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Medio de cultivo

Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio (véase microbiología) que consta de un gel o una
solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables
de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso
pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones.
Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya
preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo
es variado: antibiograma, identificación, multiplicación.
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie
de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que
contenga células vivas.
Según sus cualidades físicas[editar]

 líquidos

 semisólidos

 sólidos
Según su formulación[editar]

 Químicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que
hay en el medio.

 Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no


se conoce exactamente cuál es la composición del medio; sin embargo, presenta la ventaja de
que ya están presentes todos o casi todos los elementos que una célula puede requerir.
Según su uso[editar]

 Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).

El Agar cistina-lactosa deficiente en electrólitos o CLED (Cysteine lactose electrolyte deficient)


es un medio de cultivo no inhibitorio usado en el aislamiento y diferenciación de organismos
urinarios. Al ser deficiente en electrólitos, previene del crecimiento exagerado de las especies
de Proteus. La cistina promueve la formación de colonias enanas dependientes de cistina. Los
fermentadores de lactosa producen colonias amarillas en el agar de CLED; las NO
fermentadoras de lactosa dan colonias azules. Tiene un pH aproximado de 7.3.
El agar CLED o agar Brolacin tiene la característica de ser semitransparente y por la acción del
azul de bromofenol las colonias de bacterias fermentadoras de lactosa se tiñen de color amarillo
mientras que las no fermentadoras se tiñen de azul.

El agar de CLED contiene:

Peptona 4g/l

'Lab Lemco'
3g/l
powder

Triptona 4g/l

Lactosa 10g/l

L-Cistina 128 mg/l

Azul de bromotimol 20 mg/l

Agar No. 1 15g/l

 Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado


(hongos, bacterias entéricas, protozoos...).

Un medio selectivo es un medio de cultivo en el que sólo puede crecer un tipo de


microorganismo (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).

Un ejemplo de medio selectivo sería usar un medio rico en un antibiótico, como la ampicilina,
para permitir únicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a éste.

 Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio.
Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su respiración, etc. (por ejemplo, medio
de McConkey).Un medio diferencial consiste en un medio de cultivo que es capaz de
distinguir dos microorganismos por su crecimiento diferencial en el mismo, usando las
propiedades metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un
indicador que evidencia por ejemplo, un pH ácido en su entorno.

Existen muchos medios diferenciales, en la práctica rutinaria se usan los siguientes:

Agar TSI: Triple sugar iron (hierro tres azúcares)


El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de los
medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:
Fermenten o no glucosa.
Fermenten o no lactosa o sacarosa.
Produzcan o no ácido sulfhídrico.
Produzcan o no gas.

Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:


Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a amarillo el
indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio
permanecerá de color rojo.
Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie
volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará de
color rojo.
Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará un
ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento
pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica
directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.
Composición
Peptona 159 g
Extracto de levadura 3 9.9g
Extracto de carne 3 g
Sacarosa 10 g
Sulfato de hierro 0,20 g
Cloruro sódico 5g
Tiosulfato de sodio 0,30 g
Rojo fenol 0,024 g

Agar citrato
Agar urea
Caldo peptonado: para prueba de indol
Caldo MR-VP: para prueba rojo metilo y Voges Proskauer
LIA: Lisine iron agar (lisina hierro)
SLU: Sacarosa, lactosa y urea. Visualizaciòn de movimiento
OF: Oxidación-fermentación. Para diferenciar metabolismo aerobio y anaerobio.

 Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de


una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de
microorganismos en un mismo medio.

Un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene los nutrientes necesarios


para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, entre ellos algunos de
los más exigentes. Se utilizan comúnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que
están presentes en la muestra. En general el uso de los medios de enriquecimiento se utiliza
para determinar ausencias de un microorganismo determinado, o detectar si tengo alguno pero
está en muy baja proporción.

Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo ordinarios. Requieren ingredientes que


promueven el crecimiento, como la sangre, glucosa, suero, huevo, entre otros. Los medios de
enriquecimiento contienen ingredientes que aumentan las cualidades estimulantes del medio
propiciando un crecimiento elevado.Otra característica de los medios de enriquecimiento es que
pueden contener componentes químicos que inhiben ciertos tipos de microorganismos. De este
tipo de Medios de cultivo se puede obtener un subcultivo de una colonia aislada. 1

Este método se utiliza para los microbios que se encuentran en pequeñas cantidades en la
muestra y cuyo crecimiento es lento, que las especies presentes. Algunas bacterias tienen
requisitos muy específicos para su crecimiento. El principio del cultivo de enriquecimiento es
el control de los nutrientes y las condiciones de cultivo (la temperatura, el suministro de aire,
luz, etc pH) de tal manera que se adapte sólo a la especie.

Si un medio que contiene una solución salina con NaNO2 a pH 8,5 se inocula con una muestra
de tierra de jardín y se incubaron en el aire en la oscuridad a 25-30 ° C, las colonias puras de
Nitrobacter se puede obtener. Los cultivos de bacterias del suelo, otras pueden ser
selectivamente enriquecido por la variación de la composición del medio y las condiciones de
incubación2

Algunos ejemplos de medios de cultivo de enriquecimiento son:


Agar sangre, un medio enriquecido en el que los suplementos de la sangre les proporciona
todos los nutrientes básicos.
El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de
5 % de sangre ovina, 1también puede usarse sangre humana, para cultivos en
una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se
usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos
(que es un factor de Virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las
colonias se determina el tipo de hemólisis que posee: 2
 alfa: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a
metahemoglobina en el medio)
 beta: halos incoloros (hemolisis total)
 gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)

FUNDAMENTO:
Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de prácticamente todos los
microorganismos que pudieran estar presentes. Si se añade sangre se pueden
determinar las distintas formas de hemólisis que pudieran tener lugar. Si se calienta
se obtiene el Agar Chocolate, también muy empleado. Por la adición de distintos
antibióticos se obtienen medios con caracteres selectivos.
Fórmula (por litro):
Infusión de Corazón (a partir de 375 g)........................... 10,0 g
Peptona de Carne ...................................... 10,0 g
Sodio Cloruro ............................................. 5,0 g
Agar Agar............................................................ 15,0 g
pH final: 7,3 ±0,2
Preparación:
Suspender 40 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir
durante 1 minuto. Esterilizar a 121º C durante 30 minutos (para cantidades de más
de 1 litro). Homogeneizar y distribuir en tubos de ensayo y esterilizar a 121º C
durante 15 minutos. Para preparar placas de Agar Sangre incorporar 5 a 8% de
Sangre desfibrinada antes de distribuir en placas. Para una mejor conservación de la
placa de Agar Sangre y para obtener halos hemolíticos más claros ajustar el pH a
6,8 ±0,2. Si se utiliza como medio basal se obtendrán mejores crecimientos a pH
7,3 ±0,2.
Modo de empleo:
Sembrar las placas en la superficie del medio. Incubar a 37º C de 24 a 48 horas.

Control de Calidad:
Control físico-químico:
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total. Color: tostado. pH: 7,3 ±0,2
Control microbiológico:
A partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºC y observados a las
24 horas. Placas preparadas con un 5% de sangre de carnero.
Neisseria meningitidis ATCC 13090 , Crecimiento : Bueno , Gama Hemolisis
Staphylococcus aureus ATCC 25923 , Crecimiento : Bueno , Beta Hemolisis
Beta Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 , Crecimiento : Bueno , Gama Hemolisis
Streptococcus pneumoniae ATCC 6303, Crecimiento : Bueno , Alpha Hemolisis
Alfa Streptococcus pyogenes ATCC 19615 , Crecimiento : Bueno , Beta Hemolisi

Agar CLED
Agar McConkey
Una placa de cultivo de McConkey incubada con E. coli.
El agar MacConkey es un medio de
cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar
selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto
intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.1 El cristal
violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos grampositivos, lo que
permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias entéricas
que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando
el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro.2

Ingredientes[editar]
Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares (medio
inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y algunas
especies de Staphylococcus), colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de
bacterias Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos que
fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.3
Usos[editar]

Agar MacConkey con colonias Lac+ (izquierda) y colonias Lac- (derecha).


Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que
pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).
Lac+[editar]
Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias Lac+ como lo son Escherichia
coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual hace que baje el pH de 7,1 ± 0,2
lo que tiene como consecuencia la aparición de colonias de color rosadas o rojas. Algunas
bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera lenta, estas siguen siendo Lac+ por
ejemplo: Serratia y Citrobacter.
Lac-[editar]
Bacterias que no fermenten la lactosa como lo
son Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando amoníaco, lo
cual incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

Agar chocolate
Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una
variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos, que han sido lisados por el suave
calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de
bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.
Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hemina, componentes
que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico
para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos. El agar se llama así debido a su
parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.
Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy útil
para coprocultivos.

Agar Sabouraud
El agar Sabouraud es un medio de cultivo que por sus características funciona
como medio de enriquecimiento para hongos y que en caso de contener cloranfenicol u
otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos. El medio
contiene peptonas1 y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento de
los hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos,
especialmente dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de
bacterias filamentosas tales como Nocardia.234
Fue utilizado por primera vez por Raymond Sabouraud en 1870. Más tarde Chester W.
Emmons mejoró el medio acercando el pH al neutro (pH entre 5,5 y 6,0) y disminuyendo
el nivel de glucosa para permitir el crecimiento de otros subcultivos de hongos. 5
Composición típica
Contiene normalmente:6
 40 g/L glucosa
 10 g/L pluripeptona
 15 g/L agar
 0,05 g/L [cloranfenicol]
 pH 5.6 como máximo

Caldo Selenito

 Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el


crecimiento de una especie.

 Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes


transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentración simple.