Universidad Nacional Autónoma de México 

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán Campo 1 

Laboratorio de Bioquimica Estructural

Semestre 202I

“CUANTIFICACION DE ADN ”
Previo

Valdivia Larios Kevin Leonardo

Grupo: 1701

Química           20/03/2021

 PRACTICAS 1: CUANTIFICACION DE ADN

1. Explique los métodos de extracción de ácidos nucleicos en

muestras biológicas.

La extracción de ácidos nucleicos constituye la primara etapa de la mayoría de

los estudios de biología molecular y de todas las técnicas de recombinación de
ADN. los métodos de extracción permiten obtener ácidos nucleicos purificados
a partir de diversas fuentes para después realizar análisis específicos de
modificaciones genéticas mediante la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR).

La calidad y la pureza de los ácidos nucleicos son dos de los elementos más
importantes en ese tipo de análisis. Si se desea obtener ácidos nucleicos muy
purificados, que no contengan contaminantes inhibidores, es preciso aplicar
métodos de extracción adecuados. Los contaminantes capaces de inhibir el
análisis PCR

Para extraer los ácidos nucleicos del material biológico es preciso provocar una
lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y separar los ácidos nucleicos de
los restos de células. El procedimiento de lisis idóneo suele consistir en un
equilibrio de técnicas y ha de ser suficientemente fuerte para romper el material
inicial complejo (un tejido, por ejemplo), pero suficientemente suave para
preservar el ácido nucleico diana. Entre los procedimientos usuales de lisis
figuran los siguientes:

 Ruptura mecánica (trituración, lisis hipotónica, etc.);

 Tratamiento químico (detergentes, agentes caotrópicos, reducción con
tioles,

etc.);

 Digestión enzimática (Proteinasa K, etc.).

Es posible romper la membrana celular e inactivar las nucleasas intracelulares

al mismo tiempo. Por ejemplo, una misma solución puede contener detergentes
que solubilicen las membranas celulares y sales caotrópicas fuertes que
inactiven las enzimas intracelulares. Tras la lisis celular y la inactivación de las
nucleasas, los restos de células se eliminan fácilmente por filtración o
precipitación.
2. Esquematice las reacciones químicas de identificación de
ácidos nucleicos.

 Reaccion Difenilamina para desoxipentosa

 Reaccion de Bial
  Identificación de grupo fosfato
Formación de azul de fosfomolibdeno

3. ¿Cuál es el fundamento de las reacciones colorimétricas

de identificación de DNA?

 REACCION CON DIFENILAMINA

Las desoxipentosas debido a la hidrólisis ácida sufren deshidratación dando

aldehídos δ- hidroxi-levulínicos. Estos reaccionan con difenilamina dando un
producto de color azul. Así, la reacción de difenilamina servirá para
caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA.
  REACCION BIAL

La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol. El
ácido sulfúrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosídicas, liberando
ribosa, bases púricas, pirimidínicas y acido fosfórico.
La pentosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con
el orcinol dando un producto verde que demuestra la presencia de DNA y RNA.

 REACCION DEL GRUPO FOSFATO

El grupo fosfato se identifica por la reacción para fósforo inorgánico, en medio

ácido, con el molibdato (reactivo 1) da fosfomolibdato, color amarillo, que es
reducido luego por el ácido ascórbico (reactivo 2) a azul de molibdeno, color
azul verdoso. El reactivo 3 (arsenito/citrato) se combina con el exceso de
molibdato impidiendo su reacción posterior con otros fosfatos.

4. Investigar la longitud de onda a la cual se puede

cuantificar el DNA espectrofotométricamente.

La cuantificación de ADN se realizó mediante espectrofotometría de

absorbancia a una longitud de onda de 260nm (A260) , de igual manera se
obtuvo una estimación de la pureza del ADN por medio de la relación de
absorbancia (A A nm).
Referencias

 Optimización de la extracción de ADN de Passiflora ligularis para el análisis

por medio de marcadores moleculares
 https://www.sebbm.es/BioROM/contenido/av_bma/apuntes/T2/t2.htm
 http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/
2010/08/2011-TP-8-Extracción-y-caracterización-de-DNA.pdf