UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL ROMULO GALLEGOS

AREA DE MEDICINA VETERINARIA

ZARAZA EDO. GUARICO
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA

Análisis bacteriológico del

Bachilleres:
Carpio Araynel 28.705.601
Profesora;
De Rosa Pablo 28.224.078
Mv. Anarelys De Jesus Motaban Yonelca 28.105.639
 ¿Por
¿Por qué
qué yy para
para qué?
qué?
El agua de consumo puede verse completamente clara, no tener ni olor ni sabor extraño y, aun y así, estar
contaminada. En ella se pueden transportar microorganismos patógenos que representan un riego para la
salud de la población, pero sobre todo es mas común encontrar microorganismos de origen intestinal.
Por esto, normalmente los análisis de rutina no investigan directamente a los gérmenes patógenos, sino que
la atención va dirigida al recuento de m.o “indicadores” de contaminación fecal.

Aspectos
Aspectos aa tener
tener en
en cuenta
cuenta
Cuando se realiza un análisis bacteriológico de muestras de agua, es indispensable tener en cuenta lo
siguiente:
- La muestra representativa del abastecimiento de agua a analizar debe ser tomada en recipientes
estériles.
- Si el agua es clorada, conviene agregar al recipiente estéril 0,1 ml de una solución al 10% de trisulfato
de sodio por cada 100ml de muestra, para neutralizar la acción del cloro.
- La muestra debe analizarse lo mas pronto posible después de recogida (no mas de 6-8 hrs después). En
caso de no poder realizar en análisis en ese lapso, entonces se debe conservar a una temperatura de
entre 0° y 10°c
 Objetivos
Objetivos de
de esta
esta practica
practica
En esta practica se busca, a partir de una muestra inicial de agua, determinar la potabilidad de la misma y,
de esa forma, saber si es o no aceptable para el consumo. Para ello, se llevan a cabo una serie de
experimentos que se basan en:
1) Recuento del N° total de bacterias aerobias mesófilas o anaerobias facultativas.
2) Recuento de bacterias coliformes.
a) Determinación de la existencia de E. coli
b) Determinación de la existencia de bacterias IAC.
Mediante el resultado final de estos procedimientos se tendrá un índice de la calidad microbiológica del agua
en estudio, así como también de su posible peligrosidad.
- El recuento de bacterias aerobias mesófilas o anaerobias facultativas dará una idea de la cantidad global
de bacterias presentes, pero no indicará el grado de peligrosidad que puedan poseer.
- El recuento de bacterias coliformes da un indice de la posible contaminación fecal del agua. Se toma E.
coli como indicadora, no por su patogenicidad sino porque se encuentra en cantidad apreciable en el
intestino humano y tiene mayor capacidad de supervivencia en agua que otras especies también presentes
en él. Sin embargo, su presencia indica que también es altamente probable la existencia de otras bacterias
patógenas, tales como Salmonella y Shigella.
El limite aceptado de coliformes en agua para considerarla potable es de 2 bacterias/100ml
 Ensayo n° 1
 Recuento del n° total de bacterias aerobias mesófilas o AF
1) Realizar la dilución de la muestra original de agua 2) Transferir 1ml de cada solución a placas de Petri
utilizando 3 tubos con 9ml de sol fisiológica estéril estériles y sin medio de cultivo. Posteriormente
hasta obtener una concentración de 1:1000 de agregar a cada una de las cajas de 15-20ml de agar
nutritivo fundido a baño maría y enfriado a 45° y agitar
1ml 1ml 1ml convenientemente. A manera de que las bacterias
Muestra queden embebidas en el medio.
original

9ml 9ml 9ml

S.F.E S.F.E S.F.E
3) Incubar a 37° por 48 horas.

4) Realizar el conteo de colonias en cada cultivo y Observación: El valor final hallado NO DEBE
sacar el UFC con los datos del cultivo que posea de ser mayor de 200 UFC por ml para que la
entre 30 a 300 colonias. muestra de agua pueda ser considerada potable
o viable.
 Ensayo
Ensayo n°
n° 2
2
 Determinación de bacterias coliformes totales
Como se mencionó anteriormente, los coliformes son el grupo de bacterias indicadoras de contaminación
fecal del agua. Son bacterias de morfología bacilar, anaerobias facultativas, Gram - no esporulantes y
fermentadoras de la lactosa. Durante la fermentación hay formación de gas, por ende no solo se usa el caldo
McConkey para evidenciar presencia de coliformes, sino que sumado a eso en cada tubo se coloca otro tubo
mas pequeño invertido o “Campana de Durham”, pues durante la fermentación el gas expulsado se
acumulará dentro de él.

“El n° mas probable” (NMP)

Caldo McConkey
Esta determinación se da bajo el esquema de “El numero más
Composición
probable”, el cual es un ensayo estadístico, por lo cual, al
-Sales Biliares (Impedir desarrollo de Gram +) aumentar el n° de veces que se realiza el experimento, aumenta la
-Lactosa probabilidad de obtener resultados positivos, es decir, la
-Cristal violeta (Favorecer únicamente el probabilidad de encontrar coliformes en las muestras. Por esto
desarrollo de entero-bacterias e inhibir el mismo, el experimento se realizará en un total de 9 veces, en tres
crecimiento de otros gérmenes Gram -) concentraciones diferentes (10ml, 1ml y 0,1ml).
-Purpura Bromocresol (indicador de pH)
 Continuación…
Continuación…
Procedimiento
1) Con una primera pipeta estéril, añadir 10ml de la muestra en los primeros tres tubos contentivos de
caldo McConkey. Realizar el mismo procedimiento con los siguientes tres tubos, pero ahora haciendo uso
de una nueva pipeta estéril con 1ml de la muestra original, y finalmente, con otra pipeta, agregar 0,1ml de
la muestra a los últimos tres tubos con caldo. De esta forma, se obtendrán los 9 tubos a tres diferentes
concentraciones de la muestra. Incubar a 37° por 48hrs.
2) Pasado el tiempo de incubación, en aquellos tubos en los que
exista un cambio del color morado del caldo (otorgado por el
purpura bromocresol) hacia un color AMARILLO se evidenciará la
10ml presencia de coliformes
3) Buscar el NMP de coliformes totales (X): Esto se busca
observando y evaluando la proporción estadística en la que los
tubos cambiaron de color, y comparándolos con la tabla de
1ml proporciones.
Muestra
original Proporción: 3 de 10ml - 2
0,1ml
de 1ml - 1 de 0,1ml = (3:2:1)
Valor X = 150 NMP de
10ml 1ml 0,1ml coliformes totales
 Continuación…
Continuación…
a) Determinación de E. coli.
A raiz del experimento anteriormente explicado, se puede realizar un nuevo análisis para determinar la
presencia de E. coli entre las entero bacterias coliformes halladas en los cultivos pasados. E. coli es
considerada la bacteria icono por su capacidad de resistir mas tiempo en el ambiente.
Procedimiento
1) Ubicar nuevos tubos con caldo McConkey, en la misma cantidad en que hubo positividad para coliformes en
el procedimiento pasado. Ahora sin necesidad de utilizar la campana de Durham. 2) Con un asa de platino
estéril, tomar muestra de cada uno de los tres tubos positivos para coliformes que resultaron de la
concentración de 10ml, e inocularlo en tres nuevos tubos con caldo McConkey (el asa debe ser esterilizada
siempre antes de tomar las muestras a inocular). 3) Realizar el mismo procedimiento para los tubos
positivos restantes, quedando así finalmente 3 de 10ml, 2 de 1ml y 1 de 0,1ml. 4) Llevar los 6 nuevos tubos a un
baño maría a 45° por 24 horas. 5) Pasado el tiempo, revisar los tubos y, en donde haya ocurrido el cambio de
color de morado a amarrillo, habrá positividad con presencia de E. coli. 6) Finalmente, según la proporción
resultante de positividad, buscar el NMP en la tabla estadística.

10ml Proporción: 2 de 10ml - 1 de 1ml - 0 de 0,1ml = (2:1:0)

1ml 0,1ml Valor X = 15 NMP de E. coli en 100ml
 Ensayo Final
b) Determinación de Bacterias IAC
IAC es la manera de identificar a las bacterias que no proceden de contaminación fecal, pues no son
bacterias normalmente habitantes del sistema digestivo ni humano, ni animal. Por ejemplo; Seudomona.
En este caso se utilizará el medio “Citrato de Koser”, que es un medio que permite identificar bacterias
que utilizan el citrato como única fuente de carbono, y al ser liquido permite observar patrones de
crecimiento.

1) Inocular con un asa de platino estéril, muestras de cada uno de los 9 tubos cultivados en busca de
coliformes, ahora en 9 tubos contentivos de Citrato de Koser.
2) Incubar a 37°c por 48 horas.
3) Revisar los patrones de crecimiento presentados por los microorganismos. Todo aquel tubo en que haya
existido un patrón de crecimiento caracterizado por turbidez, resultará positivo.
4) Según la proporción de positividad resultante, buscar el NMP en la tabla estadística.

Proporción: 1:0:0
Valor X = 4 NMP de bacterias IAC por cada 100ml