MEDIOS DE CULTIVO

Estudiantes:

ARCE CULQUI, Lisbeth Jhobana

GUIOP TRIGOSO, María del Pilar
REVATTA BUSTOS, Úrsula Fiorela
ROMERO DELGADO, Abner Jhoel
VALDIVIA TORRES, Eduard
ZALASAR CHAVEZ, Sandra Rocio
Breve reseña de los medios
de cultivo
• La microbiología empieza a surgir a partir del descubrimiento del
microscopio y comienza la observación de los primeros microorganismos,
pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la
utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de
inflexión en su evolución.
• El micólogo Brefeld quien consigue aislar y cultivar esporas de hongos a
partir de gelatina; sin embargo, en 1878 Lister populariza un método
enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio
líquido.
• En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la
microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico alemán
Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas)
como solidificante y es en 1887 que Petri, su ayudante, empieza a usar
placas de cristal para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio.
 Medios de cultivo
Un medio de cultivo es una técnica que se
practica en los laboratorios, que consta de un gel o
una solución que contiene los nutrientes necesarios
para permitir el crecimiento de virus,
microorganismos, células, tejidos vegetales o
incluso pequeñas plantas, en condiciones
favorables de pH y temperatura Figura 1. medios de cultivo
obtenido de médium.com

Son esenciales en el Laboratorio de

Microbiología por lo que un control en su
fabricación, preparación, conservación y uso,
asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos.
Importancia de los medios de
cultivo
Los medios de cultivo tienen la capacidad de
proporcionar a los microorganismos las condiciones físicas,
químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de
forma controlada

Un medio de cultivo también nos sirve como un método

fundamental para el estudio de las bacterias y otros
microorganismos que causan enfermedades en medicina humana
y veterinaria.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Disponibilidad de nutrientes adecuados
Si deseamos obtener un medio de cultivo para una
investigación microbiológica debe contener como mínimo
carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales inorgánicas. En
ocasiones será necesario el uso de vitaminas y sustancias
inductoras de crecimiento, debe haber la presencia de
sustancias que puedan donar o captar electrones en las
reacciones químicas que puedan ocurrir. Cada una de
estas sustancias se administran en forma de infusiones de
carne, extractos de carnes o extractos de levaduras.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Consistencia adecuada del medio
A partir de un medio liquido se puede añadir
productos como albumina, gelatina o agar y llevarlos a
medios sólidos y semisólidos.

Los medios que son solidificados con gelatina tienen el

problema de que muchos microorganismos no pueden
desarrollarse en medios inferiores al de punto de fusión de
este solidificante y de otros tienen la capacidad de licuarla.

Los medios solidos son los más utilizados por su

versatilidad y comodidad, también los medios líquidos son
utilizados, pero en menor proporción.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Presencia o ausencia de oxígeno
Una gran mayoría de bacterias crecen en una
atmósfera con tensión normal de oxígeno, pero hay
microorganismos que crecen en ambientes sin oxígeno
ambiental, a estos microrganismos se les denomina
anaerobios estrictos. Los microorganismos microaerofilos
crecen en condiciones atmosféricas parcialmente
anaerobios (oxígeno reducido) y los microorganismos
facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
todo tipo de condiciones.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad tanto en el
medio como en la atmósfera es muy importante
para el buen desarrollo de las células vegetativas
microbianas en los cultivos. El mantenimiento en
las estufas de cultivo debe ser a 35-37°C
proporcionando una fuente de agua que
mantenga la humedad necesaria y evitar que el
medio se deseque y así los cultivos tengan un
buen crecimiento.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos tienen mejor

crecimiento y desarrollo en la oscuridad que con presencia de
la luz solar a excepción de los microorganismos fotosintéticos.

pH

Las concentraciones de iones de hidrógenos son muy

importantes para el crecimiento de los microorganismos, un
PH neutro ayuda a un mejor desarrollo de estos, aunque hay
algunos medios que son medio ácidos.

La presencia de ácidos o bases en grandes concentraciones

no impide el crecimiento bacteriano, pero si inhibirlo o alterar
sus procesos metabólicos normales.
Condiciones generales para el
cultivo de microorganismos
Temperatura
Existen microorganismos que van a crecer en
diferentes temperaturas como:
- Mesófilos: crecen de forma óptima a temperaturas
entre 15 y 145 °C.
- Psicrófilos: crecen a 0°C
- Termófilos: crecen a 80°C
- Hipertemófilos: crecen a temperaturas mayores a
80°C.
Esterilidad del medio

Los medios deben estar perfecta y debidamente

esterilizados para que no aparezcan o crezcan otras
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o impedir el
crecimiento microbiano.
Clasificación de los medios
de cultivo
• Según su estado físico

• Según su composición

• Según su finalidad en microbiología

• Selenito:
Según su estado físico
(consistencia)
MEDIOS LÍQUIDOS
No presentan agregados de agar. Son denominados
caldos ya que contienen los nutrientes disueltos en agua. Se
utilizan para favorecer el desarrollo bacteriano de células
estresadas. Por ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo
Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud, etc. (Aulacio, 2008)
• Caldo con carne picada: este medio se emplea para
enriquecer y conservar el desarrollo de bacterias anaerobias.
• Caldo nutritivo o caldo de infusión de cerebro y corazón
(BHI): contiene extracto de carne y cloruro sódico. Puede
complementarse con peptonas, extracto de levadura y/o
glucosa.
• Caldo para Gram negativos: se emplea como caldo
selectivo para el cultivo de Salmonella y Shigella a partir de
muestras de heces e hisopos rectales. La adición de mayor
cantidad de manitol que de glucosa estimula el crecimiento de
los patógenos fermentadores de manitol y no es favorable
para Proteus
Según su estado físico
(consistencia)
MEDIOS LÍQUIDOS

• Caldo selenito F: es un caldo con selenito sódico diseñado

para el enriquecimiento de salmonelas. El selenito inhibe el
crecimiento de coliformes y enterococos.
• Caldo tetrationato : es selectivo para especies de
Salmonella y Shigella. Es un Caldo base de peptona que
incluye iodo, ioduro potásico, sales biliares, tiosulfato de sodio
y tetrationato, que permiten el desarrollo de bacterias que
contienen la enzima tetrationato reductasa, como Salmonella,
pero impiden el desarrollo de las bacterias Gram positivas y
resto de enterobacterias.
• Caldo tioglicolato: es un caldo que favorece el crecimiento
de anaerobios, aerobios, microaerófilos y microorganismos
exigentes. El ácido tioglicólico también actúa como agente
reductor, disminuyendo el potencial de óxido-reducción del
medio.
Según su estado físico
(consistencia)
MEDIOS SÓLIDOS

Se utilizan para obtener bacterias aisladas por la

formación de colonias sobre la superficie del medio de cultivo
y para el estudio de la morfología de las colonias, lo que no
permiten los medios líquidos. Contienen del 1 al 2 % de agar.
• Agar Sabouraud: también conocido como agar dextrosa
Sabouraud, es un medio de cultivo sólido, especialmente
enriquecido para el aislamiento y desarrollo de hongos,
como levaduras, mohos y dermatofitos. (Gil, s.f.)
• Agar chocolate: este medio usa la misma base que el
agar sangre. En un principio, los eritrocitos se adicionaban
a la base fundida y luego se elevaba la temperatura
(alrededor de 85°C) para lisar parcialmente las células, lo
que otorgaba al medio el color pardo-chocolate.
Actualmente, la hemoglobina y otros nutrientes presentes
en los lisados de los glóbulos rojos, se añaden como
suplementos a un agar base muy rico.
Según su estado físico
(consistencia)
MEDIOS SÓLIDOS
• Agar BHI con antibióticos: el agar BHI adicionado de
cloranfenicol y cicloheximida se utiliza para el
aislamiento selectivo de hongos patógenos. La
cicloheximida impide el crecimiento de hongos
saprófitos mientras que el cloranfenicol actúa como
agente antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas
como Gram negativas. La incorporación de ambos
proporciona una mayor selectividad frente a hongos
saprófitos y bacterias.
• Agar SS (Salmonella-Shigella): está compuesta de
sales biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el
colorante verde brillante. El carácter diferencial se basa
en la fermentación de la lactosa. Las colonias lactosa
positivas son de color rojo, mientras que las lactosas
negativas son transparentes (Shigella).
Según su estado físico
(consistencia)
MEDIOS SEMI SÓLIDOS

Contienen 0,3 al 0,7 de agar. Se utilizan para

estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor
porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.

Figura 2. clasificación de medios de cultivo según su estado físico. Obtenido

de SlidePlayer.com
Según su composición
MEDIOS COMPLEJOS
Los medios complejos fueron los primeros medios que se
empezaron a utilizar. Los medios más empleados se preparan a
partir de tejidos de animales y en algunas ocasiones de
vegetales. Este medio de cultivo puede tener algunos
inconvenientes en el momento de la experimentación en el cual la
reproductibilidad no será exacta.
MEDIOS SINTÉTICOS
Son los medios de cultivo que en su composición contienen solo o
exclusivamente sustancias químicas conocidas y disueltas en
agua destilada en determinadas proporciones. Es un medio de
composición perfectamente definida.
MEDIOS SEMISINTÉTICOS
La existencia de ciertos gérmenes que exigen un gran número de
factores para su crecimiento lo cual hace que un medio sintético
para estos gérmenes sea imposible o demasiado cara, es por eso
que es necesario aportar factores de crecimiento bajo la forma de
un extracto orgánico complejo como extractos de levadura,
extracto de tejidos, etc.
Según su finalidad en
microbiología
MEDIOS NUTRITIVOS:
son medios simples que contienen los nutrientes básicos para
permitir el crecimiento de muchas bacterias heterótrofas.
MEDIOS SELECTIVOS:
permiten el crecimiento de un solo tipo de microorganismo al
añadir el agar nutritivo ciertos productos especiales puede impedir
el desarrollo de algunos grupos bacterianos sin inhibir otros.
MEDIOS NO SELECTIVOS:
contienen suficientes nutrientes como para soportar el crecimiento
de gran variedad de microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO:
son medios no selectivos al que se le agrega sustancias como
sangre, suero, vitaminas, amino ácidos u otros componentes ricos
en compus orgánicos provenientes de animales o plantas, el
caldo o agar nutritivo, les proporciona sustancias nutritivas
complementarias que permiten el cultivo de microorganismos
heterótrofos exigentes.
Selenito
Fue diseñado por Leifson para el enriquecimiento
de muestras en donde se sospecha la presencia de
bacterias entero patógenas del género Salmonella. Este
medio cumple con las exigencias de la Asociación
Americana de Salud Pública (APHA), y por ello es
aceptado para la investigación de presencia de Salmonella
en muestras de heces, orina, alimentos líquidos o sólidos,
agua, entre otros.
MEDIOS DIFERENCIALES
son medios de cultivo que permiten establecer diferencias
entre diferentes tipos de microorganismos. Por ejemplo, el
agar de sal.
Requerimientos de los
medios de cultivo
Los requerimientos de los medios de cultivo son
específicos de:
• Fuentes de carbono
• Nitrógeno
• Elementos no metálicos
• Elementos metálicos

Figura 3. Tabla periódica de los elementos químicos.

Obtenido de SlidePlayer.com
Preparación de medios de
cultivo
La preparación conlleva una metodología exacta y precisa con las soluciones sean
líquidas, sólidas (en polvo), con soluciones salinas y/o nutrientes que completan el
medio de cultivo para establecer el explante vegetativo. Muchas de las
preparaciones llevan nutrientes en poca cantidad y unas llevan más de lo requerid,
esto para que la propagación sea más fácil y adaptable al medio del sustrato o si no
es viable para ello

La correcta preparación de los medios de cultivo tiene fundamental importancia en

los resultados que se obtienen en su empleo, especialmente en los utilizados para
cultivar microorganismos de difícil desarrollo. Para ello algunas técnicas son:
Preparación de medios de cultivo

• Pesar los nutrientes necesarios para la preparación del

medio.

• Se disuelven los componentes en agua destilada o

desmineralizada de reacción neutra, agitando para
embeber el agar y luego se completa a volumen.

• Se controla el pH con un indicador.

• Se calienta a baño María hirviendo o sobre tela de

amianto hasta disolución completa del agar (no deben
quedar gránulos de agar en las paredes del recipiente).

• Se distribuyen en frascos apropiados.

• Esterilización y almacenamiento.
Requisitos provistos por el
fabricante
• Existen ciertos requisitos de los medios de cultivo que
son provistos por el fabricante como los lotes de
medios debes estar debidamente identificados o que
cada lote recibido debe ir acompañado de evidencias
del cumplimiento de las especificaciones de calidad.

• La información que se debe incluir como parte de las

especificaciones de calidad son las siguientes:
Requisitos provistos por el
fabricante
• Nombre del medio y lista de componentes,
incluido cualquier suplemento.

• Fecha de vencimiento del medio

• Condiciones de almacenamiento

• Control de esterilidad

• Control de crecimiento de los microorganismos

de interés (target) y de los microorganismos no
deseados (no target) y criterios de
aceptabilidad.

• Controles físicos y criterios de aceptabilidad

Manejo y almacenamiento de
los medios de cultivo
El laboratorio debe registrar: la fecha de recepción, de apertura del envase,
de caducidad.

El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas. Para

ello:

• Envases: deben estar herméticamente cerrados (especialmente medios

deshidratados).

• No deben utilizarse medios deshidratados que presenten

apelmazamiento o un cambio de color.

• Con respecto al almacenamiento de los medios de cultivo, los

deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que señale el fabricante.
Manejo y almacenamiento de
los medios de cultivo
• Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de
estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe
ser minuciosos de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos así para
evitar la entrada de humedad, debido a que la absorción de agua produce
cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo, etcétera, lo cual
alteraría resultados posteriores.

• Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo
preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde
se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia, pH) y microbiológicas
(esterilidad y promoción de crecimiento) asegurando que cumplan con los
requisitos de calidad
Utilización de los medios de
cultivo
• Industria farmacéutica y biotecnológica: cultivo masivo de microorganismos productores de
metabolitos (proteínas, factores de crecimiento, aminoácidos, péptidos, antibióticos, etc.), control de la
calidad (control de proceso, materias primas, productos terminados, aguas, residuales y ambiente)

• Industria alimenticia: cultivo masivo de microorganismos productores de sustancias nutritivas y

alimentos (proteínas y compuestos saborizantes entre otros), obtención de alimentos fermentados
(yogurt, otros productos lácteos y alimenticios), control de la calidad (control de proceso, materias
primas, productos terminados, y ambiente). Con relación a los sectores productivos como agricultura y
química en el cultivo de microorganismos (obtención de polímeros, azúcares), control de la calidad.

• Control del medio ambiente: control de las aguas y fuentes de abasto, control ambiental (aire, suelos),
control de residuales

• Investigaciones: estudios morfológicos, funcionales, sistemáticos y de otro tipo, dirigidos al

conocimiento de la flora microbiana, investigaciones relacionadas con el desarrollo de sustancias o
productos en las industrias y sectores anteriormente señalados.
 MARCO METODOLÓGICO
Individual Equipos
 Mascarilla  6 placas de Petri  Cinta masking
 Guantes  Matraces Erlenmeyer  Marcador
de 500
 Bata blanca  Hilo pabilo
para  1 autoclave
laboratorio  Jabón líquido para
 1 Estufa manos
 Papel kraft  Mechero de alcohol

Materiales  1 cocina eléctrica  Escobillón para tubos

 Refrigeradora  1 Agitador de vidrio
 1 pipeta  Fosforo
 Agua destilada  Detergente
 Alcohol de 96°  Franela
 Paquete de algodón  Papel toalla
 Gasa por rollo  Tijera
Metodología
Esterilización de materiales
• Las cajas Petri, pipetas y los medios de
cultivo envueltas se colocarán en la
autoclave a una temperatura de 120°C
durante 2h.
• Después de sacarlas, dejarlas enfriar y
colocarlas en el refrigerador, evitando la
contaminación con el medio, para ser usada
posteriormente.
Observaciones
Agar Nutritivo

Figura 4. Caja Petri abierta “al aire” Elaboración propia.

En la figura 1, caja Petri abierta “al aire” lejos de la zona aséptica, se

observa que hubo un crecimiento regular (++) de colonias de bacterias y hongos
formadas sobre agar sólido en caja Petri, la colonia bacteriana presenta formas
circulares, puntiformes e irregulares, sus bordes son circulares y algunos
redondeados, además son blanquecinas, se encuentra en una superficie plana, se
observa una protuberancia en el centro de las colonias lo que le da una apariencia
de huevo estrellado. Se identifica colonias de Bacillus sp.
Observaciones
Agar Nutritivo

Figura 5 Caja Petri abierta “área aséptica”. Elaboración propia.

En la figura 2, caja Petri de Agar Nutritivo abierta en área aséptica, se

observa que hubo poco crecimiento (+) de colonias de bacterias y hongos
formadas sobre agar sólido en caja Petri, las colonias bacterianas son algunas
puntiformes, circulares e irregulares, sus bordes son lobulados y redondeados.
Por otro lado, presenta un color blanquecino y en zonas amarillento. Se identifica
Bacillus sp
Observaciones
Agar Nutritivo

Figura 6. Caja Petri “control”. Elaboración propia.

En la figura 3, caja Petri de Agar Nutritivo sin abrir se observa que no

hay crecimiento (-) de bacterias o hongos.
Observaciones
Agar Salmonella Shiguella

Figura 7. Caja Petri de Agar Salmonella Shiguella abierta “al aire” Elaboración propia.

En la figura 4 se observa abundante crecimiento (++) de colonias rojizas

las cuales indican los cuales indican que son microorganismos fermentadores de
lactosa, y podría indican presencia de Escherichira Coli. Por ser un medio
altamente selectivo algunas pocas sepas de Shiguella pueden no desarrollarse
adecuadamente en el mismo. Se observa un color naranja ligeramente
opalescente. Sin embargo, no se observa una estructura fija.
Observaciones
Agar Salmonella Shiguella

Figura 8. Caja Petri de Agar Salmonella Shiguella abierta en “área aséptica”. Elaboración propia.

En la Figura 5 se observan poco crecimiento (+) de colonias con punto

negro, lo cual indica que son microorganismos productores de SH2, que es la
formación de sulfuro de hierro, presenta un color naranja ligeramente opalescente,
tiene una estructura puntiforme. Son pocos los microorganismos fermentadores de
lactosa que desarrollan y acidifican el medio haciendo viral el rojo. El punto negro
indica la formación de ácido sulfúrico.
Observaciones
Agar Salmonella Shiguella

Figura 9. Caja Petri de Agar Salmonella Shiguella en “control”. Elaboración propia.

En la figura 6 se observa que no hay crecimiento de microorganismos;

sin embargo, el agar mantiene su color característico naranja ligeramente
opalescente.
Análisis de resultados
• Los resultados obtenidos indican que las condiciones del medio ambiente
como condiciones físico químicas tienen una gran influencia sobre el
crecimiento de los microorganismos.
• La temperatura, el pH, la tensión de CO2, la humedad, la presión y la
aireación, son factores externos que no fueron controlados por ellos se
evidencia que existen una optimización en el crecimiento microbiano. Los
hongos son muy comunes en el aire por lo que en las cajas Petri que fueron
expuestas en este medio, lejos del mechero de alcohol, se evidencia
crecimiento microbiano.
• El agar nutritivo en un medio de cultivo deshidratado presenta un color beige
claro, homogéneo, identificándose posiblemente Bacillus Sp. El Agar
Salmonella Shiguella S y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen adecuadamente en el medio de cultivo, y producen colonias
transparentes.
• El tiempo de exposición a los medios determina el crecimiento de ciertos
microrganismos ya sea de fácil crecimiento como en un periodo de 24 horas o
exigentes como en 48 horas.
• Un análisis microbiológico permitiría determinar con exactitud a qué
microorganismos identificamos y una investigación minuciosa podría decirnos
a qué grupo taxonómico pertenecen.