Nombre: María Montserrat Zárate Ávila Grupo: 3ºC Materia: Análisis de Bioproductos Fecha: 14 de agosto del 2020

Métodos de Separación Diversos

Nombre Características y Descripción Imagen ejemplo

Separaciones de Proporciona algunas capacidades de separación únicas, en particular
fluidos supercríticos para materiales complejos como las muestras ambientales, de
alimentos y farmacéuticas. El sistema de bombeo debe incluir un
cuerpo de bomba enfriado para mantener el fluido en el estado líquido
y debe ser posible controlar y medir la presión de columna.
Los perfiles de presión más comunes utilizados en la SFC a menudo
son constantes (isobáricos) durante un periodo, seguido por un
acercamiento lineal o asintótico hasta una presión final. Además de la
programación de presión, se ha utilizado la programación de
temperatura y los gradientes de fase móvil. Se utilizan tanto las
columnas empacadas como las columnas tubulares abiertas en
cromatografía de fluidos supercríticos. También se pueden utilizar
columnas muy largas debido a que la viscosidad de los fluidos
supercríticos es muy baja. La fase móvil más utilizada para
cromatografía de fluidos supercríticos es el dióxido de carbono.
Detectores: detector de ionización por flama, detector de absorción
visible, detector de dispersión de luz y espectrometría de masas.
Cromatografía de Cromatografía en la que la fase estacionaria es una capa fina sobre la
capa fina superficie de una placa adecuada. La fase móvil es transportada sobre
la superficie por acción capilar. Las ventajas de este procedimiento
son la velocidad y bajo costo de los experimentos. El aparato es más
sencillo y su operación es menos costosa. Una placa de capa fina se
prepara al esparcir una disolución acuosa de un sólido finamente
molido en una superficie limpia de una placa de vidrio o plástico o un
portaobjetos de microscopio. Normalmente la muestra es aplicada
como un punto a 1 o 2 cm del límite de la placa. La aplicación manual
de muestras se realiza al poner en contacto un tubo capilar que
 contiene la muestra con la placa o mediante el uso de una jeringa.
También existen dispensadores mecánicos, los cuales aumentan la
precisión y exactitud de la aplicación de la muestra. El revelado de
placas es el proceso mediante el cual una muestra es transportada a
través de la fase estacionaria mediante una fase móvil. Una vez que el
revelador ha atravesado la mitad o dos terceras partes de la longitud de
la placa, la placa se retira del contenedor y se seca. El proceso de la
localización de analitos en una placa de capa fina es llamado
visualización.
Cromatografía en Las separaciones por cromatografía en papel se realizan de la misma
papel manera que aquellas en placas de capa fina. Los papeles son
fabricados a partir de celulosa de gran pureza con un estricto control
sobre la porosidad y el grosor. Estos papeles contienen suficiente agua
adsorbida para conformar la fase estacionaria acuosa. Sin embargo,
puede hacerse que otros líquidos desplacen al agua, proporcionando un
tipo distinto de fase estacionaria.
Existen papeles especiales que contienen un adsorbente o una resina
de intercambio iónico, permitiendo la cromatografía en papel de
adsorción e intercambio iónico.
Electroforesis capilar Método de separación basado en las velocidades diferenciales de
migración de especies con carga en un campo eléctrico de corriente
directa aplicada. Tiene la capacidad para separar macromoléculas con
carga que son de interés para bioquímicos, biólogos y químicos
clínicos. La instrumentación para electroforesis consta de un capilar
lleno de disolución amortiguadora que se extiende entre dos depósitos
de ésta, que también contiene electrodos de platino. La introducción de
la muestra se realiza en uno de los extremos y es acompañada por una
inyección electrocinética o de presión. La detección se realiza en el
extremo opuesto. Se puede invertir la polaridad positiva del alto
voltaje para permitir la separación de aniones. La diferencia de presión
puede ser inducida al aplicar un vacío en el extremo del detector o al
elevar la muestra. Detectores: espectrometría de absorción,
 fluorescencia, lentes térmicos, raman, quimioluminiscencia y
espectrometría de masas.
Cuando se aplica un alto voltaje a través de un tubo capilar de sílice
fundida que contiene una disolución amortiguadora, normalmente
ocurre un flujo electroosmótico en el cual el disolvente migra hacia el
cátodo. La velocidad del flujo electroosmótico es mayor que las
velocidades electroforéticas de migración de los iones individuales y
se convierte efectivamente en la bomba de la fase móvil. La
electroósmosis no siempre es deseable. La movilidad electroforética es
la proporción de la velocidad de migración de un ion con el campo
eléctrico aplicado.
Electromatografía Se puede aplicar a la separación de especies neutras y proporciona
capilar separaciones altamente eficientes en microvolúmenes de disolución de
muestra sin la necesidad de los sistemas de bombeo de alta presión
requeridos en otros métodos. La fase móvil es transportada a través de
una fase estacionaria por flujo electroosmótico. El bombeo
electroosmótico conduce a un perfil de bloque plano, en lugar del
perfil parabólico que resulta del flujo inducido por presión. El perfil
plano conduce a bandas más estrechas y, por lo tanto, a altas
eficiencias de separación.
Electrocromatografía Técnica de electroseparación menos madura. En este método, un
en columna disolvente polar es conducido por un flujo electroosmótico a través de
empacada un capilar que está empacado con un embalaje de fase inversa. Las
separaciones dependen de la distribución de las especies del analito
entre la fase móvil y la fase líquida estacionaria mantenida en el
embalaje. La figura 34.13 muestra un electrocromatograma típico para
la separación de 16 hidrocarburos poliaromáticos en un capilar de 33
cm de longitud con un diámetro interno de 75 µm. La fase móvil
consistía en acetonitrilo en una disolución de borato de sodio 4 mM.
La fase estacionaria consistía en partículas de octadecilsílice de 3 µm.
Cromatografía Se introduce un surfactante a un nivel de concentración en el cual se
capilar forman micelas. Las micelas se forman en disoluciones acuosas
electrocinética cuando la concentración de una especie iónica que tiene una cadena
micelar larga hidrocarbonada se aumenta por encima de un cierto nivel
llamado concentración micelar crítica. En este punto, el surfactante
comienza a formar agregados estéricos conformados por entre 40 y
100 iones con sus colas hidrocarbonadas en el interior del agregado y
sus extremos con carga en el exterior, expuestos al agua. Las micelas
constituyen una segunda fase estable que puede incorporar compuestos
no polares en el interior de hidrocarburo de las partículas,
solubilizando las especies no polares. Esta técnica parece ser
particularmente útil para separar moléculas pequeñas que son
imposibles de separar por electroforesis tradicional.
Fraccionamiento Las separaciones se llevan a cabo en un canal de flujo delgado en
campo–flujo forma de listón. Por lo general, el canal es cortado a partir de un
espaciador delgado e intercalado entre dos paredes. Se aplica un
campo eléctrico, térmico o fuerza centrífuga de forma perpendicular a
la dirección del flujo. De manera alternativa, se puede utilizar un flujo
cruzado perpendicular a la dirección del flujo principal. La muestra es
inyectada en la entrada del canal. Después, el campo externo es
aplicado a lo largo de la cara del canal. En presencia del campo, los
componentes de la muestra migran hacia la pared de acumulación a
una velocidad determinada por la fuerza de la interacción del
componente con el campo. Los componentes de la muestra alcanzan
rápidamente una concentración de estado estacionario cerca de la
pared de acumulación. El grosor promedio de la capa del componente l
está relacionado con el coeficiente de difusión de la molécula D y con
la velocidad de campo inducido U hacia la pared. Cuanto más rápido
sea el desplazamiento del componente en el campo, más delgada es la
capa cercana a la pared. Cuanto mayor sea el coeficiente de difusión,
más ancha será la capa.
 FFF de Método más utilizado. En esta técnica, el canal es enrollado y
sedimentación colocado en una canasta de centrífuga, los componentes con la mayor Aparato de
masa y densidad son conducidos a la pared por la fuerza de Sedimentación.
sedimentación (centrifugación) y eluyen al último. Las especies de
menor masa son eluidas primero. Existe una selectividad alta entre
partículas de diferente tamaño en el FFF de sedimentación. Debido a
que las fuerzas de centrifugación son relativamente débiles para las
moléculas pequeñas, el FFF por sedimentación es más aplicable para
las moléculas con masas moleculares mayores que 106. Sistemas como
polímeros, macromoléculas biológicas, coloides naturales e
industriales, emulsiones y partículas subcelulares parecen ser
adecuados para la separación mediante de sedimentación.
FFF eléctrico Se aplica un campo eléctrico perpendicular a la dirección del flujo. La
retención y separación ocurren con base en la carga eléctrica. Las
especies con la mayor carga son conducidas de manera más eficiente
hacia la pared de acumulación. Las especies con menor carga no son
tan compactas, sobresalen más hacia la región de mayor flujo y son
eluidas primero mientras que las de mayor carga son retenidas
mayormente.
FFF térmico Se aplica un campo térmico perpendicular a la dirección del flujo al
formar un gradiente de temperatura a través del canal de FFF. La
diferencia de temperatura induce la difusión térmica en la cual la
velocidad de movimiento está relacionada con el coeficiente de
difusión térmica de las especies.
El FFF térmico es particularmente adecuado para la separación de
polímeros sintéticos con masas moleculares en el intervalo de 103 a
107. Los polímeros de bajo peso molecular parecen ser mejor
separados mediante métodos de exclusión molecular. Además de los
polímeros, se han separado partículas y coloides mediante FFF
térmico.
FFF de flujo El campo externo es reemplazado por un flujo lento cruzado del
líquido transportador. El flujo perpendicular transporta material hacia
la pared de acumulación de manera no selectiva. Sin embargo, el
grosor de las capas de estado estacionario es diferente para los
diversos componentes, porque dependen no solo de la velocidad de
transporte sino también de la difusión molecular. Las distribuciones
exponenciales de diferentes grosores son formadas como en el normal.