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CROMATOGRAFIA
Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de
técnicas utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias,
en la separación de componentes de las mezclas y en la purificación
de compuestos. Esta técnica es muy efectiva y por lo tanto se utiliza
tanto a nivel de investigación como a nivel industrial. Aunque
actualmente existen variaciones de la técnica dependiendo de las
necesidades o el tipo de sustancias a investigar, todos los sistemas
contienen una fase estacionaria y una fase móvil; la fase estacionaria
puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma
posición, mientras que la fase móvil puede ser un líquido o un gas que
corre a través de una superficie y de la fase estacionaria. Los
componentes en una muestra a analizar se irán distribuyendo entre
estas dos fases, a medida que la fase móvil atraviesa la fase
estacionaria en un proceso denominado elución, la separación de los
distintos componentes de la muestra se da como resultado de
repetidos procesos desorción-desorción de estos componentes debido
a su afinidad química por una u otra fase, finalmente, la separación de
estos componentes se puede visualizar mediante una gráfica
denominada cromatograma.
En la cromatografía de gases la fase móvil es un gas inerte (helio o
nitrógeno) y la fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-
sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gas-
líquido). Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya que es
la única manera de que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo,
confinada dentro del sistema. La columna puede estar rellena con la
fase estacionaria, en forma semejante a la cromatografía líquida, o
bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las paredes de un
tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m). Este
tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan
la mayor capacidad de separación. Finalmente, la cromatografía con
fluido supercrítico (SFC) es una técnica de separación en la que la
fase móvil es un fluido por encima de sus temperatura y presión
críticas. Se utiliza para el análisis y purificación de moléculas de bajo a
moderado peso molecular. Los principios son similares a los de HPLC
sin embargo en SFC se utiliza típicamente CO2 como fase móvil
ELECTROFORESIS
La electroforesis es una técnica que emplean los científicos en el
laboratorio utilizada para separar el ADN, el ARN, o moléculas o
proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una
corriente eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través
de un gel. Los poros del gel actúan como un colador, permitiendo que
las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las grandes.
Las condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden ajustar
para separar moléculas en el rango de tamaño que se desee.
La electroforesis es una técnica que se utiliza de forma generalizada
en la que, fundamentalmente, se aplica corriente eléctrica a moléculas
biológicas, ya sean ADN, proteínas o ARN..., y se separan en función
de si son más grandes o más pequeñas. Se utiliza en una gran
variedad de aplicaciones... como en medicina forense para determinar
la identidad de las personas que puedan haber participado en un
delito, mediante la vinculación de su patrón de ADN -su patrón de
electroforesis- a uno que esté en una base de datos. El proyecto
genoma humano se llevó a cabo con algo que se llama electroforesis
capilar, mediante la separación de ADN en piezas más cortas y su
separación en geles de electroforesis que permite a los patrones de A,
C, T y G ser caracterizados. También son muy importantes en la
investigación de proteínas, y en la investigación de mutaciones
genéticas, porque cuando las proteínas o el ADN están mutados, son
con frecuencia más o menos largos, y, por lo tanto, aparecen en un gel
de electroforesis de manera diferente de lo normal. Las pruebas de
diagnóstico para muchos casos todavía se realizan mediante
electroforesis. Es una técnica muy utilizada en la investigación básica,
muy importante para la comprensión de la función de genes y
proteínas, pero ahora ha irrumpido en el área de diagnóstico clínico y
forense. Una electroforesis se realiza generalmente en una especie de
caja que tiene una carga positiva en un extremo y una carga negativa
en el otro. Y como todos aprendimos en las clases de física, cuando
se pone una molécula cargada en un entorno así, las moléculas
negativas van a la carga positiva, y viceversa. Al analizar las proteínas
en un gel, en una de estas cajas, por lo general se toma la proteína
completa para ver lo grande que es. Cuanto más corta, más migran en
el gel, de modo que la proteína pequeña terminará en la parte inferior
del gel, porque han ido más lejos, y las más grandes terminarán
quedándose en la parte superior. En el caso del ADN, el ADN es una
molécula muy larga, así que no se puede hacer un gel de una
molécula entera de ADN de una célula. Es tan grande que nunca se
metería en el gel, así que lo que hacen los científicos es cortar el ADN
con cosas como las enzimas de restricción, que cortan el ADN en
pedazos más manejables, y entonces esas piezas, dependiendo de lo
grande que sean, migran más o menos por el gel y terminan más
arriba o más abajo
Métodos inmunológicos
Métodos hidrodinámicos.
Sedimentación
Se trata de una operación de separación sólido-fluido en la que las
partículas sólidas de una suspensión, más densas que el fluido, se
separan de éste por la acción de la gravedad. Es una operación
controlada por la transferencia de cantidad de movimiento.
En algunos casos, como cuando existen fuerzas de interacción entre
las partículas y éstas son suficientemente pequeñas (suspensiones de
tipo coloidal), la sedimentación natural no es posible, debiendo antes
proceder a la floculación o coagulación de las partículas.
Métodos espectroscópicos.
espectrometría de absorción
Espectroscopia de fluorescencia.
La espectroscopia de la fluorescencia es un método analítico basado
en las propiedades de la fluorescencia de la muestra, y se utiliza para
las mediciones cuantitativas de drogas, de metabilitos y de otros
productos químicos.
Uso de la fluorescencia
Este método utiliza fluorescencia para analizar las muestras. En
fluorescencia, el fluoróforo absorbe la luz de cierta longitud de onda,
que entonces excita el electrónico, que se mueve desde el estado de
tierra a un estado emocionado de la alta energía.
Eficiencia de Quantum
La eficiencia de Quantum es un parámetro importante en mediciones
fluorescentes que ofrece una medición del fotón comparado con
electrones convertidos, o el índice de cuántos fotones del incidente se
absorben comparado con el número convertido a los electrones. Este
parámetro es alto es muestras en la concentración inferior