Universidad Tecnológica Centroamericana

Facultad de Ingeniería y Arquitectura

Área Académica de Ciencias y Matemáticas

Guía # 3 de Laboratorio de Ecología

Contaminantes de importancia en el tratamiento del agua residual
Microorganismos indicadores
(Coliformes totales y fecales)

Nombre: ___________________________ Número de cuenta: ____________

Docente: __________________________ Fecha: _______________________

Objetivo
1. Estudiar los principales microorganismos indicadores de contaminación en
el agua.
2. Estudiar las principales características bioquímicas de los Coliformes.
3. Determinar el NMP de Coliformes totales y fecales en una muestra de agua
potable.
Fundamento teórico
El agua para uso y consumo humano está sujeta a contaminación procedente de
asentamientos urbanos y rurales. Debido a ello, gran cantidad de virus, bacterias y
protozoarios se pueden transmitir por el consumo de agua contaminada y constituir
un riesgo potencial para la salud.
A través de diversos estudios se ha comprobado que de la mayoría de
microorganismos presentes en el agua solamente una fracción de ellos es capaz de
causar enfermedades en las personas que la ingieren. Entre algunos de estos
microorganismos podemos enumerar los siguientes: Vibrio cholerae, Salmonella y
Escherichia coli.
Sin embargo, aunque sólo una porción de microorganismos en el agua puede ser la
causa de una enfermedad, la misma puede llegar al extremo de quitarle la vida a
quien la padezca. Éste es el caso del cólera, la enfermedad que provoca la bacteria
conocida como Vibrio cholerae.
Para enfrentar este problema es necesario responder algunas interrogantes: ¿Es
necesario filtrar el agua?, ¿basta con filtrarla para desinfectarla?, ¿qué
procedimiento se puede considerar como un control adecuado de desinfección?,
¿qué medidas de desinfección y manejo se deben tomar para desinfectar el agua

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que se consume en el hogar?, ¿cuál es la cantidad mínima de desinfectante que se
puede usar para minimizar los riesgos por exposición al mismo?, ¿cuáles
desinfectantes, además del cloro, se pueden emplear sin causar otros daños a la
salud y al ambiente?
Los Coliformes como indicadores
Podemos definir la desinfección como la eliminación o inactivación de bacterias,
virus y parásitos presentes en el agua. Uno de los principales objetivos de la
desinfección es proteger las fuentes de abastecimiento de agua para uso y consumo
humano.
Desde hace mucho tiempo la desinfección se ha dirigido al control de enfermedades
asociadas con bacterias transmisibles por el agua, tomando como organismos
indicadores a los Coliformes.
Se ha usado este grupo de bacterias porque son más resistentes que las que
causan enfermedades intestinales y porque son las que se encuentran
principalmente en las heces fecales.
Con base en lo anterior se puede concluir que el agua que no las contiene es segura
para su consumo. El número de Coliformes que podamos encontrar en el agua es
proporcional al grado en que está contaminada.
Bacterias coliformes
Esta denominación general designa a un grupo de especies bacterianas que
comparten algunas características bioquímicas y son muy relevantes como
indicadoras de contaminación del agua.
Coliforme significa que tiene forma de coli. La bacteria principal del grupo de los
Coliformes es la E. coli, que fue descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von
Escherich en 1860. Escherich la bautizó como bacterium coli, es decir, como
bacteria del intestino, ya que coli proviene del griego kolon, que siginifica “intestino”.
Posteriormente se le cambió el nombre al de Escherichia coli en honor a su
descubridor.
El hábitat de este grupo se encuentra principalmente en el intestino de los humanos
y de los animales de sangre caliente, pero también están ampliamente distribuidos
en la naturaleza, especialmente en suelos y agua contaminada. Los Coliformes se
introducen en un gran número en el ambiente por las heces de humanos y animales.
Coliformes totales y Coliformes fecales (termotolerantes)
Como no todos los Coliformes son de origen fecal, fue necesario realizar pruebas
para diferenciarlos. Dentro del grupo denominado Coliformes se distinguen:

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• Coliformes totales: Bacilos Gram (_), fermentadores de lactosa con producción
de gas a 35°C (éstos comprenden la totalidad del grupo y no necesariamente
indican contaminación de origen fecal).
• Coliformes fecales (Termotolerantes): Bacilos Gram (_), fermentadores de
lactosa con producción de gas a 45°C (éstos comprenden a los Coliformes que son
de origen intestinal).
Procedimiento experimental
Equipo:
• Incubadora a 35°C.
• Incubadora a 35°C.
• Bulbo pipeteador.
• Pipetas de 10, 5 y 1 ml estériles.
• Mechero de gas bunsen.
• Gradilla.
Materiales:
• Tres tubos de ensayo con tapón de rosca que contengan 20 ml c/u de Caldo
Lauril.
• Sulfato (CLS) de doble concentración y campana de Durham.
• Seis tubos de ensayo con tapón de rosca que contengan 10 ml c/u de Caldo
Lauril.
• Sulfato (CLS) de concentración simple y campana de Durham.
• Tubos de ensayo con tapón de rosca que contengan 5 ml c/u de Caldo EC
con campana de Durham.
• Puntas para micropipetas de 10-100 DL estériles.
• Puntas para micropipetas de 100-1000 DL estériles.
• Algodón empapado con solución de alcohol al 70%.
• Papel toalla.
• Encendedor (o cerillos).
Preparación de la muestra:
Homogeneizar el frasco que contiene la muestra mezclando como mínimo 30 veces.
Formar un ángulo de 90° entre el brazo y antebrazo para realizar la homogenización.
Análisis:
1. Para el análisis se utilizarán las tres series de tubos con tres tubos c/u (9
tubos en total) que serán inoculados con volúmenes diferentes (10 ml, 1 ml y
0.1 ml).
2. Se realizará la siembra (inoculación) de tres tubos (replicados) por cada
volumen.

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 3. Coloque 10 ml de muestra homogenizada previamente en tres tubos (los
tubos más grandes) que contengan 20 ml de Caldo Lauril sulfato (CLS) de
doble concentración. Se colocarán 10 ml por cada tubo.
4. Coloque 1 ml de muestra homogenizada previamente, en tres tubos (los
tubos medianos) que contengan 10 ml de Caldo Lauril sulfato (CLS) de
concentración simple. Se colocará 1 ml por cada tubo.
5. Coloque 0.1 ml de muestra homogenizada previamente, en tres tubos (los
tubos medianos) que contengan 10 ml Caldo Lauril sulfato (CLS) de
concentración simple. Se colocará 0.1 ml por cada tubo.
6. Este rango de dilución a un rango de <3.6 NMP/100 ml hasta >1.100
NMP/100 ml.
7. Luego, incube los tubos a 35°± 0.5°C por 24 o 48± 2 horas después de la
inoculación (colocación del volumen de muestra en los tubos).
8. Examine los tubos para observar si hay producción de gas, ya sea por la
formación de burbujas de aire en el vial o campana que poseen los tubos, o
bien; por la producción de efervescencia al agitar el tubo. Los tubos que
muestren que se produjo gas son considerados positivos.
9. Anote el número de tubos negativos (sin producción de gas).
10. Anote los resultados en la hoja de datos y, con ayuda de la tabla anexa,
determine el resultado para el NMP de Coliformes totales.

Esquema para el análisis de coliformes totales en muestras de agua por la

técnica de NMP.

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 Coliformes fecales en muestras de alimentos por la técnica de NMP

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 Tabla de NMP en alimentos
Índice de NMP con un límite del 95% de confianza para varias combinaciones
de resultados positivos cundo se usan diluciones 0.1, 0.01 y 0.001

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Hoja de datos
Día 1
1. NMP significa: ____________________________________________________
2. Describa el fundamento de la técnica utilizada para esta práctica.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

Día 2
1. Haga un dibujo de cómo observó un tubo positivo y uno negativo durante la lectura
de la prueba.

2. Anote el número de tubos positivos por volumen de muestra colocado:

Volumen (1 ml) Volumen (0.1 ml) Volumen (0.01 ml)

1. Anote la combinación obtenida__________________________

2. Calcule el NMP de Coliformes totales buscando la combinación en la tabla
adjunta:
NMP de la tabla =
3. Reporte el valor obtenido como Coliformes totales en 100 ml.
Ejemplo: 23 / 100 ml

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Preguntas de investigación

1. ¿Cuáles son las características de los Coliformes?

2. De estas características, ¿cuál es la principal? ¿En cuál nos basamos para

determinar la presencia de Coliformes en el experimento?

3. De acuerdo con las características de los Coliformes estudiados, ¿cuál es la

diferencia entre Coliformes totales y fecales?

4. ¿Qué géneros de bacterias integran el grupo de los Coliformes?

5. ¿Cuál es el único indicador de contaminación fecal en el grupo?

6. ¿Por qué cree usted que es importante determinar la presencia de Coliformes

en el agua?

7. ¿Qué otras técnicas de análisis de laboratorio existen para determinar la

presencia de Coliformes?

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