INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

ECOLOGÍA MICROBIANA
PRÁCTICA 3. ANÁLISIS DE LA CALIDAD DEL AGUA II.
DETERMINACIÓN MICROBIOLÓGICA
4QM1 | EQUIPO

3
INTEGRANTES: PROFESORES:
REYES FERMÍN BRENDA ITZEL MARTÍNEZ GÓMEZ GABRIELA
SOLANO MARTÍNEZ DALIA ITZEL MEJIA COAHUILA TRINIDAD
MARTINEZ MARTINEZ DIEGO GONZÁLEZ MORENO IRMA
PÉREZ ESPINOSA LUZ TONANTZIN SÁNCHEZ SÁNCHEZ NIDIA

18/04/2023
 Introducción

La contaminación fecal Sin embargo, dichos

de las aguas superficiales microorganismos
es un problema que enteropatógenos aparecen
incide directamente en la en cantidades bajas en
salud humana dada la aguas naturales, por lo cual
transmisión de su detección en el laboratorio
microorganismos, tales se logra con cierta dificultad.
como enteropatógenos.

(Barrantes, K. et al., 2013)

 Microorganismos indicadores de contaminación fecal

Coliformes totales: Coliformes termotolerantes

Grammnegativas. (fecales):
No forman esporas.
Aerobios o anaerobios
facultativos.
Fermentadoras de lactosa
con producción de ácido y
gas (incubación a 37°C
por 48h).
(BIOMÉRIEUX, 2022)
Fermentadoras de lactosa
con producción de ácido y
gas (incubación a 44°C
por 48h).
Predomina Escherichia
coli.
Citrobacter, Klebsiella y
Enterobacter.
(Gobierno de México, 2019)
Características de indicadores de contaminación
fecal:

Presencia constante en materia

fecal.
Exclusividad en materia fecal.
Abundancia en la materia fecal.
Incapacidad de reproducción en
el agua.
Sobrevivencia semejante a la de
los organismos enteropatógenos.
Facilidad para demostrarse en el
laboratorio.
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987.
Calidad del Agua. Determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes
Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.

Prueba presuntiva
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987.
Calidad del Agua. Determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes
Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.

Prueba confirmativa E. coli presuntiva:

Inocular en tubos
Coliformes totales: Coliformes fecales:
44°C por 24h de agua de triptona
37°C por 48h 44°C por 48h

Añadir 0.2 - 0.3mL de

reactivo de Kovacs
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987.
Calidad del Agua. Determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes
Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.

Prueba completa
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987.
Calidad del Agua. Determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes
Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.

Cálculos

2 2 1

28 NMP/100mL
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987.
Calidad del Agua. Determinación del Número Más Probable (NMP) de Coliformes
Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.

Cálculos
En caso de combinaciones Ejemplo:
33.3mL
inaceptables:
2 3 1
1 0 2

A= mL de muestra en tubos negativos 10mL+0mL+0.2mL 10.2mL

B= mL de muestra en todos los tubos
 Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-102-1987.
Calidad del Agua. Detección y Enumeración de Organismos Coliformes,
Termotolerantes y Escherichia coli presuntiva. Método de Filtración en Membrana.

´Método recomendado cuando se sabe que

el grado de contaminación por organismos
coliformes debe ser bajo o nulo.
Se basa en la filtración de una alícuota de
la muestra a través de una membrana
compuesta por esteres de celulosa que
retiene los organismos, colocando la
membrana ya sea en un medio de cultivo
selectivo de agar lactosado o en un Coliformes totales: 37°C por 24h
cojinete absorbente saturado con un medio Coliformes fecales: 44°C por 24h
líquido lactosado.
Criterios Ecológicos de la Calidad del Agua

Coliformes totales: Coliformes fecales:

*En cuerpos de agua lóticos (RENAMECA, 2022)

Criterios Ecologicos De Calidad Del Agua CE-CCA-001/89

 OBJETIVO
Determinar el Número Más Probable (NMP) de
microorganismos coliformes totales, microorganismos
coliformes fecales (termotolerantes) y Escherichia coli
presuntiva en una muestra obtenida de un cuerpo de
agua.
MATERIALES
 MATERIALES

Muestra de agua. 1 Pipeta 1 Gradilla.

serologica de 1
mL.

1 Pipeta
serologica de 10
mL.
1 Botella de vidreo de
150 mL.
 MEDIOSDE CULTIVO,
SOLUCIONES Y REACTIVOS

AGAR EOSINA AZUL DE CALDO LACTOSADO CALDO BILIS LACTOSA VERDE BRILLANTE AGUA DE TRIPTONA
METILENO (EMB)

Composición: Composición: Composición:
Composición:

Extracto de carne 3.0 g Bilis de buey deshidratada 20.0 g Triptona 20.0 g
Peptona de caseína 10.0 g Peptona 5.0 g Lactosa 10.0 g NaCl 5.0 g
Lactosa 5.0 g Lactosa 5.0 g Peptona 10.0 g Agua destilada 1000 mL
Sacarosa 5.0 g pH final 6.9 Verde brillante 0.0133 g
Fosfato dipotásico 2.0 g pH final 7.2
Agar 13.5 g
Eosina Y 0.4 g
Azul de metileno 0.065 g
Agua, aforar a 1000 mL
Ajustar a pH 7.2
 MEDIOSDE CULTIVO,
SOLUCIONES Y REACTIVOS

3 Tubos de ensaye con 6 Tubos de esaye con 18 Tubos de ensayo con caldo
10 mL de caldo caldo lactosado, bilis lactosa verde brillante con
lactosado doble concentracion sencilla campana de Durham.
concentracion con con campana de
campana de Durham. Durham.
 MEDIOSDE CULTIVO,
SOLUCIONES Y REACTIVOS

9 Tubos con 10mL 9 Cajas Petri con agar Reactivo de

de agua de eosina azul de metileno Kovacs para indol.
triptona. (EMB).
METODOLOGÍA
 B) Prueba 1.Etiquetar perfectamente
A) Muestreo.
presuntiva. cada uno de lostubos.

Mezclar perfectamente
2. Inocular 3 tubos con
la muestra, agitandola
caldo lactosado doble
de manera vigorosa
concentracion con 10 mL
de muestra cada uno.
3. Inocular 3 tubos con 4.Inocular 3 tubos con 5. Incubar todos
caldo lactosado caldo lactosado los tubos a 37°C
concentración sencilla concentración sencilla con por 48 horas.
con 1 mL de la mestra. 0.1 mL de la muestra.

6. Observar si
hubo produccion
de gas.
C) Prueba confirmativa

1.Inocular con dos asadas 2. Incubar una serie de 3. Incubar otra seri
2 series de tubos con tubos a 37°C por 48 horas. de tubos a 44°C por
caldo BLVB. 48 horas.
 4. Inocular los tubos de D) Prueba completa.
agua triptona necesarios.
Los tubos positivos de Sembrar por estria
caldo BLVB incubarlos a cruzada una placa de
37°Cen prueba agar EMB.
confirmativa.
C) Cálculos

Observar la Registrar el numero de

producción de tubos positivos.
gas en los tubos.
Realizar la siguiente tabla
para cada prueva
confirmativa.

Alícuota (mL) 10 1 0.1

Tubos
positivos
RESULTADOS
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 1
Tabla 1. Resultados de la Prueba Confirmativa
para la Cuantificación de Microorganismos
Coliformes Totales.

Figura 1. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
coliformes totales
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 2
Tabla 2. Resultados de la Prueba Confirmativa
para la Cuantificación de Microorganismos
Coliformes Totales.

Figura 2. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
coliformes totales
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 1
Tabla 3. Resultados de la Prueba Confirmativa
para la Cuantificación de Microorganismos
Coliformes Fecales.

Figura 3. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
coliformes fecales.
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 2
Tabla 4. Resultados de la Prueba Confirmativa
para la Cuantificación de Microorganismos
Coliformes Fecales.

Figura 4. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
coliformes fecales.
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 1
Tabla 5. Resultados de la Prueba Confirmativa
para la Cuantificación de Escherichia coli
Presuntiva.

Figura 5. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
Escherichia coli presuntiva.
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 2
Tabla 6. Resultados de la Prueba
Confirmativa para la Cuantificación de
Escherichia coli Presuntiva.

Figura 6. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
Escherichia coli presuntiva.
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 1
Tabla 7. Resultados de la Prueba Completa
para la Cuantificación de Escherichia coli
Completa.

Figura 7. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
Escherichia coli completa.
 RESULTADOS DE LA SECCIÓN 2
Tabla 8. Resultados de la Prueba Completa para
la Cuantificación de Escherichia coli Completa.

Figura 8. Resultados de la prueba

confirmativa para la cuantificación de
Escherichia coli completa.
 conclusiones
La estación 2 de la sección 1 presentó un mayor número de todos los grupos
microbianos con respectos a las otras estaciones.
La estación
La estación 1 de la sección 1 presento una menor cantidad de pruebas
presuntivas positivas para todos los grupos microbianos.
La estación 3 de la sección 1 presenta la mayor concentración de Escherichia
coli presuntiva y confirmativa.
El agua de las cascadas de Atlihuetzia no son aptas para la realización de
actividades recreativas.
 CUESTIONARIO
1. Mencionar que inhibidor selectivo contiene el medio de BLVB.
En el medio de cultivo BL (verde brillante bilis lactosa), la peptona aporta los nutrientes
necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de
coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo
coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.
2. ¿Qué entiende, en general, por microorganismos indicador?
Los microorganismos indicadores son organismos, o sus productos metabólicos, cuya presencia en
los alimentos se utiliza para evaluar el proceso de fabricación y la calidad del alimento o
determinar la vida útil del mismo. Los microorganismos indicadores son organismos, o sus
productos metabólicos, cuya presencia en los alimentos se utiliza para evaluar el proceso de
fabricación y la calidad del alimento o determinar la vida útil del mismo.
Los indicadores con frecuencia indican materias primas contaminadas o tratamientos no
satisfactorios desde el punto de vista sanitario. Un indicador ideal sería aquel que tiene el mismo
origen que el patógeno, misma o menor sensibilidad a tratamientos térmicos, que sea fácil y
rápido de detectar y de manera más económica.
 CUESTIONARIO
3. ¿En qué casos se utiliza Clostridium perfringens como microorganismo indicador de
contaminación fecal?
Clostridium perfringens es considerado un importante indicador de contaminación fecal que
puede señalar la presencia de microorganismos patógenos de detección difícil y costosa, e indicar
la eficacia de los procesos de filtración en la potabilización del agua.
Clostridium perfringens es un bacilo Gram positivo anaerobio, formador de endosporas, que se
encuentra normalmente en suelos y aguas residuales y hace parte de la microbiota del intestino
de humanos y animales. Este microorganismo es el agente causal de varias enfermedades
humanas, incluyendo gangrena gaseosa y gastroenteritis de origen alimentario.
MUCHAS GRACIAS
POR SU ATENCIÓN
 REFERENCIAS
Barrantes, K., Chacón, L., Solano, M., Achí, R. (2013). Contaminación fecal del agua superficial de la
microcuenca del río Purires, Costa Rica, 2010-2011. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología,
33(1).
BIOMÉRIEUC (2022). Coliformes. Recuperado de
https://www.biomerieux.es/coliformes#:~:text=Las%20bacterias%20coliformes%20se%20utilizan,a%2035%E2
%80%9337%20%C2%B0C
Gobierno de México (2019). Bacterias Coliformes Fecales o Termotolerantes. recuperado de
http://atlasagua.imta.mx/Views/bcf.html
Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-042-1987. Calidad del Agua. Determinación del Número Más
Probable (NMP) de Coliformes Totales, Coliformes Fecales (Termotolerantes) y Escherichia coli presuntiva.
Norma Mexicana de Análisis. NMX-AA-102-1987. Calidad del Agua. Detección y Enumeración de
Organismos Coliformes, Termotolerantes y Escherichia coli presuntiva. Método de Filtración en Membrana.
Criterios Ecologicos De Calidad Del Agua CE-CCA-001/89. recuperado de
http://legismex.mty.itesm.mx/acu/acca001.pdf
RENAMECA. Indicadores de la calidad del agua superficial y subterránea. CONAGUA. Secretaria de
medio ambiente y recursos naturales. Recuperado de
http://sina.conagua.gob.mx/sina/mapas/Calidaddelagua.pdf