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Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso pequeas plantas. Segn lo
que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se
presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado slido, semislido o lquido. El objetivo ltimo
del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin. Uno de los sistemas ms
importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo
diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan un
medio que contenga clulas vivas.
Clasificacin
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:
lquidos
semislidos
slidos
Segn su origen:
sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.
Segn su formulacin:
Segn su uso:
medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los
que necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo
medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiracin, etc. (por ejemplo,
medio de McConkey).
simple
Conteo bacteriano
Generalmente tras analizar un cultivo se realiza un conteo bacteriano con el fin de saber
cul es la densidad de poblacin microbiana que se encuentra en el medio.
Tipos:
Agar sangre
Contiene sangre de mamferos (generalmente oveja, conejo, humanos) a una
concentracin de 5 a 10%. El agar sangre, es un medio enriquecido, diferencial, usado
para aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemoltica. La -hemolisis, se
manifiesta como una lisis y digestin completa de los eritrocitos que rodean la colonia, por
ejemplo algunas bacterias del gneroStreptococcus. La -hemolisis , aparece solo como
lisis parcial (los eritrocitos, no son lisados completamente o la digestin no fue completa),
por tanto la hemoglobina aparece como una halo verdoso alrededor de la colonia.
Contiene extracto de carne, triptona, cloruro de sodio y agar.
El agar sangre es un medio de aislamiento especialmente diseado para facilitar el
crecimiento de microorganismos exigentes, bacterias Gram-positivas y todas las especies
encontradas en muestras de origen clnico.
Contiene una mezcla de peptonas particularmente adaptada al cultivo de microorganismos
exigentes (estreptococos, Listeria...).
La presencia de sangre permite la determinacin de la hemlisis, criterio bsico en la
orientacin hacia la identificacin bacteriana.
Ejemplo de hemlisis caractersticas:
Streptococcus pneumoniae: -hemlisis, con una coloracin verdosa alrededor de la
colonia.
Streptococcus pyogenes: -hemlisis, con una zona transparente alrededor o debajo de la
colonia.
El agar sangre puede ser usado para hacer subcultivos y obtener cultivos puros.
Agar TCBS
TCBS (Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa,)- agar enriquecido, permite el crecimiento de
todos las especies patgenas del gnero Vibrio spp.5
Agar nutritivo
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso
est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
Agar nz
El agar nz permite un diagnostico bacteriolgico rpido de Salmonella y Shigella Las
colonias son fcilmente diferenciables de otras enterobacterias.
Agar Feniletil alcohol
Este agar selecciona especies de Staphylococcus mientras inhibe bacilos gamnegativos
como Escherichia coli, Shigella, Proteus, etc.
Agar R2A
Un agar inespecfico que imita el agua. Usado para anlisis del agua.
Agar Tripticasa soya (TSA)
TSA es una medio multiuso, producido por la digestin enzimtica de soya y casena. Es la
base de otros tipos de agar, por ejemplo el agar sangre est hecho de TSA enriquecido
con sangre. TSA permite crecer muchas bacterias semifastidosas incluyendo algunas
especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria, y Vibrio.
Agar Xilosa, Lisina, Desoxicolato
es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de bacilos entricos Gramnegativos,
especialmente del gnero Shigella y Providencia.
Agar cetrimida
Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras
especies del gnero Pseudomonas.
Agar Tinsdale
Contiene telurito de potasio y puede aislar Corynebacterium diphteriae.5
MEDIOS SIMPLES
BCP, Agar
Aislamiento de microorganismos comunes
El agar BCP (agar lactosa con prpura de bromocresol) es un medio de
aislamiento y diferenciacin para el desarrollo de todos los microorganismos
encontrados habitualmente en muestras de diverso origen.
Permite diferenciar los microorganismos fermentadores de lactosa de los
microorganismos no fermentadores.
Los organismos lactosa (+) producen colonias amarillas por acidificacin del
medio.
Los microorganismos no fermentadores producen colonias azules o
incoloras.
Las sales biliares y el cristal violeta hacen el medio selectivo para las
bacterias Gram-positivas.
Almacenamiento: la caducidad incluye una conservacin durante 4
semanas a 15-25C
Drigalski, Agar
Aislamiento selectivo de Enterobacterias y otras baxterias Gramngativas
El medio Drigalski es un medio selectivo de aislamiento y diferenciacin
utilizado para identificar Enterobacteriasy otras bacterias Gram-negativas
en heces, orins u otras muestras biolgicas.
Los microorganismos que fermentan la lactosa forman colonias amarillas o
amarillo-verdosas; el resto de microorganismos producen colonias azules,
verdes o azul-verdosas.
La presencia de desoxicolato sdico y cristal violeta inhibe el crecimiento de
bacterias Gram-positivas.
SS agar
Aislamiento selectivo de Salmonella y Shigella
El agar SS es un medi selectivo de aislamiento y diferenciacin
recomendado para la deteccin de las especies Salmonella y Shigella.
Se inocula directamente a partir de heces, de una suspensin de heces o de
caldo de enriquecimiento.
El medio detecta las colonias fermentadores de lactosa y las reductoras de
tiosulfato (produccin de H2S) colonies.
Los microorganismos fermentadores de lactosa producen colonias rosas, el
resto forman colonias incoloras.
Los microorganismos productores de H2S dan lugar a colonias con un centro
negro.
Hektoen agar
Selective isolation of Salmonella and Shigella
El agar Hektoen es un medio selectivo de aislamiento y diferenciacin
recomendado para la deteccin de las especies Salmonella y Shigella.
Se inocula directamente a partir de heces, de una suspensin de heces o de
caldo de enriquecimiento.
Los microorganismos que fermentan uno de los tres azcares presentes en
el medio forman colonias amarillas o rosa-amarillentas; el resto producen
colonias verdes o azul-verdosas.
Los microorganismos productores de H2S producen colonias con un centro
negro.
Las colonias de Shigella son verdes o verde azuladas sin centro negro.
CLED agar
Aislamiento de microorganismos del tracto urinario
El medio de CLED (Cistina Lactosa Electrolito Deficiente) es especialmente
til para aislamiento de micrrorganismos del tracto urinario.
Permite la diferenciacin entre bacterias fermentadoras de lactosa y las no
fermentadoras (indicador azul de bromotimol).
MEDIOS ESPECIFICOS
Sabouraud Gentamicina Cloranfenicol, 2 Agar
Aislamiento selectivo de levaduras y hongos
El agar Sabouraud Gentamicina Cloranfenicol 2 es un medio selectivo
recomendado para aislamiento de levaduras y hongos a partir de muestras
polimicrobianas.
En la nueva formulacin se ha aumentado la capacidad nutritiva, la
intensidad de color, la sensibilidad de deteccin y la especificidad del color
para los hongos.
El aumento del nivel de peptonas y dextrosa favorece el crecimiento de
cepas de hongos.
La presencia de gentamicina inhibe el crecimiento de la mayora de las
bacterias Gram-negativas y Gram-positivas.
La presencia del cloranfenicol mejora la selectividad frente a algunas
especies que pueden ser resistentes a la
gentamicina (estreptococos,Proteus, etc.).
El pH del agar es ligeramente cido, por lo que favorece el crecimiento
fngico ms que el crecimiento bacteriano.
Campylosel, Agar
Aislamiento selectivo de Campylobacter
El medio Campylosel es un medio slectivo para aislamiento
de Campylobacter intestinal (C. jejuni y C. coli principalmente) presente en
heces.
La presencia de sangre de cordero favorece el crecimiento de las especies
buscadas.
El uso de agentes reductores mejora la capacidad nutritiva.
La buena selectividad est asegurada por la presencia de antibiticos y
antifngicos en el medio que inhiben la mayora de los contaminantes
bacterianos y fngicos.
Las colonias caractersticas de Campylobacter son pequeas y grisceas, y
A7 Mycoplasma, Agar
Cultivo selectivo y recuento de micoplasmas urogenitales
El agar A7 Mycoplasma es unmedio selectivo para cultivo de micoplasmas,
especies de , U. urealyticum y M. hominis a partir de muestras
urogenitales. La especie Ureaplasma urealyticum se ha separado en dos
especies nuesvas denominadas Ureaplasma parvum yUreaplasma
urealyticum. Para utilizar este medio debern considerarse ambas como
especies de Ureaplasma.
Este medio combina una base nutritiva rica con peptonas, suero de caballo
y factores de crecimiento que favorecen el crecimiento de
micoplasmas (cistena, poliViteX, arginina, urea).
El aspecto de las colonias de micoplasmas se indica a continuacin:
Mycoplasma hominis
Colonias en forma de huevo frito: Colonias redondas con un centro
pronunciado rodeado de un halo ms claro. Una mezcla de
antibiticos inhibe el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram
positivas y Gram negativas contenidas en la muestra.
BCSA, Agar
Aislamiento selectivo de Burkholderia cepacia
El agar BCSA (Agar selectivo Burkholderia cepacia) es un medio
recomendado para aislamiento selectivo y deteccin de la especie
Burkholderia cepacia a partir de muestras clnicas, principalmente de origen
respiratorio (esputo y lavados broncoalveolares) en pacientes que sufren
fibrosis qustica..
La presencia de una base peptonada y azcares permite el crecimiento
ptimo de los microorganismos.
El cristal violeta y los organismos presentes en el medio inhiben la mayora
de las especies microbianas (inhibicin de especies dePseudomonas).
Un elevado volumen de agar por placa permite unas buenas prestaciones
para el cultivo en 72 horas.
Cetrimida, Agar
Aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa
El agar Cetrimida es un medio de aislamiento para la deteccin
dePseudomonas aeruginosa a partir de muestras de origen diverso.
El agar Cetrimida estimula la produccin de piocianina y la fluorescencia
de P. aeruginosa.
su formulacin se basa en una optimizacin del medio King A: La adicin de
un amonio cuaternario inhibe el crecimiento de la mayora del resto de los
microorganismos.
Las colonias caracteristicas presentan una pigmentacin verde plido
espontnea y fluorescencia verde bajo luz ultravioleta.
Gardnerella, Agar
Aislamiento selectivo de Gardnerella vaginalis
El agar Gardnerella es un medio de aislamietno selectivo para dereccin
de Gardnerella vaginalis en muestras genitales.
Gardnerella vaginalis, sola o asociada a algunas bacterias aerobias
(Mobiluncus, Bacteroides and Prevotella), es responsable de diversas
infecciones urogenitales.
La presencia de sangre humana favorece el crecimiento de las especies
estudiadas, ya que producen -hemolysis alrededor de las colonias. La hemolysis en agar con sangre humana es altamente indicativa de presencia
de G. vaginalis.
Los antibiticos incluidos en el medio inhiben la mayora de los
contaminantes Gram-negativos y de las levaduras.
Pylori, Agar
Aislamiento selectivo de Helicobacter pylori
El agar Pylori es un medio de aislamiento selectivo para deteccin
deHelicobacter pylori en biopsias gstricas.
Helicobacter pylori es uno de los agentes causales de la gastritis y est
asociado al desarrollo de lceras gstricas y duodenales.
Helicobacter pylori es una bacteria microaerfila cuya viabilidad se ve
reducida en contacto con el aire.
Estas caractersticas deben tenerse en cuenta para el transporte y el cultivo.
La presencia de plasma de caballo y PolyViteX favorece el crecimiento de las
especies buscadas.
La presencia de antibiticos en el medio inhibe el crecimiento de la mayora
de los contamiantes bacterianos.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se
combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y
el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al
color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal
de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.
Agar TSI
El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de
los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:
1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no cido sulfhdrico.
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:
Agar Levine
Colonias de E.coli sobre agar Levine.
El Agar Levine o Agar EMB Levine es un medio de cultivo usado para el aislamiento y
diferenciacin de E.coli, tiene un aspecto purpreo, aunque naranja tras su esterilizacin,
es semislido, y est destinado al cultivo en placa.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que
inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciacin de bacterias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no
fermentadoras, y colonias de color azulado-negro con cierto brillo metlico, las
fermentadoras.
Las colonias de E.coli sobre agar Levine miden 2-3mm de dimetro, con centros oscuros,
casi negros, y pueden presentar o no cierto brillo verde metlico.
M e d i o d e c u l t i vo T B X
Medio de cultivo TBX es un medio cromognico para la deteccin y
recuento de E.coli -glucuronidasa positiva en muestras de alimentos
de acuerdo con la norma.
La presencia de E.coli indica contaminacin fecal y la posible
presencia de patgenos peligrosos tales como bacterias del tipo Vibrio
cholerae, Salmonella, Pseudomonas etc,. o virus y parsitos
intestinales. Las infecciones derivadas de la ingestin de material
contaminado pueden ser peligrosas y potencialmente mortales.
El agar TBX es un medio cromognico altamente selectivo ya que las
sales biliares contenidas en su formulacin inhiben las bacterias gram
+. La actividad B-D-glucoronidasa especfi ca de E.coli queda
detectada por el agente cromognico X-glucoronido de la frmula.
Fundamento
Este medio de cultivo, formulado por Rustigian y Stuart, presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad buffer.
El extracto de levadura es la nica fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y cofactores, y aporta los nutrientes
esenciales para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el
indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa.
Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrogeno proveniente de la urea, la hidrolizan,
liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador
rojo fenol del amarillo al rojo.
Su uso, se recomienda para diferenciar Proteus spp. de otros gneros.
Para organismos que hidrolizan la urea lentamente, es recomendable usar el medio de Christensen (B02-109-05, B02109-06).
Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la
glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Fundamento
El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la importancia del significado taxonmico del
metabolismo oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.
Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de
los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubacin, se puede diferenciar bien el metabolismo oxidativo
o fermentativo, as como la no utilizacin de un hidrato de carbono por la bacteria en estudio.
En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentracin de un determinado hidrato de carbono, hace que
los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas utilicen la triptena
presente con la consecuente produccin de reaccin alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un
microoganismo oxidativo.
El fosfato dipotsico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de
bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio cido. El contenido de agar, da la propiedad de ser
un medio semislido, y permite determinar la movilidad y la distribucin de los productos cidos en el medio de cultivo.
La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero tambin pueden agregarse
otros azcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre otros.
Por oxidacin o fermentacin de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el indicador de pH vira del
color verde al amarillo.
Resultados
El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentacin u oxidacin, produce acidez en el medio, con el consecuente
viraje del color verde al amarillo.
a-Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reaccin cida solo en el tubo
abierto.Presentan poco o nulo desarrollo y ausencia de produccin de cido en el tubo cerrado.
b-Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio: producen una reaccin cida en ambos tipos de
tubos.
c-Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios ninguno de los 2 tubos, los
cuales permanecen verdes.
Se debe informar: produccin de cido (A), cido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-).
Tambin, puede informarse si el organismo es mvil, cuando crece lejos de la lnea de inoculacin.
Las reacciones tpicas son las siguientes:
Reaccin
Tubos con
Tubo Abierto
Tubo cerrado
reaccin
Oxidacin
Fermentacin
Sin oxidacin o
fermentacin
Abierto
Amarillo (A)
Ninguna
Verde (-)
Amarillo (A)
Amarillo (AG)
Verde (-)