
El fenotipo de una mutación revela la función del gen afectado

 ANALISIS MOLECULAR DEL FENOTIPO


Mutaciones puntuales de la región codificadora
Mutaciones rezumantes
Mutaciones condicionales
Mutaciones dominantes y recesivas
Dominantes negativas
 SUPRESION DEL FENOTIPO MUTANTE
Búsqueda de las mutaciones

 Las mutaciones hacen que el fenotipo de los individuos se


diferencien en algún carácter respecto del individuo normal que
sirve de referencia ( Fenotipo silvestre)

 Los genes pueden ser sometidos a la disección molecular y en


algunos casos a pesar de haber diferencias en la secuencia ni
hay cambios aparentes en el fenotipo , e incluso muchas veces ni
siquiera introducen cambios en la proteína codificada.

 Potencial esencial para sobrellevar los cambios del ambiente.


 Las mutaciones espontáneas generalmente incluyen
mutaciones silenciosas
 Otras mutaciones pueden ser desventajosas dando
lugar a fenotipos perjudiciales para la especie que
pueden ser eliminados por selección natural.
 En algunos casos las mutaciones pueden ser
ventajosas → ocurren rara vez, pero esta ventaja
potencial esencial para sobrellevar los cambios del
ambiente.
El fenotipo de una mutación revela la
función del gen afectado

 El fenotipo constituye una poderosa herramienta biológica que


permite establecer una relación directa entre un gen y una
función del organismo.

 El fenotipo mutante permite concluir que hay un gen concreto


( el mutado) que en la cepa silvestre es responsable de hacer
bien la característica que se altera con la mutación.

 La posición del gen en el cromosoma se desconoce, que


proteínas codifican, pero se demuestra por deducción que ese
gen existe y que participa en ese carácter .
 Los genes de cualquier microbio son los responsables de todas
sus propiedades, pero no todas estas propiedades son
igualmente importantes para la supervivencia, por lo tanto, la
trascendencia del fenotipo que causa una perdida de función
depende de cual sea la función que falta.

 Cualquier mutación de pérdida de función en los genes esenciales


conduce a un fenotipo letal

 Existen genes que son esenciales en unas condiciones fisiológicas


y no en otras. Un ejemplo viene a ser los mutantes en rutas
metabólicas: mutantes Leu- son defectuosos en la biosíntesis de
leucina →no crece en medios sin leucina y se evidencia su
fenotipo de auxotrofia
ANALISIS MOLECULAR DEL FENOTIPO

Los fenotipos mutantes es consecuencia de un defecto molecular


del ADN

 La mutación puede afectar a cualquier componente del gen:


regiones codificadoras y no codificadoras.
 Se puede originar una proteína alterada ( o un ARNr o ARNt)
 En los microorganismos la proporción de secuencias
codificadoras es muy alta por lo tanto son las mas afectadas por
las mutaciones con efectos fenotípicos.

 Se puede hacer el análisis:


Mutaciones puntuales de la región codificadora
Mutaciones rezumantes
Mutaciones condicionales
Mutaciones dominantes y recesivas
Dominantes negativos
Mutaciones puntuales de
la región codificadora :

 Las mutaciones en la primera base del codón son las que


originan cambios funcionales con mayor probabilidad.
 Sin embargo a veces la proteína no pierde totalmente su
función
 En las proteínas con más de un dominio esencial las
mutaciones puntuales pueden alterar solo uno de ellos.
 Ejemplo: en una proteína que funciona molecularmente como
factor de transcripción se puede inactivar por mutación solo el
dominio necesario para unirse al ADN, o solo el dominio de
unión a la ARNpol, manteniéndose las otras funciones activas.
Mutaciones rezumantes

 Son mutaciones que reducen la actividad de una proteína


hasta hacerla limitante pero sin llegar a eliminarla
(pérdida parcial de función)

 Generan fenotipos rezumantes de complejo análisis


genético por lo poca claridad con que se manifiesta.

Ejemplo: la mayoría de mutaciones que afectan a la


maquinaria de síntesis de proteínas son de este tipo,
provocando frecuentemente un fenotipo de crecimiento
lento.
 Muchas veces este tipo de mutaciones se convierten en
letales

 Algunos procedimiento pueden conllevar este tipo de


mutaciones a condiciones letales o pérdida total de función

Aumento de actividad biosintética por incremento de


temperatura

Inhibición parcial de la traducción: añadir pequeñas


dosis de estreptomicina (bacterias) o con cicloheximida
(hongos) reduce levemente la actividad de los
ribosomas y no llega a ser letal en organismos
silvestres pero si en los mutantes.
Mutaciones condicionales

 Son mutaciones que permiten que las condiciones ambientales


mantengan activa o inactiva una determinada proteína mutante.
 Son muy útiles para estudiar el fenotipo que se produce por la
perdida de función en genes esenciales para determinar así su
función precisa en el microorganismo.
 La sensibilidad del crecimiento a alta temperatura fue el primer
parámetro empleado para determinar este tipo de mutaciones

La enorme utilidad de mutaciones condicionales es


que un simple control de temperatura permite
conectar o desconectar una única función de la célula
 Ejemplo: mutantes de bacterias que crecen
normalmente a 30°C pero son letales a 42°C (
Fenotipo termosensible) han permitido
identificar multitud de genes que codifican
funciones esenciales como la maquinaria de
síntesis de ADN, la de la expresión de los genes,
etc.
 También se han identificado mutantes
criosensibles que propician que la proteína no
adopte su estructura funcional a una temperatura
inferior a 25°C pero si por encima de 35°C
Mutaciones dominantes y recesivas
 En microorganismos haploides no es aplicable el concepto de
dominancia o recesividad : una proteína proviene de un solo alelo y
este es el que determina el fenotipo del microorganismo.
 Pero puede existir duplicación de genes y se puede presentar una
situación de heterocigosis lo que permite ensayar la dominancia y la
recesividad
 En una bacteria se puede presentar diploidia parcial o merodiploide
 Las mutaciones de perdida de función son siempre recesivas.
 Lac- : es un mutante que tiene el promotor disfuncional, no transcribe
al operón
Dominantes negativos

 En general :
Pérdida de función: recesivo
Ganancia de función : dominante

 Esta norma es muy general para productos génicos que actúan


como monómeros.
 Cuando la proteína es un complejo , la perdida de función puede
actuar en forma dominante.
 Ejemplo: cuando existen dos alelos uno produciendo una proteína
funcional y el otro la proteína mutante, si el producto génico es
un homodímero , los complejos que tienen uno o dos proteínas
mutantes no son funcionales y solo los dímeros que tienen las
dos proteínas silvestres son funcionales.
Supresión del fenotipo mutante

 El fenotipo letal puede ser suprimido cultivando al microorganismo en


las condiciones en las que dicha proteína no es esencial.

 Por ejemplo un mutante auxotrófico para leucina es letal en un medio


sin este aa, pero la mutación pasa desapercibida en un medio con
leucina.
 La supresión puede ser:

Compensación de la estructura
Compensación de la función
Compensación en la traducción
A. Compensación de la estructura

Cuando una mutación puntual origina el cambio de un


aminoácido por otro ( mutación de cambio de sentido) con la
alteración de la estructura de la proteína, una segunda
mutación puede compensar a la primera y restaurar la
estructura perdida:
Segunda mutación puede originar:
 Supresión intragénica
Porque reemplaza el aa afectado por otro igual o
equivalente
Porque una segunda mutación en otra posición
compensa la estructura
 Supresion extragénica o intergénica
En complejos proteicos la mutación puede producir una
perdida de función por afectar a la estructura secundaria y
la segunda mutación que restaura la función puede estar
localizada en la otra proteína con quien interacciona.
Compensación de la función

Cuando el fenotipo de una mutación puede revertirse


extragénicamente ( con una segunda mutación en otro gen ) puede
concluirse que las dos proteínas afectadas interaccionan
físicamente entre ellas o actúan funcionalmente sobre la misma
actividad biológica

Compensación en la traducción
Los primeros casos de supresión descritos corresponden a la
supresión de las mutaciones causadas por un cambio en la fase de
lectura (mutaciones de desfase) y por las causadas por un fin de
mensaje (mutaciones sin sentido )
Las mutaciones de desfase se pueden revertir por la inserción de
uno o más aa distintos entre la mutación original y la mutación
supresora
DEL GEN AL FENOTIPO

 Existen dos aproximaciones que permiten establecer la relación entre


un gen y una función:

Primer caso :Consiste en identificar todos los genes posibles


que por mutación puedan dar lugar a un fenotipo concreto
Segundo caso: consiste en identificar todos los fenotipos
posibles que por mutación se pueden generar de un gen
concreto

 El segundo caso es bastante complejo porque los fenotipos posibles


son innumerables y para abordar este objetivo solo se pueden
establecer grandes bloques de fenotipos prototipos que den una
pista general de su función

 Otro problema es que el número de mutaciones dirigidas que se


pueden examinar suele ser limitado y normalmente se examina el
fenotipo de perdida de función causada por una deleción o por una
rotura con transposón .
FENOTIPOS MUTANTES

 Las mutagénesis se realizan induciendo daños


en el ADN con UV, o modificando bases con
tratamientos químicos (nitrosoguanidinas),
Metanosulfonato de etilo (EMS) o de forma
biológica induciendo la mutagénesis en
bacterias con transposones

 Todos los mutágenos tienen una acción al


aleatoria por lo que la frecuencia de mutantes
con un determinado fenotipo común son
reflejo de la proporción de genes implicados
en ese carácter
AGENTES MUTAGENICOS

• Radiación UV solar 
Dimerización de
pirimidinas (T·T, C·T y
C·C.)

• Rayos X y gama 
Ionizan a las moléculas
que rodean el ADN
generando especies
altamente reactivas que
rompen una o ambas
cadenas.
 Estos mutantes se obtienen por azar y se seleccionan
exclusivamente por compartir un mismo fenotipo por lo que
algunos pueden poseer mutaciones del mismo gen.

 El análisis genético de estos mutantes permite averiguar cuales


corresponden al mismo gen .

 La probabilidad de que un mutante manifieste dos fenotipos es


orientativa de la proporción de genes que pueden participar en
ambos caracteres.

 La búsqueda de genes implicados en un fenotipo se puede


realizar también por ingeniería genética, en los que todos los
ARNm de una célula, representados por sus ADNc, pueden
colocarse en un promotor regulable y alterar el fenotipo silvestre
por superproducción o por desregulación.


Cuadro 1: frecuencia de mutantes con fenotipo etanol- sensible (es),
termosensibles (ts) y auxótrofos (aux) o que muestran dos
de estos fenotipos a la vez entre las células supervivientes
a una mutagénesis con EMS( etilmetanosulfonato)

es ts aux

es 0,029

ts 0,011 0,035

aux 0,006 0,004 0,025


La colonia como unidad de búsqueda de fenotipos mutantes

 La colonia es el resultado de las divisiones sucesivas de la


célula bacteriana, todas las células son genéticamente
idénticas (clónicas )

 La colonia es la unidad mas importante para la identificación de


células mutantes porque constituye un clon.

 En general los principales sistemas en los que se identifican


colonias mutantes emplean procesos de

o réplica,
o selección y
o contraselección
Réplica :Mutantes metabólicos

 Búsqueda de mutantes auxótrofos por réplica de colonias

Esta técnica permite que existan mutantes viables en muchas rutas


biosintéticas porque aun sin poder sintetizar un compuesto
esencial , el defecto de la ruta se suple con la adición de producto
final.
Esta propiedad sirve para identificar prácticamente cualquier tipo
de mutante auxotrófico mediante un sistema de réplica en caja.
Ejemplos: para buscar mutantes auxotróficos para aminoácidos
pueden sembrarse células mutagenizadas en cajas de Petri con
medio abundante en aas.
En este medio crecen colonias protótrofas como auxótrofas y
ambos tipos son indistinguibles, pero de estas colonias se puede
hacer una réplica en medio sin aminoácido donde las que son
auxotrofas no crecen

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