CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO

INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS NO.113

NOMBRE DEL ALUMNO:

THANIA LIZBETH GARCÍA SÁNCHEZ

MATERIA:
IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN TÉCNICAS
BACTERIOLÓGICAS

DOCENTE:
Q.C GRACIELA MALDONADO RÍOS
TEMA:
MEDIOS DE CULTIVO
FECHA DE ENTREGA:
25 DE SEPTIEMBRE
 MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio con el objetivo de hacer crecer
un microorganismo como bacterias, virus y hongos, aunque también se utilizan
para el crecimiento de células o tejidos. Principalmente consta de una superficie
sólida, semisólida o de una solución liquida con nutrientes y condiciones
favorables de pH y temperatura para el crecimiento de lo que queramos. También
es necesario controlar la presencia o no de oxígeno o el grado de humedad. Una
curiosidad es que, si queremos “cultivar” virus, necesitaremos células vivas para
que estas puedan infectarlas y multiplicarse.

En la gran mayoría de cultivos sólidos se utiliza el Agar como agente gelificante,

ya que no es reactivo con otros compuestos químicos y la gran mayoría de
microorganismos no son capaces de degradarlo.

Los medios se pueden clasificar de varias formas:

Según su consistencia

 Sólido
 Contiene Agar a concentración 1.5 – 2%. Es la forma más
conocida de medio de cultivo, que se pone en las Placas de
Petri. Es común utilizar este tipo de medio para
aislar colonias o analizar las características de las colonias.
 Semisólido
 Contiene Agar al 0.5% o menos. Tienen una consistencia
como de crema y son útiles para cultivos de microaerófilos o
para determinar motilidad.
 Líquido (Caldo)
 Acostumbran a tener gran variedad de nutrientes y no tienen
agentes gelificantes. Se utilizan para hacer crecer los
 microorganismos o por ejemplo, para estudios de
fermentación

Según su función/uso

 Medio general
 Medio donde pueden crecer todo tipo de microorganismos.
 Medio selectivo
 Tipo de medio con algunos elementos o nutrientes
específicos. La función de este tipo de medio es que
crezcan solo un tipo determinado de microorganismos. Por
ejemplo, si queremos que crezca una especie que es
resistente a un antibiótico como ampicilina, se puede
añadir este antibiótico para impedir que crezcan otros
microorganismos.
 Medio diferencial
 Medio donde se permite identificar y/o diferenciar (como
su nombre indica) una especie de otra, ambas en el mismo
medio. Puede ser debido a su metabolismo, su crecimiento,
etc… acostumbran a llevar un indicador que permite ver
esta diferenciación.
 Medio de enriquecimiento o nutritivo
 Contiene nutrientes necesarios para permitir el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos. Se utiliza para
conseguir que proliferen la máxima variedad de
microorganismos posibles. Acostumbran a ser los extractos
de carne o levadura con peptonas.
 Medio mínimo
 Medio que contiene la mínima cantidad de nutrientes
necesarios para que crezca una especie. Normalmente sin
presencia de aminoácidos o con muy pocos.
 Medio de transporte
  Tipo de medio utilizado como almacenamiento temporal a
especímenes transportados. Permite la viabilidad de estos
microorganismos sin alterar la concentración de estos. No
contienen fuentes de carbono, nitrógeno ni ningún otro factor
de crecimiento orgánico para evitar el crecimiento de
estos.

Según su origen

 Naturales
 Son preparados a partir de sustancias naturales como
extractos de tejidos, levadura. Son infusiones cuya
composición química no se conoce exactamente.
 Sintéticos
 Tienen una composición química definida cualitativa y
cuantitativamente. De este modo es posible obtener
resultados reproducibles
 Semisintéticos
 Se trata de un cultivo complejo en el que se le añade a un
extracto orgánico, factores de crecimiento aislados debido a
la dificultad de conseguirlos en compuestos naturales.

Según su formulación: Esta definición es muy similar a según su origen. Pueden

ser:

 Químicamente definidos
 Se conoce la cantidad exacta de cada uno de los
compuestos que hay en el medio.
 Complejos
 Se realizan a partir de extractos naturales como por ejemplo
extracto de sangre o de levadura. No se conoce la
 composición exacta, aunque están presentes todos o casi
todos los elementos necesarios para que crezca el cultivo.

Existen gran variedad de medios de cultivo, algunos se pueden hacer en el mismo

laboratorio y otros se comercializan. La función principal de los medios de cultivo
(sobre todo los sólidos y semisólidos) son para el diagnóstico clínico o
investigación. Aunque también se pueden utilizar, y se utilizan en otros ámbitos;
por ejemplo: en ecología, o en seguridad alimentaria.

Voy a poner una lista de medios de cultivo más conocidos (al menos por mi parte)
o que son interesantes o curiosos por algún motivo:

Agar/Caldo LB (Luria Bertani) – Agar/Caldo Miller’s LB

 Es un medio de cultivo nutritivo, no selectivo ni diferencial que

contiene triptona, extracto de levadura y cloruro de sodio. Tiene los
nutrientes necesarios para el crecimiento óptimo de la mayoría de los
microorganismos. El Miller’s LB tiene proporciones diferentes al LB
típico.

Agar Sangre

 Es un medio enriquecido y diferencial. Es la combinación de un agar

nutritivo con sangre de mamiferos (normalmente oveja, aunque
también hay de conejo o humanos) a una concentración de 5-10%.
Se usa para aislar principalmente microorganismos del
género Streptococcus (S. pyogenes y S. aureus como más
comunes).
 Es diferencial para detectar actividad hemolítica (lisis y digestión de
eritrocitos) según si las bacterias pueden hacer β-hemolisis (lisis
completa y se ve un halo incolor alrededor de la colonia) o α-
hemolisis (hemolisis parcial y aparece un halo verdoso alrededor de
la colonia).
 Agar sangre con tres especies
de Streptococcus spp. S. mitis (α-
hemolysis ); S. pyogenes (β-hemolysis); S.
salivarius (γ-hemolysis = no-hemolitico),.
Fuente: Wikipedia

Agar Chocolate

 Es un tipo de agar sangre, en este caso la sangre se le ha aplicado

un tratamiento de calor para lisar los glóbulos rojos dándole una
coloración más marrón, como de chocolate. Se utiliza sobretodo para
aislar a Haemophilus influenzae y Neisseria meningitidis. Al aplicar
este tratamiento calorífico se liberan factores de crecimiento de los
glóbulos rojos que necesitan estos microorganismos.

Brucella sp en agar Chocolate.

Agar McConkey

 Es un medio selectivo y diferencial.

En este medio crecen bacterias Gram
negativas tanto aerobias como
anaerobias facultativos incluyendo
todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae. Contiene sales
biliares y cristal violeta inhibiendo el
crecimiento de Gram positivas.
 Es diferencial porque permite detectar bacterias que
fermentan Lactosa (L+) de las que no (L-). Las L+ (Escherichia coli,
Klebsiella) degradan la lactosa acidificando el medio haciendo que
las colonias y el medio tomen un color rosado o rojizo, las L-
(Salmonella, Proteus, Yersinia) al no degradar lactosa no hacen este
cambio de color en el medio.
 Agar McConkey con colonias fermentadoras y no
fermentadoras de lactosa. Crédito: Medimicro

Agar Sabouraud

 Es un medio utilizado para cultivar hongos. Tiene una concentración

de dextrosa alto y un pH bajo (5.6) que inhibe el crecimiento de la
mayoría de las bacterias. Además, tiene el antibiótico gentamicina
que inhibe específicamente las bacterias Gram negativas.

Hongo Sporothrix schenckii en agar Sabouraud. Crédito: Dr. Lucille K. Georg

Agar Levine (EMB)

 Medio selectivo y diferencial

gracias a los colorantes Eosina y
Azul de Metileno. Estos
compuestos son tóxicos para los
Gram positivos .
 Es selectivo a partir de la
fermentación de la Lactosa (L+, L-). Las L- son incolores y las L+ son
negro-azulada y pueden tenir brillo metálico que a veces es verdoso.

Colonias de E. coli en agar Levine.

Crédito: Budhavee S.N.A

Agar entérico de Hektoen (HEK)

 Medio selectivo y diferencial para

bacterias Gram negativas,
concretamente
para Salmonella y Shigella. Tiene un indicador de pH, las bacterias
que acidifican el medio vuelven el agar de color amarillo o rojo, las
que alcalinizan el medio (Salmonella y Shigella) lo vuelven de color
 azulado. Además la presencia de Tiosulfato o citrato de amonio
férrico permite diferenciar estas dos bacterias,
formando Salmonella colonias negras al producir ácido sulfhídrico.

Primer plano de una placa con colonias de Shigella. Crédito: Todd Parker

Agar Manitol Salado (MSA)

 Medio de cultivo selectivo y diferencial.

Contiene una alta concentración de sal
(7.5 – 10%) haciéndolo selectivo
para Staphylococcus. Además es
diferencial por la fermentación de
manitol, formando los microorganismos fermentadores (S. aureus)
colonias de color amarillo con o sin halo amarillo y las no
fermentadores (otras especies de Staphylococcus) colonias del color
del medio o rojizas.

Ejemplo de MSA: Micrococcus sp. (1) , S. epidermidis (2), S. aureus (3)

Crédito: Navaho

Caldo Tioglicolato

 Se trata de un medio
de enriquecimiento diferencial y no
selectivo. Contiene peptona y extracto
de levadura que permite que crezcan la
mayoría de microorganismos. Es un
medio liquido, aunque tiene una pequeña
cantidad de agar. La función de este
medio es la de poder observar y diferenciar microorganismos según
sus necesidades de oxígeno, según si son aerobios, anaerobios,
 aerotolerantes, etc. En el siguiente dibujo podéis ver como crecerían
cada uno:

Agar Thayer-Martin

 Es un medio nutritivo y selectivo para el

aislamiento de Neisseria
meningitidis y Neisseria gonorrhoeae. Es
una mezcla entre agar Chocolate y agar Mueller-Hinton, teniendo
una gran cantidad de nutrientes pero a la vez
con antibióticos impidiendo el crecimiento de muchos
microorganismos.

Agar Cysteine lactose electrolyte deficient (CLED)

 Es un medio de cultivo diferencial para aislamiento, diferenciación y

conteo de las bacterias presentes en la orina. Favorece el
crecimiento de los microorganismos patógenos urinarios aunque,
debido a la ausencia de electrolitos, impide la indebida proliferación
de especies de Proteus. El agar es semitransparente y por acción
de azul de bromofenol, las colonias de bacterias fermentadoras de
lactosa producen colonias amarillas; y las no fermentadoras de
lactosa dan colonias azules

Agar CLED con colonias fermentadoras y no fermentadoras de Lactosa.

Crédito: Microrao

Agar Müller-Hinton

 Es un medio nutritivo, no selectivo

con infusión/extracto de carne, triptona y
 almidón. Permite el crecimiento de una gran mayoría de
microorganismos. Se utiliza para hacer pruebas con antimicrobianos
y antibióticos. Al no tener una concentración muy elevada de agar,
permite la difusión de los antimicrobianos con facilidad.

Placa de Müeller-Hinton con parches con antibióticos.

Tryptic Soy Agar and Broth (TSA/TSB)

 Es un medio rico y multiuso producida por

la digestión enzimática de soja y caseína.
Es la base de otros tipos de agar, como el
agar sangre que está hecho de TSA
enriquecido con sangre. Se puede utilizar
en placa de Petri (sólido) o como caldo (líquido). Su función es
variada: ya sea para observar morfología de colonias, tener un
cultivo puro o como medio de enriquecimiento para obtener más
cantida

Caldo / Agar papa dextrosa (PDA)

 Es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras. Se

puede añadir antibióticos para asegurarse que no crezcan bacterias.
Principalmente se utiliza para hacer recuento de colonias, además la
forma de la colonia variará según el hongo que sea.

Agar inclinado Lowenstein-Jensen

 Es un medio de enriquecimiento
para micobacterias. Se utiliza en tubo
inclinado. A diferencia de otros medios que
utilizan agar como base, en este caso la
base es a partir de huevo y
patata permitiendo una larga durabilidad. El
 colorante verde de malaquita inhibe el crecimiento de Gram positivos
y algunos Gram negativos y dando el color verde pálido típico. Puede
añadirse glicerina que estimula el crecimiento de Mycobacterium
tuberculosis pero inhibe a M. bovis. La colonia de la bacteria de la
tuberculosis es de color crema o amarillenta, y a la vista de textura
rugosa o cremosa.

Agar-Hierro-Triple-Azucar (Triple Sugar Iron en inglés o TSI)

 Es un medio de cultivo nutritivo y diferencial para

Gramnegativos. Se usa en tubos de ensayo
con agar inclinado. La diferenciación se basa en si son capaces de
fermentar (o no) la glucosa, la lactosa y/o la sacarosa, además de si
producen (o no) gas y ácido sulfhídrico siendo los resultados lo
siguientes
 Si fermenta glucosa, se acidificará el medio por la parte del
fondo y se volverá amarillo, sinó seguirá rojo
 Si fermenta lactosa y/o sacarosa se volverá amarillo la
superfície del medio
 Si produce ácido sulfhídrico el medio se volverá negro. Esto
también implica que la bacteria es capaz de fermentar
glucosa
 Si aparecen roturas del medio es que el microorganismo es
productora de gas.

Ejemplos de tubos con TSI. Fuente: Wikipedia

Agar bilis esculina (BEA)

 Medio de cultivo selectivo y

diferencial para determinar si hay
microorganismos capaces de
crecer en un medio con bilis. Se
 usa principalmente para diferenciar
entre Enterococcus y Streptococcus. Si son capaces de degradar
la esculina del medio volverán el medio de color negro debido a la
interacción entre los subproductos y el citrato férrico del medio.

BEA con colonias de Enterococcus. Fuente: Wikimedia Commons

Agar tiosulfato citrato bilis sacarosa (agar TCBS)

 Medio diferencial y selectivo para ailsar y cultivar Vibrio cholerae.

Contiene sacarosa y axul de timol y bromotimol como indicadores. El
medio tiene color verde-azulado y las colonias son de color amarillo
si son capaces de fermentar la sacarosa (como V. cholerae) o verdes
si no son capaces.

Agar TCBS con colonias amarillas de V. cholerae. Crédito: Rafa Solana

Agar Regan Lowe

 Medio selectivo para Bordetella spp y

concretamente B. pertussis. Es selectivo
por la presencia de los
antibioticos cefalexina y
cefalosporina que inhibe la microbiota
de muestras nasofaríngeas. El medio es
de color negro y las colonias de Bordetella spp suelen ser pequeñas,
grisáceas, con un brillante de color perla y convexas. Existen
variantes de este medio en semisólido y de transporte.

Agar Regan Lowe con colonias de Bordetella spp. Fuente Wikimedia Commons

Agar Cetrimida
  Medio de cultivo selectivo
para Pseudomonas aeruginosa.
La cetrimida es el elemento selectivo ya
que inhibe el crecimiento de bacterias
diferentes a P. aeruginosa. además, el
cloruro de magnesio y el sulfato de potasio
estimulan la producción de pigmentos de
esta bacteria: piocianina (azul-verdoso), pioverdina (verde),
piorrubina (rojizo), piomelanina (marrón) y fluoresceína. Las colonias
que se forman son redondas, lisas, con bordes regulares y del color
de los pigmentos (normalmente azul-verdoso). Estas colonias
pueden brillar si son expuestas a luz ultravioleta.

Ejemplo de fluorescencia de P. aeruginosa en luz UV. Fuente: Wikimedia

Commons

Agar Cefsulodina-Irgasan-Novobiocina (agar CIN)

 Medio selectivo y diferencial para aislar Yersinia enterocolítica. Se

inhibe el crecimiento de bacterias del
genero Escherichia y Staphylococcus. Las colonias crecen con un
color rojo oscuro y con un borde transparente (gracias al manitol y al
rojo neutro que actúan como indicador).

Agar sulfito de bismuto (agar BSA)

 Medio selectivo y diferencial para conseguir aislar Salmonella

enterica serotipo Tiphi. Gracias al sulfito de bismuto y al verde
brillante se inhibe el crecimiento de bacteria Gram positivas y de
algunas Gram negativas. Además, es diferencial gracias a la
presencia del sulfato ferroso que interacciona con el H2S que
producen algunas bacterias formando un precipitado negro insoluble.
 Las colonias de S. enterica Tiphi tiene un centro negro con un halo
brillante verde a las 24h y se vuelven totalmente negras a las 48h.

Agar rosa de Bengala

 Medio selectivo para el crecimiento de hongos y levaduras en el

ambiente (suelo, alimentos, aire). El cloranfenicol sirve como un
agente selectivo, inhibiendo el crecimiento bacteriano. El rosa de
bengala es un agente selectivo que inhibe el crecimiento de
bacterias y limita el tamaño y la altura de los hongos con crecimiento
rápido, lo que permite el desarrollo y la detección de otras levaduras
de crecimiento más lento. Algunos hongos van a formar colonias
rosadas.

Agar Carbón Cefoperazona Deoxicolato (agar CCDA)

 Actualmente se usa una variante de este medio de cultivo llamado:

«Agar Campylobacter Exento de Sangre«. Se trata de un medio
selectivo ya que contiene sulfato ferroso, piruvato de sodio y carbón
que promueven el crecimiento de especies de Campylobacter spp.
Además tiene algunos antibióticos y antifúngicos para evitar el
crecimiento de otros microorganismos.
Las colonias de Campylobacter spp. son planas, redondas,
grisáceas y a veces con un brillo metálico.

Izquierda: Placa con agar CCDA sin cultivo.

Derecha: Placa agar CCDA con colonias
de Campylobacter jejuni. Fuente: VetBact

Agar Manitol-Yema de huevo-Polimixina

(agar MYP)

 Agar selectivo y diferencial para aislamiento y recuento de Bacillus

cereus. La polimixina inhibe a microorganismos Gram negativos y
 además, B. cereus tiene una cierta tolerancia a este compuesto. Este
medio de cultivo es diferencial gracias al manitol ya que B. cereus es
manitol-negativo (medio rojo-rosa) y se puede diferencia de
microrganismos manitol-positivos (medio color amarillo). Otro
compuesto diferencial es la yema de huevo: B.
cereus produce lecitinasas que degradaran la lecitina del huevo
formando un precipitado blanco alrededor de las colonias, en
cambio, Bacillus subtilis no produce este halo de precipitación

BIBLIOGRAFIA

 BROCK, T.D. et al (1997): Biología de los Microorganismos (8ª edición).

Edit. Prentice-Hall. (Uno de los mejores textos introductorios, ya convertido
en clásico. Muy didáctico, con numerosos dibujos y fotos a todo color,
esquemas y resúmenes, glosarios y revisiones de autoevaluación
incorporados en cada capítulo. (http://www.prenhall.com/~brock)).
 DAVIS, B.D. et al.(1990): Microbiology (4th edition). J.B. Lippincott. Existe
versión española (1996) editada por Masson-Salvat.
 PRESCOTT et al. “Microbiología. 5ª Edición. Editorial Mc. Graw Hill
Interamericana. 2004.
 INGRAHAM AND INGRAHAM. “Introducción a la Microbiología”. Editorial
Reverté. 1998.
 SCHLEGEL, H.G. “Microbiología general”. Ediciones Omega, S.A. 1997