Universidad de Panam

Facultad de Medicina
Escuela de Ciencias
Departamento de biologa celular y molecular

PRCTICA N4 EXTRACCIN DE ADN

DE TEJIDO ANIMAL

Profesora Indira Martnez

Por: Blanco Gabriela (8-927-911)
Domnguez Adanis (8-913-1895)
Figueroa Flavio (9-928-710)
Ospina Lina (EC-43-11794)
Panam, Grupo
13 de septiembre
2.4 A
de 2016
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Introduccin
El cido desoxirribonucleico o ADN (DNA) es la molcula que guarda el cdigo gentico de todas las
clulas. Sin importar que el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o procariota, todos
tienen el DNA como vehculo de su cdigo gentico. Muchas de las tcnicas de biologa molecular
incluyen algn tipo de manipulacin del material gentico. Estos procedimientos han logrado
adelantar hasta tal grado el conocimiento del cdigo gentico, que ya es posible clonar organismos
enteros. Los procedimientos iniciales eran logrados y tediosos y podan pasar varios das antes de
saber con certeza que se haba logrado obtener el DNA en calidad y cantidad suficiente para poder
manipularlo. Adems, algunos de los reactivos usados para estos procesos son txicos y
mutagnicos. Hoy da podemos obtener suficiente DNA de buena calidad en unas horas (Roberts
2005).
Hasta mediados del siglo 20 no se sospechaba que el cido desoxirribonucleico, ADN, fuera la
molcula capaz de asegurar la transmisin de los caracteres hereditarios de clula a clula,
generacin tras generacin. Su limitada variedad qumica no permita suponer que poseyera la
versatilidad y ductilidad necesarias para almacenar la informacin gentica de los seres vivos.
En 1869 un bilogo suizo Johann Friedrich Miesscher, utiliz primero alcohol caliente y luego una
pepsina enzimtica que separa la membrana celular y el citoplasma de la clula, el cientfico quera
aislar el ncleo celular, concretamente en los ncleos de las clulas del pus obtenidas de los
vendajes quirrgicos desechados y en la esperma del salmn, someti a este material a una fuerza
centrfuga para aislar a los ncleos del resto y luego someti solo a los ncleos a un anlisis
qumico. De esta manera Miessher identific a un nuevo grupo de substancias celulares a las que
denomin nuclenas, observ la presencia de fsforo, luego Richard Altmann las identific como
cidos y les dio el nombre de cidos nucleicos. (Lodish 5ta edicin)
Robert Feulgen, en 1914 describi un mtodo para revelar por tincin el ADN, basado en el
colorante fucsina. Se encontr, utilizando este mtodo, la presencia de ADN en el ncleo de todas
las clulas eucariotas, especficamente en los cromosomas. (Dorcas 6ta Edicin)
Durante los aos 20, el bioqumico P.A. Levene analiz los componentes del ADN, los cidos
nucleicos y encontr que contena cuatro bases nitrogenadas: citosina, guanina, timina y adenina; el
azcar desoxirribosa; un grupo de fosfato. Tambin demostr que se encontraban unidas en el orden
fosfato-azcar-base, formando los que denomin un nucletido. Levene tambin sugiri que los
nucletidos se encontraban unidos por los fosfatos formando el ADN. Sin embargo, Levene pens
que se trataban de cadenas cortas y que las bases se repetan en un orden determinado. (Tcnicas
de Biologa Molecular, Benjamn Espinoza)
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Objetivos
Objetivo General

Conocer los diferentes pasos que conllevan la extraccin y aislamiento de ADN del tejido
animal.

Objetivos Especficos

Utilizar tcnicas bsicas para poder extraer el ADN de un tejido animal.

Confirmar visualmente la estructura fibrilar y la presencia de ADN.
Comprender cul es la funcin de los diferentes reactivos que se utilizan durante la extraccin
de ADN.

Mtodos y Resultados
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Trituramos hgado de pollo en un mortero. Se agreg arena para que se pudieran romper las
membranas y quedaran los ncleos sueltos. Luego, aadimos 50 ml de agua y mezclamos hasta
hacer una especie de papilla.
Se procedi a hacer 3 filtrados para eliminar todos los residuos slidos y de aqu, medimos el
volumen que nos qued. A este filtrado se le aadi un volumen igual de cloruro sdico 2M.
Luego de esto aadimos 1ml de SDS al 10%. Procedimos a aadir 50 ml de alcohol al 95%.
Habiendo culminado la preparacin, se forman fibras blancas que son el resultado de una
agrupacin de muchas fibras de ADN. Las agarramos con un palillo y las colocamos en un
portaobjetos, donde se tio con azul de metileno y luego se observ en el microscopio

Resultados
En la experiencia realizada procedimos a extraer ADN de las clulas del hgado de pollo. Para
precipitar el ADN contenido en la muestra triturada, utilizamos alcohol a temperatura fra para agilizar
el proceso; cuando precipit el ADN (de color blanco) qued en suspensin entre la muestra triturada
y el alcohol.
Una vez hecho esto, procedimos a teir la muestra con azul de metileno para observarlo mejor bajo
el lente del microscopio.

Ilustracin 2 Muestra del ADN,

teida con azul de metileno,
observado bajo el microscopio

Ilustracin 1 ADN en estado de

suspensin entre el alcohol y la
muestra de hgado triturada

Discusin
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La trituracin mecnica
La cual hicimos con el mortero rompe muchas clulas liberando su contenido. Es decir se da para
lisar las membranas celulares del tejido del hgado y liberar el material extracelular.
Una vez liberado el producto extracelular la extraccin consiste en el aislamiento y purificacin de
molculas de ADN y se basa en las caractersticas fisicoqumicas de la molcula. El ADN est
constituido por dos cadenas de nucletidos unidas entre s formando una doble h-lice. Los
nucletidos estn integrados por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada
(adenina, guanina, timina o citosina). La unin de los nucletidos ocurre entre el grupo fosfato y el
azcar, mediante enlaces fosfodister, dando lugar al esqueleto de la molcula. Las bases de
cadenas opuestas se unen mediante puentes de hidrgeno y mantienen estable la estructura
helicoidal.
Los grupos fosfato estn cargados negativamente y son polares, lo que le confiere al ADN una carga
neta negativa y lo hace altamente polar, caractersticas que son aprovechadas para su extraccin.
Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa, lo que
permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la
molcula. Pero, en presencia de alcohol, se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los
grupos fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unin con cationes como Na+ (Cloruro
sdico) que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucletidos y permiten que el ADN
precipite.
El cloruro sdico y el alcohol
El sodio es un ion cargado positivamente. En una solucin de cloruro de sodio, la mesa de sal, por
ejemplo, la molcula de cloruro de sodio se separa en iones de sodio y iones de cloro. El ADN, por
otro lado, tiene altas cargas negativas. La carga altamente negativa de la molcula de ADN es
neutralizada por los iones de sodio positivos en la solucin. Esta neutralizacin de cargas negativas
de ADN permite que se precipite en alcohol. Sin la sal, el ADN permanece cargado negativamente y
estar en la parte acuosa de la solucin.
Si esta mezcla se revuleve, el ADN plsmido precipitado se volver un perdign en el fondo del tubo.
La porcin de agua puede retirarse y el ADN puede regresar a la solucin, o re suspenderse, en una
solucin diferente en la concentracin deseada.

El dodecilsulfato sdico, o SDS,

Es un detergente que contiene sodio. Tiene la frmula qumica de C12H25NaO4S, donde Na es
sodio. Los detergentes se usan para romper las paredes y membranas celulares. Trabajan al golpear
qumicamente agujeros en las membranas o pareces celulares. Una vez que los agujeros se golpean
en las membranas, stas pueden deshacerse mecnicamente, como con una licuadora. Despus de
eso, es ms fcil obtener los contenidos de la clula, incluido el ADN.
Observacin
Se utiliza el azul de metileno (color azul), es un colorante bsico, en las clulas ya que ste se une a
sustancias cidas que se tien de color azul. Para fines prcticos el nico cido que se encuentra en
la suficiente cantidad para ser identificado por la tincin es el RNAr, el ADN y los mucopolisacridos
cidos, tambin abundantes, tienen esta caracterstica tintorial.
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Resolucin del cuestionario

1 Cmo el detergente produce la lisis de la clula?
Los detergentes tienen una zona hidroltica y otra hidrofbica, por esta razn pueden interactuar tanto
con el agua como con los lpidos. Su habilidad se basa en la solubilizacin de los lpidos de la pared
celular. Trabajan al golpear qumicamente agujeros en las membranas o pareces celulares.
2 Cul es la funcin del NaCl en la extraccin del DNA?
El NaCl (cloruro de sodio) forma una capa protectora alrededor del ADN que lo protege de la
degradacin
3 Cul es la funcin del fenol-cloroformo en la extraccin del DNA?
El fenol desnaturaliza las protenas contaminantes de la muestra.
Cloroformo: permite la separacin de 2 fases, el ADN queda en la fase acuosa y en la fase orgnica
quedan las protenas y otros contaminantes
4 Qu es un cromosoma?, explique su organizacin y por qu est asociado a protenas
Los cromosomas son estructuras que se encuentran en el centro (ncleo) de las clulas que
transportan fragmentos largos de ADN. El ADN es el material que contiene los genes y es el pilar
fundamental del cuerpo humano.
Los cromosomas tambin contienen protenas que ayudan al ADN a existir en la forma apropiada.
5 Por qu se puede utilizar un tinte bsico para teir las fibras de DNA?
Porque los tintes bsicos son de tipo catinico y estos pueden unirse fcilmente a los cidos
nucleicos que estn cargados negativamente.
6 Qu representa la muestra teida observada en la placa?
La muestra teida en la placa representa el ADN extrado de las clulas hepticas del pollo.

Conclusin
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Sabemos los pasos detallados que conlleva la extraccin de ADN.

Las tcnicas bsicas en la extraccin de ADN son nuestro conocimiento y sabemos lo que

involucra.
Se mostr en el microscopio la estructura fibrilar del ADN.
Cada uno de los reactivos utilizados tena un propsito especfico como la lisis celular,

disolucin de lpidos y protenas y precipitacin de ADN.

Es preciso desorganizar la estructura de paredes y membranas para liberar los cidos

nucleicos.
Por mecanismos mecnicos y posteriormente qumicos a travs de la solucin de lisis, se
acta sobre las paredes y las estructuras lipoproteicas de las membranas.

Se extraen de la mezcla de fragmentos celulares con alcoholes especficos, en los que los
cidos nucleicos no son solubles.

Bibliografa
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Anexos

Figura 1: Resultado de la preparacin de hgado.

Figura 2: Filtrado de la preparacin de hgado.

Figura 3: Solucin final con fibras de ADN.

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