UNIVERSIDAD NACIONAL SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y METALURGIA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

Práctica N° 5

“NÚMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN

ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL O VEGETAL”

LABORATORIO DE BI-241 MICROBIOLOGÍA DE LOS

ALIMENTOS

Docente: Blga. Yaranga Palomino, Kusi

Alumnos:

 Canchari Salvatierra, Luz Karina

 Huamani García, Fiorela Yaneth

 Palomino Morales, Ruth Karina

Semestre Académico: 2021-I

Grupo : jueves de 7 a 10 a.m.

Fecha: 04/11/2021

Ayacucho, noviembre del 2021

 PRÁCTICA Nº 05

NÚMERO MÁS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN ALIMENTOS DE ORIGEN

ANIMAL O VEGETAL.

I. INTRODUCCIÓN:

Los coliformes son un grupo perteneciente a las enterobacterias que además de fermentar
la glucosa también fermenta la lactosa. A este grupo pertenece E. coli que es un indicador
de contaminación fecal.

Escherichia coli pertenece a la familia Enterobacteriaceae, se caracteriza por fermentar la

lactosa con producción de ácido y gas a 37°C. Además, esta bacteria es capaz de llevar a
cabo dicha fermentación a 44°C. Su investigación en alimentos, es de interés por ser
indicador de contaminación fecal, que implica una mala manipulación del producto.

II. OBJETIVOS:
Determinar la presencia de coliformes totales y fecales, a partir de alimentos de origen
animal o vegetal.

III. MATERIALES Y EQUIPOS:

01 Probeta 100 ml

01 Matraz Erlenmeyer de 500 ml

01 Balanza analítica

01 Autoclave

01 Incubadora

01 Refrigerador
Autoclave
01 Espátula

01 Frasco de dilución de 200 ml con tapón de rosca

05 Pipetas de 1ml con graduación de 0.1 ml

04 Pipeta 10 ml

16 Placas de petri de vidrio esterilizadas de 100x15 mm

08 Tubos de prueba

01 Piseta con agua destilada

01 Asa microbiológica

01 Propipeta

Campanas de Durham.
Balanza analítica
Diluyente
Agua peptonada al 0.1 %

Medios de cultivo y reactivos

Medio bilis verde brillante lactosa.

Agar EMB

Medio SIM

Reactivo de Kovacs

Set de Coloración de gram

Alcohol al 70%
Agar EMB
IV. PROCEDIMIENTO:

Procedimiento para coliformes totales:

1. Desinfectar con alcohol al 70% toda el área de trabajo.

2. Pesar 10 g o medir 10 ml de la muestra y realizar tres o más diluciones de igual forma que
para el recuento en placa.

3. Sembrar por triplicado 1 ml de cada una de las diluciones en tubos que contengan 10 ml de
bilis verde brillante lactosa con tubos Durham preparados a concentración simple.
4. Mezclar en incubar por 24-48 horas a 35-37°C.

5. Leer a las 24 horas los tubos positivos; los negativos, reincubarlos otras 24 horas.

6. Repicar mediante una asada todos los tubos positivos al agar EMB e incubar por 24 horas a
35-37°C.
7. Anotar todos los tubos positivos que fueron confirmados por crecimiento característico en
agar EMB (colonias con brillo verde metálico).

8. Buscar en la tabla el resultado de NMP.

9. Expresar el resultado como NMP de coliformes totales = No. de bacterias / g ó ml.

Número más probable (NMP) coliformes de origen fecal

Test de Mac-Kenzei

A partir de los tubos positivos con producción de gas del NMP de coliformes totales, transferir
de cada tubo una asada de cultivo en:
• Caldo lactosado bilis verde brillante al 2% conteniendo tubo de fermentación de Durham.

• Caldo Triptofano

• Incubar los tubos 45c +0.5c por 48 horas en el baño de agua

Leer el test de Mac-Kenzei como sigue:

• Observar la producción de gas en el caldo lactosado bilis verde brillante al 2%. Revelar el
caldo triptófano, adicionando 0,2 ml del reactivo de Kovacs, agitar suavemente y observar
presencia de anillo rojo cereza en la superficie de la capa del alcohol amílico cuando la
prueba es positiva o del color original de medio cuando la prueba es negativa.

• Incubar los tubos 45c +0.5c por 48 horas en el baño de agua

Transferir de cada tubo Agregar 0,2 ml del La presencia de gas da

una asada de cultivo al reactivo de Kovacs positivo (presencia de
cado triptófano agitar y observar. anillo rojo cereza.
• Considerar como coliformes de origen fecal los que demuestren positividad en ambas
pruebas, Gas: positivo, Indol: Positivo.

• Confrontar los resultados con la tabla de NMP.

+ En cada nivel de dilución, inocular 1 ml. en cada uno de tres tubos con medio. Para calcular
el NMP de las diluciones mayores que las que señala la tabla, multiplicar el NMP por el factor
de dilución apropiado de 10, 100, 1,000, etc. Por ejemplo, si se han seleccionado tubos
provenientes de las diluciones 10-2, 10-3, 10-4, multiplicar por 10, si de las diluciones 10-3,
10-4, 10-5, multiplicar por 100.

V. RESULTADOS

NMP EN AGUA O HIELO

ANÁLISIS DE INDICADORES DE CONTAMINACIÓN BACTERIOLÓGICA

(COLIFORMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES) EN EL LAGO DE
MORONACOCHA

MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales.
 Tubo de ensayo
 Balanza analítica
  Mechero bunsen
 campana de durjan
 vortex
 Pipeta

Medios de cultivo:
 Caldo Lauril sulfato. Merck
 Caldo brilla. Merck
 Caldo EC (caldo E. coli). Merck
 Caldo Peptonado.

MUESTRA
 muestra Agua del Lago Moronacocha.

PROCEDIMIENTO
 La investigación se ajustó a un diseño correlacional, determinado por análisis de calidad
de agua con factores bacteriológicos como coliformes totales y termo tolerantes,
medidos en los puntos de muestreo siendo estos correlacionados con los Estándares
Nacionales de Calidad del Agua.
 método de tubos múltiples de fermentación (serie de 5tubos)

Procedimiento experimental lago Moronacocha

Para el procedimiento experimental es necesario tener todo el material bien estéril y contar
con las muestras que se quiere analizar como son los siguientes.

- Muestras recolectadas de los puntos de muestra del lago Moronacocha.

- Como podemos observar tenesmo 4 muestra de diferentes estaciones y de
lugaresdiferentes.

-
 - También es necesario tener diversos tubos de caldo Lauril y los tubos invertidos de
Durham en su interior y los tubos invertidos de Durham en su interior

para los cuales se efectuó en 2 fases:

para realizar la práctica como nos menciona en el artículo se requiere de diferentes fases las
cuales es muy importe para nosotros ya que nos ayuda a determinar el pH del agua

Fase presuntiva.
es una fase muy importe la cual se va realizar por diversos pasos para llegar a un resultado que
se desea como nos muestra las imágenes.

- Inoculando las muestras de agua en concentración 10ml. 1 ml y 0,1 ml en caldo Lauril.

- Incubando las muestras por 48 horas a temperatura 35°C, 37°C

- podemos observar los diferentes caldos E. coli (coliformes termotolerante) y caldo brilla
(coliformes totales
Fase confirmativa.
En la fase de confirmativa se puede observar la inoculación de las muestras positivas en caldo
de brilla (coliformes totales) y caldos E. coli (coliformes termotolerante)

- En esta fase podemos ver los tubos con los caldos E. coli (coliformes termotolerante)
negativo (izquierda) y positivo a la derecha.

- Tenemos en otro tubo los caldos de brilla (coliformes totales) negativos que está en la
parte izquierda y positivo lo encontramos en la parte derecha.

El articulo nos muestra un cuadro

donde podemos observar los
parámetros y si los resultados de
las muestras realizadas están en
estos parámetros de pH de agua
CONCLUSIONES
Podemos concluir diciendo que en el artículo trabajo durante la práctica nos va dar un
resultado de la determinó que en el Lago Moronacocha la presencia de bacterias indicadoras de
contaminación están por encima de los Estándares de calidad para aguas de conservación de
ambientes acuáticos, lo cual hace que disminuya la calidad de la misma.
Se precisa una mayor concentración de bacterias indicadoras de contaminación en la época
hidrológica de vaciante.
La cual podemos observar en los diversos pasos y método mencionado en el artículo que se
tomó para trabajar esta práctica ya que nos va servir mucho para un futuro próximo ya que son
análisis de indicadores de contaminación bacteriológica (coliformes totales y termotolerante),
la cual es muy importe para saber cómo se realiza el análisis de indicadores de contaminación,
más en nuestra carrera ya que nosotros necesitamos un constante análisis ya sea químicos o
físicos ya que es una sustancia  imprescindible para la vida, por sus múltiples propiedades, es
ampliamente utilizada en actividades diarias, convirtiéndose en uno de los recursos más
apreciados en el planeta, estas actividades antrópicas han modificado tanto la calidad de las
aguas, como la estructura de las comunidades biológicas debido al aumento en la carga
orgánica e inorgánica de los cuerpos de agua en las cuales desechos domésticos e industriales
se vierten a estos ecosistemas acuáticos sin tratamiento previo o pobremente tratados por lo
que constituyen una fuente constante de deterioro del medio ambiente.

Se precisa una mayor concentración de bacterias indicadoras de contaminación en la época

hidrológica de vaciante durante la práctica realizada.

Llegamos a la conclusión que al preparar la dilución de caldo lactosado bilis y hacemos

el debido procedimiento de diluciones , hacemos la lectura de positivos y negativos lo
cual luego repicamos en los tubos positivos con el agar EMB y asi podemos identificar
los coliformes totales y fecales de origen animal o vegetal

VI. CUESTIONARIO

¿Cuál es la importancia de calidad que tiene la determinación de estos microorganismos en

los alimentos?

El agua un alimento esencial para los animales

incluido el hombre, una fuente esencial para
nuestro organismo es por ello que lo
consumimos.

Estudiamos los microrganismos del agua para

determinar la calidad del agua y que
microorganismos se encuentran en ella, es por
ello que cuando analizamos la calidad de agua
con factores bacteriológicos se pueden encontrar en ella microorganismos patógenos que
indican contaminación fecal y se centralizan en la cuantificación de coliformes, este grupo está
integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el indicador universal de contaminación
fecal.
La importancia de analizar el agua con el fin de estudiar los microrganismos que están
presentes en ella y así determinar si es apto o no par el consumo humano ya que por no ser
agua tratada esta puede traer muchos microorganismos patógenos que nos pueden traer
infinidad de enfermedades tales como salmonelosis (Salmonella), shigelosis (Shigella), colera
(Vibrio Cholerae), amebiasis (Entamoeba histolytica), alteraciones gastrointestinales
(Aeromonas mesófilas, Helicobacter pylori, Campylobacter); giardiasis (Giardia lamblia),
cristosporidiosis (Crystosporidium), esquistosomiasis (Schistosoma), desórdenes hepáticos
(virus de hepatitis), etc.

¿A qué tipos de alimentos se les hace la investigación de E. Coli?

Desafortunadamente no se puede saber si un alimento

está contaminado con Escherichia coli (E. coli) por su
aspecto, olor o sabor. Aunque la mayoría de los tipos de
bacterias de E. coli es inofensiva, ciertas cepas pueden
causar enfermedades graves transmitidas por los
alimentos.

Los alimentos que se han vinculado a la E. coli incluyen

 El agua
 La carne vacuna
 Los brotes
 Las espinacas
 La lechuga
 Las ensaladas listas para comer
 La fruta
 La leche cruda
 La harina
 La masa para galletas crudas
 Las semillas germinadas crudas contaminadas